公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定被引量：4: 2010年; 利用DNA同源重组方法(基因打靶)对动物基因组进行修饰是转基因研究的重要手段之一。为了构建一个高效的通用型基因打靶载体,本研究以pBS246质粒为骨架,在两个LoxP序列之间插入正筛选标记新霉素磷酸转移酶(neo)基因和绿色荧光蛋白(EGFP)基因;在两个LoxP序列外侧分别插入两组携带"8碱基"酶切位点的多克隆位点序列(MCS-1和MCS-2)和负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因,构建成通用型基因打靶载体pGT-V1,并且在C2C12细胞中验证了载体中各个元件的功能。该载体具有如下特点:1)在载体中引入绿色荧光标记,可以实时监控载体的转染效率,而转染效率的提高为高效基因打靶提供了保证;2)在两个LoxP位点间插入绿色荧光标记,可以直观监测打靶后遗留的筛选标记的去除情况,并且可以通过流式细胞仪或免疫磁珠法,将最终去除了筛选标记的阳性细胞(即丢失绿色荧光的细胞)分选出来,降低筛选标记在中靶细胞中可能产生的负面影响;3)采用"8碱基"酶切位点的MCS序列,便于DNA大片段的连接和重组,极大提高了该载体的通用性。总之,该载体优化了基因打靶的技术手段,为有效开展基因打靶和转基因动物研究提供了新平台。; 李军华韩翠芹邓捷王华岩; 关键词：同源重组打靶载体 CRE-LOXP

猪Myostatin启动子上游调控序列的鉴定: 肌肉生长抑制素(Myostatin)基因是生长转化因子β(transforming growth factor-beta，TGF-β)超家族中的一员，是动物肌肉生长发育过程中一个重要的负调控主效基因。Myostatin基...; 邓捷; 关键词：启动子活性转录调控; 文献传递

一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法: 一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法，构建了一种包含NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体pSP-NRAMP1-HA，以及一种基于该载体的包含NRAMP1基因的秦川牛成纤维细胞系，利用该细胞系作...; 王华岩程祥邓捷马晓玲孟书燕来威锋; 文献传递

通用型双筛选标记打靶载体的构建: 基因打靶技术通过外源DNA与受体细胞染色体DNA同源序列之间的重组来改造基因组特定靶位点，从而改变生物的遗传特性，是转基因动物研制的关键手段。本研究希望能够建立一套切实可行的基因打靶载体系统，为开展动物转基因研究提供有价...; 韩翠芹邓捷王华岩; 关键词：基因打靶技术转基因动物外源DNA 基因重组; 文献传递

肌肉增强子因子2对猪肌肉生长抑制素启动子活性的调节被引量：3: 2012年; 肌肉生长抑制素(Myostatin,Mstn)是转化生长因子-β超家族的成员,在哺乳动物的骨骼肌生长和分化过程中起负调控作用,其转录调控受到多个基因的影响,其中肌肉增强子因子2(MEF2)是重要的调控因子之一。因此,对猪Mstn启动子上MEF2位点及其作用方式的探讨具有重要意义。首先,通过PCR方法扩增了猪Mstn基因上游1 969 kb的启动子序列,利用生物信息学方法分析该序列包含3个MEF2的结合位点;其次,采用逐步删除的方法获得5个长度不等的启动子,用荧光素酶报告系统评估了它们在小鼠成肌细胞C2C12中的活性。其次,转入含有MEF2结合位点的启动子片段和MEF2C表达载体,可以显著增强启动子活性2～6倍,高表达另一亚型MEF2A则启动子活性没有明显改变。最后,转入MEF2C表达载体,用实时定量PCR和Western blotting方法检测Mstn的转录和蛋白水平的变化,结果发现mRNA升高了2～4倍;在肌管细胞中,蛋白翻译水平也有显著升高。这些结果显示,MEF2C可以通过激活Mstn参与猪肌肉生长和发育阶段的调节。研究为Mstn基因的转录调控提供了有效的作用靶点和效应分子,为进一步探讨Mstn的功能调控提供了一种新的思路。; 李佳邓捷张军林成德王华岩; 关键词：转录调控启动子活性 C2C12细胞

全选清除导出

共1页<1>

邓捷