赵玉红
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用于筛选COPS3相互作用蛋白酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-COPS3的构建及鉴定
- 2007年
- 目的用COPS3基因片段构建酵母双杂交GAL4系统的诱饵载体pGBKT7-COPS3,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。方法运用RT-PCR技术从骨肉瘤细胞系SOSP-9607中扩增出COPS3基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用。结果成功获得COPS3基因片段,其表达蛋白对酵母菌AH109无毒性,对报告基因亦无激活作用。结论可以利用酵母双杂交GAL4系统来研究与COPS3相互作用蛋白。
- 苏海川赵玉红陈军张伟李陕区
- 关键词：酵母双杂交系统报告基因
- 17β雌二醇对人桡动脉舒张作用的体外实验
- 2007年
- 目的:研究17β雌二醇(17β-estradiol,E2)对人桡动脉(RA)的舒张作用及其机制.方法:采用离体血管灌流的方法,观察E2对人RA的舒张作用以及NO合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-argininemethylester,L-NAME),8-Br-cGMP和鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝(MB)对这一过程的影响.结果:观察到E2(0.1～100μmol/L)可剂量依赖性地舒张血管且具有内皮依赖性;8-Br-cGMP(0.1～1×103μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应.10μmol/LMB使E2舒张人RA的作用完全消失.10μmol/LL-NAME能部分抑制E2舒张TA的作用.结论:E2对RA的急性舒张作用具有内皮依赖性.此作用是E2通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌NO、进而可能引起血管平滑肌细胞内的cGMP水平升高实现的.
- 苏海川赵玉红韦耿泽陈军李陕区
- 关键词：雌二醇桡动脉环GMP
- 抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系的建立及其单克隆抗体鉴定被引量：3
- 2003年
- 目的 :制备分泌抗乙型肝炎病毒末端蛋白mAb杂交瘤并研究杂交瘤细胞及所产生抗体的特性 .方法 :用经原核表达的乙型肝炎病毒末端蛋白 (HBV TP)免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 /0融合 ,经筛选和克隆化建立杂交瘤细胞系 ,然后用ELISA法筛选出阳性克隆 .以免疫组化ABC方法研究杂交瘤细胞分泌的mAb特性 .结果 :共筛选出 3株能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系 ,其杂交瘤细胞经过 1 0 0d连续培养 ,mAb分泌稳定 ,特异性强 ,腹水抗体效价免疫组化ABC法 1∶1 0 0 0 .免疫组化检测显示其相应抗原在肝炎及肝硬变组织中呈高表达 (80 % ) ,正常肝组织中未见阳性反应 ;其抗原主要分布于细胞质内 .结论 :此 3株抗乙型肝炎病毒末端蛋白杂交瘤细胞分泌的mAb具有特异亲合性 。
- 赵玉红高萍
- 关键词：HBV杂交瘤单克隆抗体免疫组化
- pEGFP-BLCAP真核表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:构建真核表达载体pEGFP-BLCAP并转染骨肉瘤细胞SOSP-M。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-M细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因的cDNA,测序正确后插入真核表达载体pEGFP-C2中,构建的重组质粒经脂质体介导转染SOSP-M细胞,经观察荧光蛋白表达和Western blot鉴定目的蛋白在转染后的SOSP-M细胞中的表达情况。结果:RT-PCR成功地扩增出一条约280bp的片段,经限制性内切酶分析和DNA序列测定证实目的基因cDNA已插入重组质粒;荧光显微镜下观察到转染后的SOSP-M细胞发出较强绿色荧光,Western blot证明BLCAP能以融合蛋白的形式在SOSP-M细胞中获得表达。结论:构建了真核表达载体pEGFP-BLCAP并成功表达目的蛋白。
- 苏海川范德刚赵玉红陈军邹爱民李陕区
- 关键词：克隆
- COPS3基因cDNA的克隆及表达被引量：1
- 2007年
- 目的:克隆COPS3基因cDNA,构建其原核融合蛋白表达载体并表达和鉴定。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得COPS3基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定。将COPS3基因插入pET28 a融合蛋白表达载体中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析。免疫印迹法鉴定COPS3蛋白的表达。结果:cDNA测序证明,获得了COPS3基因cDNA,其序列与Genebank中报道序列完全一致。酶切分析表明,成功构建了含COPS3基因的pET28 a融合蛋白表达载体。SDS-PAGE以及免疫印迹法鉴定分析表明,COPS3蛋白获得高效表达,分子质量为51Ku,表达量约占菌体总蛋白的30%。结论:成功克隆和表达了COPS3 cDNA。
- 苏海川陈军赵玉红李改良李陕区
- 关键词：CDNA克隆骨肉瘤
- BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系被引量：6
- 2003年
- 目的 :了解BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系。方法 :采用SABC法 ,对临床收集骨肉瘤病理标本进行检测 ,观察BLCAP蛋白表达情况 ,结合临床随访结果 ,判断BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度之间的关系。结果 :BLCAP蛋白在原发骨肉瘤组织中表达阳性率约为 6 5 .6 % ,而在复发性骨肉瘤组织中表达阳性率只有 2 5 .0 %。结论 :BLCAP蛋白表达水平与骨肉瘤恶性程度之间有一定的相关性 。
- 苏海川赵玉红范德刚范清宇张鹏文艳华刘云燕
- 关键词：BLCAP基因骨肉瘤复发恶性程度蛋白表达
- 抗甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备及应用被引量：1
- 2006年
- 目的:制备分泌特异性抗人甲状腺球蛋白(Tg)单克隆抗体的杂交瘤,建立检测Tg的ELISA方法。方法:以人甲状腺球蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合制备分泌抗人TgmAb,并对其进行特异性鉴定,建立双抗体ELISA夹心法检测Tg。结果:共获得7株可稳定分泌抗人TgmAb的杂交瘤细胞株FMU-TG1～FMU-TG7,用单抗FMU-TG和Tg多克隆抗体建立了检测人Tg夹心ELISA试剂盒,敏感性可达30ng/ml,结论:成功制备了抗人TgmAb并建立了检测人Tg夹心ELISA试剂盒,对Tg的基础研究及临床应用具有重要意义。
- 赵玉红李琦宋朝君王鑫陈丽华张赟金伯泉
- 关键词：甲状腺球蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附实验
- 肿瘤坏死因子凋亡相关配体基因的克隆和表达被引量：2
- 2003年
- 目的 :克隆、表达和鉴定肿瘤坏死因子凋亡相关配体 (TRAIL) .方法 :从培养的人外周血淋巴细胞中提取总RNA ,经RT PCR获得TRAIL基因 .将该基因克隆到pGEM Teasy载体中 ,测序鉴定 .将TRAIL基因插入pBV2 2 0表达载体中 ,4 2℃诱导表达 4～ 5h ,进行SDS PAGE分析 .免疫印迹法鉴定TRAIL蛋白的表达 .结果 :DNA测序证明 ,获得了TRAIL基因 ,其序列与GenBank中报道序列完全一致 .SDS PAGE分析表明 ,TRAIL蛋白获得高效表达 ,分子质量为 17ku ,表达量约占菌体总蛋白的 30 % .免疫印迹法鉴定显示 ,该蛋白可与鼠抗人TRAILmAb产生阳性反应 .结论
- 苏海川赵玉红张惠中范清宇
- 关键词：TRAIL逆转录聚合酶链反应基因表达
- 抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定
- 2002年
- 目的 建立分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞系 ,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 用成骨肉瘤细胞系 (OSPS 96 0 7)免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水mAb制备。取骨肉瘤手术标本 (6 0例 )及正常组织 (6种 ) ,用mAb进行免疫组化ABC染色。结果 筛选出 2株能持续、稳定分泌特异性抗骨肉瘤mAb的杂交瘤细胞株 (6E5和 3F7)。 2株杂交瘤细胞经过 10 0d连续培养 ,分泌mAb的特性稳定、mAb特异性强、效价高。免疫组化染色检测表明 ,mAb 6E5和 3F7针对的抗原 ,在成骨肉瘤组织及成骨肉瘤细胞系均呈高表达 (70 % )。针对mAb 6E5的抗原主要分布于细胞核上 ,针对mAb 3F7的抗原主要分布于细胞浆内。 6种正常组织中除胃粘膜可见弱阳性反应外 ,其余未见明确的阳性反应。结论此两株杂交瘤细胞分泌的mAb对成骨肉瘤细胞具有特异亲和性 ,为成骨肉瘤的早期诊断。
- 赵玉红张惠中
- 关键词：成骨肉瘤杂交瘤单克隆抗体免疫组化染色
