赵恺
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2在U251胶质瘤细胞侵袭迁移中的作用被引量：2
- 2015年
- 目的 观察应用RNA干扰沉默U251人胶质瘤细胞中富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）的表达对细胞侵袭迁移能力的影响.方法 将Pyk2短发夹RNA（shRNA）和对照shRNA分别转染U251细胞,并将细胞分为Pyk2 shRNA组、对照shRNA组及未处理组.采用Western blot检测转染前后U251细胞中Pyk2的蛋白表达及磷酸化水平.采用Transwell迁移及侵袭实验检测转染前后U251细胞的迁移及侵袭能力.应用免疫荧光染色观察转染前后细胞黏着斑的形态变化,应用Western blot检测侵袭相关基质金属蛋白酶（MMPs）的表达.结果 Pyk2 shRNA组U251细胞中Pyk2的蛋白表达及磷酸化水平明显下调.Pyk2沉默能显著抑制U251细胞的迁移及侵袭能力分别达72％及75％.未处理组细胞黏着斑面积较小,呈细丝状,而Pyk2 shRNA组细胞黏着斑面积增大,呈点状或斑片状.Pyk2 shRNA组细胞MMP-2和MMP-9的表达水平分别为0.24±0.07和0.18±0.06,显著低于未处理组（设定为1,P＜0.05）.结论 Pyk2沉默能够抑制U251胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力,可能与其参与调控黏着斑的周转及MMPs的表达有关.
- 朱蒙周华张辰赵鹏飞陈磊赵恺王垒垒于圣平杨学军
- 关键词：胶质瘤RNA干扰迁移
- 敲低S100A4表达对胶质瘤细胞系SNB19侵袭和迁移的影响被引量：5
- 2014年
- 目的观察siRNA敲低S100A4的表达后对胶质瘤细胞系SNB19侵袭和迁移能力的影响。方法 S100A4干扰RNA(siRNA)敲低SNB19细胞中S100A4的表达(n=3),同时设control组(空白对照组,n=3)和siRNA-NC组(阴性对照组,n=3),采用RT-PCR和western blot方法分别检测S100A4被有效敲低,划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力的变化,western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和E-cadherin的表达变化,倒置相差显微镜观察细胞片状伪足变化情况。结果 siRNA技术可显著下调SNB19细胞中S100A4 mRNA和蛋白的表达水平,siRNA-NC组和siRNA-S100A4组的mRNA较control组的表达量分别是0.97±0.07和0.21±0.04(P<0.01),三个组的蛋白相对表达量分别为78.12%±2.63%、77.16%±3.00%和37.95%±2.71%(P<0.01);干扰成功后,siRNA-S100A4组与control组相比,细胞的迁移和侵袭能力分别降低了46%和55%,MMP-9和MMP-2的蛋白表达水平分别下调了62%和68%,E-cadherin的表达水平上调了154%,细胞片状伪足较对照SNB19细胞相比明显变小,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论敲低S100A4表达可降低胶质瘤细胞系SNB19的侵袭和迁移能力,提示S100A4可能成为抗胶质瘤侵袭迁移治疗的有效靶点。
- 赵鹏飞杨学军张辰陈磊周华朱蒙王垒垒赵恺于圣平林雨海龙刘波周星辰李帅
- 关键词：S100A4胶质瘤RNA干扰迁移
- miR-451对U251细胞迁移运动能力的影响及其潜在机制被引量：3
- 2014年
- 目的观察miR-451对人脑胶质瘤细胞系U251迁移运动能力的影响，探讨miR-451影响U251细胞运动的潜在机制。方法qRT．PCR检测人脑胶质母细胞瘤组织标本及正常脑组织标本miR-451相对表达量。利用U251细胞系进行miR-451对人脑恶性胶质瘤细胞迁移运动能力影响的体外实验研究，实验分为转染miR-451抑制物组（miR-451inhibitor）和空白对照组（N．C．）。运用脂质体Lipofetmiane2000将miR-451抑制物序列（5’-AACUCAGUAAUGGUAACGGUUU-3’）转染进入U251细胞中，同时设立空白对照组。应用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验观察各组细胞迁移运动能力的强弱，明确miR-451对U251细胞迁移能力的影响。Westernblot检测各组细胞GTP—Racl及Racl蛋白水平，从其表达水平与miR-451相对表达量的相互关系探讨miR-451影响U251细胞迁移运动能力的可能机制。结果qRT—PCR检测显示胶质母细胞瘤组织标本中miR-451的相对表达量较对照脑组织标本降低（P〈0．01）。Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验发现转染miR-451抑制物组U251细胞迁移运动能力较对照组显著提高（P〈0．01）。Westemblot检测表明转染miR-451抑制物组U251细胞中GTP-Racl含量较对照组升高（P〈0．01）而Racl蛋白水平没有差异（P〉0．05）。结论miR-451可通过抑制13251细胞中Racl的激活限制细胞迁移运动能力。
- 赵恺王垒垒朱蒙于圣平赵鹏飞周华张辰陈磊明浩朗杨学军
- 关键词：神经胶质瘤迁移
- 高尔基体与细胞运动方向关系的体内外实验研究被引量：2
- 2013年
- 目的 观察高尔基体与细胞运动方向的关系,探讨高尔基体作为细胞运动方向指示的可行性及其在研究细胞迁移运动方面的生物学意义.方法 选择大鼠C6胶质瘤细胞、人脑U251和SNB19胶质瘤细胞,通过细胞免疫荧光染色观察细胞迁移实验中高尔基体与细胞运动方向的关系,计数高尔基体朝向划痕空白区的细胞所占的百分比；鬼笔环肽细胞骨架染色,观察高尔基体与细胞运动伪足的位置关系；免疫组化染色观大鼠脑胶质瘤组织标本和人脑胶质瘤组织标本中坏死区周围细胞高尔基体的定位与细胞运动方向的关系,计数高尔基体背离坏死区的细胞所占百分比.结果 细胞迁移实验中,位于划痕两侧的绝大多数C6细胞（83％±6％）、U251细胞（80％±7％）、SNB19细胞（82％±6％）的高尔基体朝向划痕空白侧；鬼笔环肽细胞骨架染色显示U251细胞和SNB19细胞中高尔基体的定位方向与细胞的伪足伸展方向一致.免疫组化染色显示,肿瘤组织标本中坏死区周围肿瘤细胞的高尔基体多数（鼠脑80％±7％；人脑82％±6％）背向坏死侧.结论 无论在体内还是在体外环境中,细胞高尔基体的定位方向对于判断细胞的迁移运动方向都具有参考意义,从而为在体研究肿瘤细胞侵袭的生物学行为和抗迁移治疗疗效的观察提供了有力的观测指标.
- 刘彬刘志峰任炳成陈聪于圣平明浩朗王垒垒赵恺杨学军张斌
- 关键词：神经胶质瘤细胞运动高尔基体
- 敲低皮层肌动蛋白的表达下降胶质瘤细胞迁移和侵袭能力被引量：5
- 2014年
- 目的探讨运用特异性干扰RNA抑制皮层肌动蛋白表达后对人胶质瘤细胞迁移、侵袭能力的影响。方法免疫组化染色检测天津医科大学总医院神经外科癫痫及胶质瘤手术治疗患者的正常脑组织及胶质母细胞瘤标本中皮层肌动蛋白的表达：体外常规培养人恶性胶质瘤细胞系U251并分为RNA干扰组、阴性对照组、空白对照组，分别转染干扰RNA序列、阴性对照序列及等量Lipofetmiane2000。48h后Westernblotting、免疫荧光染色检测3组细胞皮层肌动蛋白的表达：细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验评价细胞迁移、侵袭能力的高低。结果免疫组化染色检测显示皮层肌动蛋白在正常脑组织呈弱阳性表达。在胶质母细胞瘤为强阳性表达：Westernblotting检测显示RNA干扰组细胞皮层肌动蛋白表达低于空白对照组与阴性对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）；免疫荧光染色显示皮层肌动蛋白表达于细胞质特别是与细胞伪足密切相关的细胞膜周围。划痕实验结果显示RNA干扰组、空白对照组、阴性对照组迁移细胞数分别为18．17±4．07、94．00±4．33、92．67±5．24；Transwell细胞侵袭实验显示侵袭细胞数分别为31．25±2．98、125．00±4．57、127．00±3．56；与空白对照组与阴性对照组比较，RNA干扰组迁移、侵袭细胞数均减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论皮层肌动蛋白在胶质母细胞瘤组织中的表达高于正常脑组织。敲低U251细胞皮层肌动蛋白的表达后细胞的迁移、侵袭能力下降，提示皮层肌动蛋白可作为脑胶质瘤治疗的一个靶点。
- 王垒垒赵恺朱蒙任炳成刘志峰于圣平赵鹏飞周华张辰陈磊明浩朗杨学军
- 关键词：神经胶质瘤皮层肌动蛋白RNA干扰
- Arp2/3复合物表达沉默对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响被引量：9
- 2013年
- 目的研究RNA干扰技术沉默Arp2/3复合物后对胶质瘤细胞片状伪足以及运动能力的影响。方法脂质体介导Arp3-siRNA转染体外常规培养的U251胶质瘤细胞,同时设siRNA-NC(阴性对照组,n=3)组和siR-NA-N(空白对照组,n=3)组。RT-PCR和western blot方法验证三组中Arp3 mRNA和蛋白的表达情况。免疫荧光检测不同处理组的Arp2/3复合物定位以及细胞形态变化。Transwell细胞侵袭实验和划痕实验检测三组细胞的运动能力。结果三组细胞的Arp3 mRNA相对表达水平分别为:19.33%±2.08%、97.33%±2.38%和96.67%±2.52%(P<0.01);三组细胞蛋白相对表达量分别为20.00%±3.00%、85.33%±3.21%和84.33%±4.04%(P<0.01)。与siRNA-N组比较,siRNA-Arp3组胶质瘤细胞Arp3 mRNA和蛋白的表达水平下调分别达80%和76%。免疫荧光结果显示siRNA-Arp3组细胞较siRNA-NC组和siRNA-N组细胞片状伪足明显变小甚至消失。Transwell细胞侵袭实验和划痕实验显示siRNA-Arp3组胶质瘤细胞运动能力较siRNA-N组分别下降达69%(P<0.01)和68%(P<0.01)。结论 Arp2/3复合物通过影响片状伪足的形成,从而在胶质瘤细胞的运动过程中发挥重要作用,提示Arp2/3复合物可作为治疗脑胶质瘤的一个候选靶点。
- 刘志峰杨学军刘彬陈聪任炳成王垒垒赵恺于圣平明浩朗朱蒙
- 关键词：胶质瘤RNA干扰
