蒋磊
- 作品数：44 被引量：100H指数：6
- 供职机构：浙江大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CTLA-4基因多态性与Graves病预后关系的研究被引量：3
- 2006年
- 目的:对Graves病(GD)患者CTLA-4基因外显子1第17密码子49位点A/G多态性与GD患者的临床特点及其对抗甲状腺药物的疗效关系进行研究,为临床治疗的决策提供依据。方法:根据Graves病患者服用抗甲状腺药物的效果及其停药后是否复发分为A组(治疗效果较好、预后好组)与B组(难治性或易复发组)。应用PCR技术并采用限制性内切酶BbvI来测定其外周血单个核细胞CTLA-4基因外显子1第17密码子49位点A/G多态性。分析其基因表型、基因频率与临床表现及预后的关系。结果:难治性或易复发的GD患者GG基因型及等位基因G频率明显高于治疗效果较好、预后好的GD患者,而AG基因型及等位基因A频率则明显低于治疗效果较好、预后好的GD患者。结论:CTLA-4基因外显子1第17密码子49位点表现为GG基因型可能是Graves病患者对抗甲状腺药疗效差及甲亢易复发的重要原因。
- 沈飞霞冯文焕蒋磊汪大望权金星章海凌朱虹章惺惺
- 关键词：GRAVES病细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因多态性
- AS-mCLB1重组质粒体外抗肿瘤及化疗增敏作用被引量：3
- 2007年
- 研究反义全长小鼠细胞周期蛋白B1重组质粒(pAS-mCLB1)体外抗肿瘤及化疗增敏作用。扩增后少量抽提并纯化pAS-mCLB1,通过脂质体将其转染入小鼠露易丝肺癌(LL/2)细胞,RT-PCR和Western印迹测定细胞内细胞周期蛋白B1的表达,观察转染后细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。细胞转染48h后,用化疗药物健择(gemcitabine;0.2μmol/L)处理24h,MTT法测定健择对细胞的杀伤作用。研究提示pAS-mCLB1转染后LL/2细胞形态明显异常,细胞内细胞周期蛋白B1表达显著下调,细胞周期阻滞于G1期,增殖受抑,凋亡增加;健择对pAS-mCLB1转染后LL/2细胞的杀伤作用显著增强。重组质粒pAS-mCLB1体外具有明显的抗肿瘤作用,并能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,估计上述作用与其下调肿瘤细胞内细胞周期蛋白B1表达,从而诱导细胞周期阻滞及凋亡等作用相关。
- 张伶魏于全宋英蒋磊陈平陈县城李继承
- 关键词：细胞周期蛋白B1细胞周期阻滞化疗敏感性
- Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制Bcl-2基因对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2gene)表达对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)CNE-2细胞的生长抑制作用。方法将构建成功的重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-15a/16-1经Lipofectamine 2000转染CNE-2细胞,RT-qPCR检测miR-15a/16-1、Bcl-2 mRNA表达水平,流式细胞术和WesternBlot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法分析细胞生长抑制情况,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色观察细胞凋亡状况。结果转染后miR-15a表达增高(F=547.525,P均<0.001);miR-16-1表达增高(F=99.979,P均<0.001);Bcl-2 mRNA表达无明显差别(F=0.220,P>0.05);Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达增高;细胞在体外凋亡明显;细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效关系。结论 Hsa-miR-15a/16-1对Bcl-2基因的靶向抑制,可体外对CNE-2细胞产生增殖抑制和促进凋亡作用。
- 张春鸿方潇碧林森黄亚施清圆吴丽萍黄振校蒋磊谭映霞廖志苏
- 关键词：鼻咽肿瘤转染流式细胞术
- 少突胶质细胞上的组胺H2受体抑制新生小鼠缺血缺氧白质损伤后少突胶质细胞分化
- 目的研究组胺H2受体(H2R)在新生小鼠缺氧缺血(NHIE)导致的白质损伤修复中的作用及机制。方法本研究采用原代培养的少突胶质细胞(OLs),并利用腺相关病毒在不同阶段干扰或过表达H2R,观察其对细胞分化的影响。在体实验...
- 蒋磊胡薇薇陈忠
- 大鼠GSK3β基因RNAi腺病毒载体的构建与鉴定及其对肝卵圆细胞增殖的促进作用
- 2012年
- 目的构建并鉴定特异性大鼠糖原合成酶激酶3β(GSK3β)基因siRNA腺病毒载体,观察其对肝卵圆细胞系WB-F344增殖的影响。方法用DNA重组技术将针对GSK3β基因不同部位所设计的2对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pGenesil-1.1中,构建shRNA表达载体pGenesil-1.1-GSK3β。分别酶切重组质粒及pDC312载体,转化连接,构建腺病毒载体pDC312-GSK3β,PCR扩增与鉴定。脂质体法介导腺病毒载体与骨架质粒pPE3-F11共转染293细胞,包装产生腺病毒颗粒AdD C3 12-GSK3β并测定滴度。取病毒上清感染WB-F34 4细胞,荧光显微镜观察细胞荧光含量,Western blotting检测GSK3β蛋白表达。CCK-8测定转染前后WBF-344增殖变化。结果经PCR酶切及Western blotting技术证实成功构建了针对大鼠GSK3β基因RNAi质粒pGenesil-1.1-GSK3β及GSK3β基因RNAi重组腺病毒载体AdDC312-GSK3β。Western blotting证实该重组腺病毒载体可抑制WBF-344细胞GSK3β的表达。CCK-8结果显示干扰GSK3β可促进WBF-344细胞增殖。结论成功构建了针对GSK3β基因RNAi的腺病毒载体,并在大鼠肝卵圆细胞系WBF-344中稳定表达,促进细胞增殖。
- 谢元康钟骏桥蒋磊季晓克郭旭张启瑜单云峰
- 关键词：GSK3ΒRNAI腺病毒肝卵圆细胞
- 卡氏肺大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化被引量：3
- 2004年
- 目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocysitis carinii pneumonia,PCP)大鼠肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophage,AM)TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化。方法采用AM体外培养技术,应用RT-PCR法分别测定脂多糖(LPS)诱导的AM中TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的动态变化。结果肺泡巨噬细胞受LPS刺激后,PCP模型大鼠TNF-αmRNA在1、4 h表达高于正常组(P<0.05),IL-1βmRNA表达在4、8 h时表达高于正常组(P<0.01),IL-6mRNA表达在8 h时PCP高于正常(P<0.05),表达峰值都提前,并且在4 h达到峰值。结论LPS刺激后,PCP大鼠肺泡巨噬细胞在早期可能更易分泌TNF-α、IL-1β、IL-6作为免疫分子,起免疫防御和免疫损伤作用。
- 蒋磊陈成水章圣辉吴建波谭映霞陈少贤陈国荣
- 关键词：肺泡巨噬细胞脂多糖IL-1Β卡氏肺孢子虫肺炎
- siRNA-cyclin D1对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用被引量：7
- 2006年
- 研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对乳腺癌MCF-7细胞株cyclin D1表达的抑制及对细胞增殖的影响。化学合成针对cyclin D1基因的siRNA,转染MCF-7细胞株；分别应用荧光定量PCR和免疫印迹测定cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,软琼脂培养检测细胞克隆形成能力。在实验中,10、50、100 nmol/L siRNA-cyclin D1分别使MCF-7细胞cyclin D1 mRNA表达降低了57．85%、63．22%和68．02%,蛋白表达降低了51．13%、62．09%、77．68%。转染siRNA-cyclin D1后,细胞增殖受到抑制,细胞周期阻滞于G1期,软琼脂克隆形成率降低。结果提示siRNA可以有效抑制MCF-7细胞株中cyclin D1的表达,使细胞周期阻滞于G1期,从而抑制细胞增殖。
- 蒋磊陈日曙李继承
- 关键词：CYCLIN
- S100P与消化道肿瘤的研究进展
- S100P是小型钙离子结合蛋白,属于S100家族成员,通过细胞内或细胞外功能,调节细胞的各种过程,并参与各种病理过程。越来越多的研究表明,S100P在各种肿瘤细胞中异常表达,并与肿瘤细胞的生长、转移、化疗药物的耐药、新陈...
- 林飞燕蒋磊
- 关键词：S100P消化道肿瘤
- 文献传递
- SiRNA特异性抑制cyclin D1的表达及其shRNA表达质粒的构建被引量：1
- 2006年
- 目的研究si RNA(small interfering RNA)对cyclin D1基因表达的抑制作用及shRNA表达质粒的构建。方法化学合成针对cyclin D1基因的si RNA,转染MCF-7细胞株;分别应用荧光定量PCR和免疫印迹检测cyclin D1mRNA和蛋白的表达;合成特异性cyclin D1的RNA干扰寡核苷酸序列,采用克隆技术,将其插人Psilencer2.1-U6质粒表达载体,构建cyclin D1shRNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体。结果化学合成的si RNA转染MCF-7细胞,48h后cyclin D1基因和蛋白表达都明显降低;构建特异性针对cyclin D1的shRNA表达质粒,酶切和测序结果显示,si RNA片段已成功插入Psilencer2.1-U6载体,载体构建成功。结论si RNA可以有效抑制MCF-7细胞株中cyclin D1的表达,并成功构建其shRNA表达质粒。
- 卓建新蒋磊陈日曙李继承
- 关键词：CYCLIND1SIRNASHRNA
- siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2/neu的表达及细胞增殖
- 2005年
- 目的研究siRNA(smallinterferingRNA)对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2/neu基因表达的抑制作用,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成两条针对Her2/neu基因的siRNA,转染SK-BR-3细胞株;分别应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法和流式细胞仪测定Her2/neu基因和蛋白的表达,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性,AnnexinV检测细胞凋亡。结果两条siRNA分别使Her2/neu基因表达降低了42·88%、49·27%,蛋白表达降低了25·03%、56·59%。同时转染siRNA后细胞生长受到抑制,并发生细胞凋亡,凋亡率分别为28·51%、42·81%。结论siRNA可以有效抑制SK-BR-3细胞株中Her2/neu的表达,从而抑制细胞生长,并导致细胞凋亡。
- 蒋磊倪吴花吴建波李继承
- 关键词：SIRNAHER2/NEURNAI流式细胞术
