倪吴花
- 作品数：48 被引量：215H指数：8
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- 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技局资助项目温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2/neu的表达及细胞增殖
- 2005年
- 目的研究siRNA(smallinterferingRNA)对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2/neu基因表达的抑制作用,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成两条针对Her2/neu基因的siRNA,转染SK-BR-3细胞株;分别应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法和流式细胞仪测定Her2/neu基因和蛋白的表达,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性,AnnexinV检测细胞凋亡。结果两条siRNA分别使Her2/neu基因表达降低了42·88%、49·27%,蛋白表达降低了25·03%、56·59%。同时转染siRNA后细胞生长受到抑制,并发生细胞凋亡,凋亡率分别为28·51%、42·81%。结论siRNA可以有效抑制SK-BR-3细胞株中Her2/neu的表达,从而抑制细胞生长,并导致细胞凋亡。
- 蒋磊倪吴花吴建波李继承
- 关键词：SIRNAHER2/NEURNAI流式细胞术
- 子宫内膜骨桥蛋白和整合素αvβ3表达与IVF-ET反复种植失败的关系被引量：16
- 2011年
- 目的:检测骨桥蛋白(OPN)和整合素αvβ3在人子宫内膜的表达,并探讨它们与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)反复种植失败的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测35例反复种植失败患者(研究组)及35例正常妇女(对照组)各时期子宫内膜组织中OPN和整合素αvβ3的表达。结果:OPN在增殖晚期开始表达,整合素αvβ3则在分泌中期开始出现并表现为强表达,两者在分泌中、晚期的表达水平均较其余各期明显增加(P<0.05)。与对照组相比,两者在研究组种植窗期内膜的表达均明显减弱(P<0.05)。结论:OPN和整合素αvβ3在正常子宫内膜中协调表达且呈现明显周期依赖性,参与子宫内膜容受性的建立;两者在反复种植失败患者种植窗期内膜中的表达明显减弱,可能是引起种植失败的原因之一。
- 杨海燕倪吴花余蓉
- 关键词：骨桥蛋白整合素ΑVΒ3子宫内膜
- 精子DNA碎片对辅助生殖技术治疗方式的影响被引量：8
- 2012年
- 目的探讨精子DNA碎片(SDF)对常规体外受精(IVF)和卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗方式的影响。方法选择235对夫妇的154个IVF和88个ICSI治疗周期,男方在女性配偶获卵日获取精液标本行精液常规分析和SDF检测,统计IVF和ICSI的胚胎结局:受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率和临床妊娠率。结果 IVF和ICSI周期的精子DNA碎片指数(DFI)分别为(17.4±10.4)%和(25.3±15.8)%,差异有统计学意义(P<0.01)。精子DFI≥24%时,ICSI周期的受精率、胚胎种植率和临床妊娠率显著高于IVF周期,差异有统计学意义(P均<0.05)。单因素分析时,精子DFI≥24%时的ICSI周期和IVF周期获得临床妊娠的优势比(OR)为3.85,95%可信区间(95%CD为1.40～10.59。纳入精液量、精子浓度、精子活动力(a+b)和女性配偶的年龄作为变量进行多因素分析时,DFI≥24%时的ICSI周期和IVF周期获得临床妊娠的OR为4.61(95%CI 1.09～19.57)。结论高SDF水平可影响辅助生殖技术(ART)的治疗方式,SDF水平较高时行IVF治疗的结局较差,此时应选择ICSI的治疗方法。
- 费前进金建远倪吴花黄学锋
- 关键词：精子常规体外受精卵胞浆内单精子注射
- siRNA沉默S100P基因对胰腺癌细胞的生长抑制作用被引量：1
- 2011年
- [目的]探讨小干扰RNA(siRNA)沉默S100P基因后对胰腺癌SW1990细胞株生长的影响。[方法]化学合成针对S100P基因的siRNA,用脂质体转染试剂将siRNA体外转染至人胰腺癌SW1990细胞中,48h后收集细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白。用实时定量RT-PCR测定S100P基因mRNA水平的表达;免疫印迹测定S100P蛋白的表达;MTT法测定细胞的生长曲线。[结果]转染siRNA后,S100P基因在mRNA水平上表达减少了77%,蛋白表达降低了74%,均显著性低于对照组。siRNA-S100P明显抑制细胞生长。[结论]应用RNAi技术沉默S100P基因可以降低人胰腺癌SW1990细胞株中S100P表达,抑制细胞生长。
- 李文峰李刚倪吴花蒋磊吴式琇
- 关键词：S100PSIRNA胰腺肿瘤
- 精子DNA损伤、核蛋白组型转换与顶体酶活性及精液参数的相关性分析被引量：36
- 2012年
- 目的:探讨精子DNA损伤、精子核蛋白组型转换与顶体酶活性及精液参数的相关性。方法:收集535例精液标本,采用精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)检测精子DNA损伤,并与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性和WHO手册(第4版)精液参数进行相关性分析。结果:精子DNA损伤与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性、精子浓度及前向运动精子这些指标之间比较均具有显著性差异(P<0.01);精子DNA损伤与年龄、核蛋白组型转换、精子浓度和D级精子比例之间呈显著正相关(P<0.01或P<0.05),而与顶体酶活性呈显著负相关(P<0.001),多元逐步回归分析显示年龄、精子浓度、D级精子比例、核蛋白组型转换及顶体酶活性是5个独立的相关变量。精子核蛋白组型转换、顶体酶活性、精子密度和前向运动精子这4个指标的异常率在精子DNA异常组(DFI≥30%)中均显著的高于正常组(DFI<30%)。结论:精子DNA损伤与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性及WHO(第4版)精液各参数之间存在密切的联系,可能是评价精子质量的另一项重要的指标。
- 郑九嘉杨旭张李雅费前进潘承双倪吴花金建远黄学锋
- 关键词：顶体酶DNA损伤
- siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2／neu的表达及细胞增殖
- 目的研究siR2NA(small interfering RNA)对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2／neu基因表达的抑制作用,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法设计...
- 蒋磊李继承倪吴花吴建波
- 关键词：细胞株NEU细胞增殖SIRNA
- 文献传递
- IVF-ET反复种植失败患者子宫内膜HOXA-10基因的表达被引量：7
- 2012年
- 目的研究同源框基因-10(HOXA-10)在人子宫内膜组织中的表达,并探讨其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)反复种植失败的相关性。方法以40例IVF-ET治疗反复种植失败的患者为研究对象,以40例正常妇女及5例早孕人流患者作为对照,获取患者各时期子宫内膜及蜕膜组织,采用免疫组织化学法检测HOXA-10蛋白在各时期子宫内膜及蜕膜上的定位和表达,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和蛋白印迹法(Western blotting)测定HOXA-10 mRNA在各时期子宫内膜及蜕膜上的表达及其蛋白水平。结果 HOXA-10蛋白定位于子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞,其mRNA和蛋白在各期子宫内膜及蜕膜组织中均有表达。在对照组中以分泌中期、晚期及蜕膜中的表达最强,明显高于月经期和增殖期(P<0.05);而在反复种植失败患者子宫内膜中的表达水平基本一致,无明显分泌中、晚期峰,并且分泌中、晚期的表达要显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HOXA-10基因在分泌中、晚期子宫内膜及早孕蜕膜组织中的高表达与胚胎种植及妊娠维持密切相关;其表达下降可能是导致IVF-ET反复种植失败的重要原因之一。
- 杨海燕倪吴花滕依丽孟绿荷
- 关键词：HOXA-10子宫内膜体外受精-胚胎移植
- 荧光定量PCR检测肝癌组织GPC3、HSP70基因表达的临床意义被引量：1
- 2008年
- 目的实时定量PCR方法检测肝癌细胞系、13例肝癌组织和癌旁组织GPC3、HSP70基因的表达,探讨定量PCR方法在肝癌早期诊断中的作用。方法应用实时定量荧光RT-PCR技术检测7种不同肝癌细胞系以及13例肝癌组织和癌旁组织中HSP70、GPC3基因的表达。结果发现HSP70基因在6个肝癌细胞系中过表达;GPC3基因在正常永生化肝细胞MIHA几乎不表达,而在H2-M、HUH7、HepG2、PLC、Hep3B中过表达;13例肝癌组织中9例HSP70和7例GPC3过表达。结论HSP70、GPC3基因在肝癌中过表达,有可能作为肝癌的临床早期诊断、治疗的参考指标,实时定量PCR方法能有效用于肝癌的诊断。
- 倪吴花俞康吴建波
- 关键词：HSP70GPC3肝癌
- 不育夫妇中男性精子DNA碎片指数变异的研究被引量：7
- 2013年
- 目的探讨不育夫妇中男性精子DNA碎片指数（DNAfragmentationindex，DFI）的变异程度。方法2009年4月至2012年4月，将539对不育夫妇中的539例男性纳入本研究。根据世界卫生组织标准（1999年），应用精子染色质扩散（spermchromatindispersion，SCD）试验对每名男性进行至少1次的重复精液常规分析和DFI检测，计算DFI的变异系数（coefficientofvariation，CV），对DFI的变异程度及其影响因素进行统计分析。结果539例男性中，有473例、59例、6例和1例分别行1次、2次、3次和4次重复精液常规分析和DFI检测，共计613次重复检测，重复检测和首次检测的间隔时间为0．5～34个月，中位数3．0（1．0～11．0）个月。539份首次检测样本间的DFI变异系数（between-samplecoefficientofvariation，CVB）为71．2％。与首次检测间隔0．5～3个月、3～12个月和12~34个月的DFI与首次检测的DFI比较，差异均有统计学意义（P〈O．01）。以18％作为男性生育力的DFI阈值，539例男性中有142例（26．3％，95％cI：22．6％～30．0％）的首次和重复检测DFI值分别位于阈值两侧。539例男性自身DFI的变异系数（within—subjectcoefficientofvariation，CVw）为0．0～110．5％，中位数为26．0％（12．6％～42．8％），精子总数、精子浓度、精子活动力和精子形态的CVw的中位数分别为41．9％（21．8％～72．6％）、31．9％（15．1％～62．5％）、29．4％（13．2％～55．4％）和46．0％（22．4％～87．1％），各精液常规参数的CVw分别与DFI的CVw比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。DFI的CVw与精子总数、精子浓度和DFI重复检测的间隔时间密切相关（P〈O．05）。结论不育夫妇中的男性精子DFI是一个变异较大的参数，应对每例男性的DFI进行重复检测才能反映其精子DNA损伤的水平。
- 费前进金建远倪吴花黄学锋
- 关键词：精子不育
- 男性不育患者精浆exosome中miR-184水平变化及临床意义被引量：4
- 2020年
- 目的:探讨男性不育患者精浆外泌体(exosome)中miR-184的水平变化及临床意义。方法:收集2015~2019年在江苏省中医院、东部战区总医院及温州医科大学附属第一医院就诊的97例无精子症患者、96例弱精子症患者及同期募集的92例正常生育男性精浆标本,分离精浆exosome后运用透射电镜、Nanosight和Western印迹对exosome进行鉴定;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测exosome miR-184的水平,统计分析miR-184变化、临床价值及与精液参数的相关性,进一步用生物信息学方法预测和分析miR-184靶基因、相关信号通路及与男性不育关系。结果:透射电镜、Nanosight和Western印迹结果显示,精浆中含有大量exosome。qRT-PCR结果显示,无精子症患者精浆exosome miR-184水平显著低于正常对照[0.227 (0.092, 0.790)vs 0.650 (0.408, 1.061)](P<0.01),弱精子症患者精浆exosome中miR-184水平显著高于正常对照[1.176 (0.661, 1.946)vs 0.650 (0.408, 1.061)](P<0.01)。受试者工作特征曲线(ROC)分析结果显示,精浆exosome miR-184无精子症、弱精子症患者的曲线下面积(AUC)为0.866(95%CI 0.815~0.916)和0.724(95%CI 0.653~0.795);区分弱精子症和无精子症患者的AUC为0.964(95%CI 0.943~0.985)。相关性分析显示,弱精子症患者精浆exosome miR-184水平与精子浓度呈显著正相关(r=0.243,P=0.017),与前向运动精子百分率呈显著负相关(r=-0.407,P=0.006)。生物信息学分析发现miR-184的靶基因显著富集于男性生殖和精子发生密切相关的蛋白调控通路。结论:男性不育患者精浆exosome miR-184水平与正常生育男性具有统计学差异,具备作为男性不育辅助诊断标志物潜能并可能参与男性不育的发生发展。
- 朱媛媛朱媛媛顾万建顾万建倪吴花张春妮梁戈玉
- 关键词：精浆男性不育无精子症弱精子症
