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排序方式：

PCR-双酶切鉴定STGC3抑癌基因重组子假阳性研究被引量：3: 2007年; 目的:探讨PCR与双酶切技术联合使用鉴定阳性重组子的特异性和可靠性,评价长期保存的重组质粒再次测序的必要性。方法:对随机选取已经过测序验证的三组STGC3/pcDNA 3．1(+)、一组STGC3/pGEM Easy T Vector重组子首先经过LB氨苄平皿培养挑单克隆筛选,然后单独或联合使用PCR和双限制性内切酶BamH I和Xho I酶切方法鉴定,将阳性样品送交生物工程公司测序,比较并评价两者结果的一致性。结果:三组STGC3/pcDNA 3．1(+)重组子经PCR—双酶切检测阳性而不能通过测序,说明该检测方法在运用中确实存在假阳性,同时证明重组载体在长期保存后有必要再次鉴定。结论:保存过程中的杂菌污染、实验室操作中的质粒交叉污染以及重组载体基因突变是基因工程操作中不可忽视的问题;PCR—双酶切鉴定重组载体存在假阳性的问题,实验设计中应包含阳性与阴性(污染)对照,并有足够的重复实验。; 蒋俊豪贺修胜; 关键词：PCR 双酶切假阳性

诱导STGC3基因定点突变对其功能影响的初步研究: 目的STGC3基因是新近克隆的鼻咽癌相关候选抑癌基因,定点突变该基因的三个可能性功能位点,分别构建三个单碱基定点突变的重组真核表达载体,突变重组真核表达载体转染鼻咽癌CNE2细胞系,通过该基因不同突变体表达对CNE2细胞...; 蒋俊豪; 关键词：鼻咽癌定点突变; 文献传递

HA纳米载体转GM-CSF基因制备自体肿瘤疫苗治疗肝癌的实验研究被引量：2: 2009年; 目的:观察自体肿瘤疫苗对人肝癌PBL-SCID嵌合模型的治疗效果。方法:SCID小鼠20只腹腔内注射健康志愿者外周血淋巴细胞(2×10~6/mL)0.5 mL,同时背部皮下接种人肝癌HepG2细胞(1×10~7/mL)0.2mL。当皮下移植瘤体积长至100mm^3时,随机分4组:Ⅰ组,生理盐水组;Ⅱ组,^(60)Co照射的HepG2细胞组;Ⅲ组,转染GM-CSF基因的HepG2细胞组;Ⅳ组,^(60)Co照射的转染GM-CSF基因的HepG2细胞组即自体肿瘤疫苗组,每组5只。结果:自体肿瘤疫苗组6周存活率(100%)高于生理盐水组(60%)和单纯^(60)Co照射的HepG2细胞组(40%);自体肿瘤疫苗腹腔注射抑制皮下移植瘤生长,其肿瘤生长抑制率为89%;免疫组化检测发现人淋巴细胞分布于小鼠移植瘤组织中。病理切片见移植瘤细胞变性和死亡。结论:HA纳米载体转GM-CSF基因制备的自体肿瘤疫苗具有抑制人肝癌PBL-SCID嵌合模型的皮下移植瘤生长作用,并诱导有效的抗肿瘤免疫反应。; 刘婷段晓明曹建国贺修胜童平真蒋俊豪; 关键词：GM-CSF基因自体肿瘤疫苗免疫重建

鼻咽癌相关新基因NPCEDRG真核诱导表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2008年; 目的构建受Tet系统调控人鼻咽癌相关新抑瘤基因NPCEDRG表达的真核诱导表达载体。方法以pcDNA3.1-NPCEDRG重组质粒为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NPCEDRG基因编码区,亚克隆到pRevTRE载体,PCR及双酶切鉴定,测序验证。结果以pRevTRE-NPCEDRG重组载体为模板PCR扩增以及双酶切重组载体,分别产生530 bp和520 bp长度的片断,测序结果证实插入片段方向正确,序列与Genebank已知序列一致,NPCEDRG基因编码区成功插入pRevTRE载体。结论成功构建了受Tet系统调控NPCEDRG基因表达的pRevTRE-NPCEDRG真核诱导表达载体,为深入研究NPCEDRG基因功能和揭示鼻咽癌发病分子机制提供实验手段。; 阳帅贺修胜蒋俊豪唐雪芳冯学知陈主初; 关键词：聚合酶链反应鼻咽癌

定点突变三种方法的比较研究(英文)被引量：3: 2008年; 目的:通过使用优化后的定点突变三种方法分别对一个新基因重组载体进行定点突变研究,比较这几种定点突变方法的优缺点。方法:重叠延伸 PCR 法使用 Stratagene 在线定点突变引物设计程序从而使引物设计简化而可靠;M utaBEST 定点突变试剂盒采用胶纯化试剂盒代替说明书推荐的酚-氯仿抽提质粒的方法以提高回收率;使用 Prim eSTA R 高保真 D N A 聚合酶和超级感受态试剂盒代替 Q uikchange 定点突变试剂盒的相应组分可使产物不受影响同时降低试验费用。结果:三种方法都能够获得单碱基突变重组载体。结论:Q uikChange 突变策略通过改进是一种高效、简洁、经济和可靠的定点突变方法。; 蒋俊豪肖建忠阳帅冯学之唐雪芳贺修胜; 关键词：重叠延伸PCR 定点突变

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蒋俊豪