罗镇明
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：遵义医学院珠海校区更多>>
- 发文基金：贵州省科技计划项目博士科研启动基金贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立被引量：3
- 2012年
- 目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染。方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果。结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4%Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳。结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染。
- 王燕彭莉萍罗镇明
- 关键词：琼脂糖凝胶电泳
- 改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA的应用初探被引量：1
- 2013年
- 旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反转录体系中加入生物素标记的dATP,得到单链cDNA;结合生物素-磁珠分离技术将cDNA与待测RNA进行消减杂交并以U6为内参验证消减结果 ;最后利用巢式PCR扩增杂交产物,PCR产物插入T载体后,挑取阳性克隆进行测序。结果显示,总RNA按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,于100 nt以下显示较亮条带;以U6为内参检测杂交效率,杂交后U6于33个循环时可见少量扩增条带;杂交产物经巢式PCR和电泳表明在100 nt范围内有明显条带,得到差异表达的非编码小RNA。经过改良的消减杂交方法可以快速、有效的检测不同标本中差异表达的非编码小RNA。
- 王燕彭莉萍陈锦珍刘星罗镇明周天会
- 关键词：消减杂交乳腺癌细胞
