罗娜
- 作品数：9 被引量：35H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗毒种的遗传稳定性被引量：4
- 2016年
- 目的分析Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（inactivated poliomyelitis vaccine,sabin strain,s IPV）毒种（亚主种子、工作种子）及疫苗代次病毒（SO＋4）的遗传稳定性。方法比较疫苗株SabinⅠ、Ⅱ型及PfizerⅢ型亚主种子、工作种子及疫苗代次病毒的感染性滴度及D抗原含量的变化情况,并对上述病毒进行全基因组测序。结果各代次Sabin株病毒滴度均维持在7.62-8.62 lg CCID50/ml,D抗原含量均维持在30-128 DU/ml。与Gen Bank上登录的SabinⅠ（AY184219.1）、Ⅱ（AY184220.1）、Ⅲ型（AY184221.1）减毒株原始种子（SO）基因序列相比,Sabin株亚主种子（SO＋2）、工作种子（SO＋3）及疫苗代次病毒（SO＋4）均未出现碱基突变。结论 s IPV毒种及疫苗代次病毒的全基因序列与原始种子相比,均未发生变化,毒力均一,遗传性状方面保持了较好的稳定性。
- 邓燕朱云梁海孝杨璐洁罗娜王虓宇王海杨卉娟徐明珏杨净思孙明波
- 关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗全基因组测序
- B群脑膜炎球菌lpxL2基因敲除突变株的构建及初步鉴定
- 2011年
- 应用基因敲除技术的方法和原理,通过PCR扩增B群脑膜炎球菌lpxL2基因及载体pGBK T7上的Kan抗性片段,lpxL2片段与puc-18载体连接得到重组质粒msb-puc,以重组质粒msb-puc为基础,分别通过反向PCR和酶切2种方法构建lpxL2基因中间片段的缺失,并在缺失位点连入Kan抗性表达盒,从而得到重组质粒mpK,mpK转化B群脑膜炎球菌,并用PCR的方法对转化子进行初步筛选鉴定,初步确定突变株1株.本研究通过基因敲除MenB中LPS合成途径相关基因lpxL2的方法,降低LPS毒性,为B群脑膜炎球菌OMV疫苗的研发做了铺垫.
- 李晓晶姬秋彦肖红剑彭正华罗娜杨增福杨槐李健峰李智华徐维明
- 关键词：脑膜炎奈瑟氏菌基因敲除脂多糖
- 重组人甲状旁腺激素肽(1-34)在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化被引量：3
- 2006年
- 人工合成人甲状旁腺激素1～34肽段(PTH134)的cDNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pThioHis中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、金属螯合层析、反相层析和凝胶层析后获得了纯度大于95%的hPTH134,hPTH134肽N端测序和质谱分子量测定结果与天然PTH134一致。生物学活性研究表明,hPTH134在体外具有刺激腺苷酸环化酶的作用。
- 李健峰肖红剑姬秋彦李智华龙海亭阎玲梅罗娜徐维明
- 关键词：人甲状旁腺激素大肠杆菌
- 无细胞百日咳疫苗生产用培养基的改进和培养条件优化被引量：2
- 2018年
- 目的:改进无细胞百日咳疫苗生产用培养基并优化培养条件。方法:用不同浓度溶血(0. 1%)赫氏琼脂及酸水解酪蛋白制备百日咳活性炭培养基,选择最优培养条件;使用百日咳活性炭培养基成功复苏菌种后,优化传代代次和培养时间,评价百日咳活性炭培养基替代羊血包姜氏培养基的可行性;用酸水解酪蛋白代替自制50%酸水解酪蛋白制备改良SS液体培养基,并用ELISA、SDS-PAGE电泳和CHO细胞簇集等方法评价对菌种的培养效果。结果:溶血(0. 1%)赫氏琼脂的加入量为33. 2g/L、酸水解酪蛋白加入量为8g/L时,菌苔生长最快;百日咳活性炭培养基培养第1代72 h、第2代48 h、第3代48 h、第4代24 h和第1代72 h、第2代36 h、第3代24 h的血凝(HA)和UV600均较高,这两组细菌生长状态较好;酸水解酪蛋白制备的百日咳活性炭培养基在优化条件后复苏菌种生长良好,和羊血包姜氏培养基没有明显差异; 8g/L酸水解酪蛋白制备的改良SS液体培养基所得菌量优于50%酸水解酪蛋白制备培养基(P=0. 001),改良SS液体培养基培养所得百日咳毒素纯度、产量和CHO细胞簇集活性均较好。结论:使用酸水解酪蛋白的百日咳活性炭培养基和改良SS液体培养基所得的百日咳杆菌纯度、产量、活性均较高,适用于无细胞百日咳组分疫苗的生产。
- 梁疆莉姬秋彦罗娜姬光高娜马艳史荔孙明波衡燮
- 关键词：百日咳百日咳毒素培养基
- 幽门螺杆菌napA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析被引量：14
- 2008年
- 实验目的是在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)中性粒细胞激活蛋白(NAP),口服免疫小鼠后检测其免疫原性。在实验中利用了分子克隆技术构建携带nap基因的重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的NAP蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。将雌性ICR(CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-nap的乳酸菌、灭活的H.pylori灌胃。免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生。成功扩增了nap基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr约17kDa的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.5%,表达的蛋白能与兔抗H.pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性。携带pNICE:sec-nap质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组,与灭活H.pylori组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其他组。结果说明表达NAP蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,对幽门螺杆菌疫苗的研究开发具有理论的意义。为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和H.pylori口服疫苗的开发提供一定的实验基础。
- 李建芳彭正华肖红剑罗娜杨增福李健峰徐维明
- 关键词：幽门螺杆菌乳酸乳球菌中性粒细胞激活蛋白
- 重组肿瘤坏死因子-α衍生物的制备及聚乙二醇修饰
- 2007年
- 应用搭桥PCR技术,将肿瘤坏死因子-α基因的前4位氨基酸的编码序列删除,对hTNF-α的第8/9/10/29/31/157位氨基酸的密码子进行定点突变,将突变后的cDNA插入到pBV220载体中构建重组质粒pBV220-tnf-αD4。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,筛选获得了高效表达TNF-αD4突变体的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体蛋白总量的45%左右,经硫酸铵沉淀和阳离子交换层析纯化得到纯度达90%以上的重组目的蛋白,比活性达到8×107。用单甲氧基聚乙二醇-丁醛(mPEG-ButyrALD)对TNF-αD4进行修饰,经阳离子交换层析纯化得到mPEG-TNF-αD4,纯度达85%以上,比活性达到8.6×107,系统毒性也有了明显的降低。通过应用PEG修饰肿瘤坏死因子-α,为降低其毒性,增加其活性进行了有益的尝试,为其进一步研究与开发奠定了基础。
- 毕研伟罗娜龙海亭杨增福杨旭李健锋徐维明
- 关键词：表达纯化生物活性
- 人呼吸道合胞病毒蛋白F1片段在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：1
- 2013年
- 目的在大肠杆菌中表达人呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白主要抗原表位集中的137～523 aa片段,并对其进行纯化,检测其免疫原性。方法采用RT-PCR扩增RSV F1基因片段,与pThioHisA载体连接,构建重组表达质粒pThioHisA-RSV F1,转化大肠杆菌Top10,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析;表达的融合蛋白经稀释复性、离子交换及亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析;将纯化的融合蛋白RSVF1经皮下多点注射分别免疫ICR小鼠,实验分为3组:RSV F1无佐剂组(RSV F1,50μg/只)、RSV F1佐剂组(50μg RSV F1+5μg nOMV佐剂)和阴性对照组(PBS,100μl/只),于第3周加强免疫1次,第4周尾静脉采血,分离血清,采用间接ELISA法检测其免疫原性。结果经双酶切鉴定及DNA测序证明重组表达质粒pThioHisA-RSV F1构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约56 000,主要以包涵体形式表达,表达量约占细胞总蛋白的36%;纯化的融合蛋白纯度可达95%,并可与RSV-F1多克隆抗体发生特异性抗原抗体反应;与阴性对照组相比,RSV F1免疫的小鼠血清特异性IgG水平明显提高(P<0.05)。结论已成功地在大肠杆菌中高效表达了RSV F1片段,纯化的融合蛋白在小鼠体内具有良好的免疫原性,为进一步研究RSV F蛋白亚单位疫苗奠定了基础。
- 彭正华蔡路奎姬秋彦毕研伟罗娜肖红剑闫玲梅高丹丹李智华
- 关键词：免疫原性
- 肠道病毒71型与乙型肝炎病毒联合疫苗免疫原性的初步评价被引量：9
- 2015年
- 目的初步评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)与乙型肝炎(简称乙肝)病毒(hepatitis B,HBV)联合疫苗中两种抗原之间的相互作用及其免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平。方法将EV71灭活疫苗抗原和重组HBV疫苗抗原(HBs Ag)按常规剂量,采用直接吸附法吸附Al(OH)3佐剂,配制成EV71-HBV联合疫苗,并设单苗组、佐剂对照组和空白对照组(PBS),分别于0、28 d各经腓肠肌免疫BALB/c小鼠1次,于初免后第2、4周和第2剂免疫后第2、4、8周经尾动脉采血,分离血清,采用双抗体夹心ELISA法检测血清中Anti-HBs水平,微量中和试验检测血清中EV71中和抗体效价;并于初免后第3、4周和第2剂免疫后第1、2、4周取小鼠脾脏,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNC),采用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测MNC中抗原特异性IFNγ的分泌水平。结果第2剂免疫后第2周,各疫苗组小鼠血清EV71中和抗体和Anti-HBs阳转率均达100%,各检测时间点疫苗组间抗体效价差异均无统计学意义(P>0.05),佐剂对照组和空白对照组抗体均无阳转。各疫苗组分泌IFNγ的斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)数在5个检测时间点有所波动,第2剂免疫后第1周,所有疫苗组IFNγ分泌水平均明显升高,达5个检测时间点的峰值,第2剂免疫后第2周显著下降,但在第2剂免疫后第4周又小幅升高;除第2剂免疫后第2周EV71-HBV联合疫苗组SFC数显著高于EV71单苗组外(P<0.05),其他检测时间点EV71-HBV联合疫苗组与单苗组的SFC数差异均无统计学意义(P>0.05);佐剂对照组和空白对照组的ELISPOT检测结果均为阴性。结论一定剂量的EV71和HBV联合疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,两种抗原间未发现相互作用。
- 陈梦娇杨晓蕾刘龙丁郑惠文罗娜尹晓晓李洪哲邓燕李在晗孙明波杨净思
- 关键词：肠道病毒71型乙型肝炎病毒联合疫苗体液免疫细胞免疫
- 幽门螺杆菌napA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析被引量：2
- 2008年
- 为在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)中性粒细胞激活蛋白(NAP),口服免疫小鼠后检测其免疫原性。在实验中利用了分子克隆技术构建携带nap基因的重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的NAP蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。将雌性ICR(CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-nap的乳酸菌、灭活的H.pylori灌胃。免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生。成功扩增了nap基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr约17kDa的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.5%,表达的蛋白能与兔抗H.pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性。携带pNICE:sec-nap质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组,与灭活H.pylori组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其他组。以上结果说明表达NAP蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,对幽门螺杆菌疫苗的研究开发具有理论意义。为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和H.pylori口服疫苗的开发提供了一定的实验基础。
- 李建芳彭正华肖红剑罗娜杨增福李健锋徐维明
- 关键词：幽门螺杆菌乳酸乳球菌中性粒细胞激活蛋白
