王红梅
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国医科大学药学院药物毒理学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Cav1.2通道CT1片断突变体的质粒构建和蛋白表达
- 2015年
- 目的构建心肌Cav1.2通道CT1片段及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体,并进行蛋白表达和纯化。方法以豚鼠Cav1.2通道CT1质粒(p GEX-6p-3/CT1)为模板,采用定点突变技术构建CT1 T1603A和CT1 T1603D两种突变体质粒。转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后用IPTG诱导GST融合蛋白表达,分离纯化后采用SDS-PAGE检测CT1及其突变体蛋白的相对分子量和纯度。结果 CT1片段及其突变体融合蛋白得到了正确、大量表达,提取纯化后的CT1片段及其突变体融合蛋白具有较高的纯度。结论成功构建了Cav1.2通道CT1片断及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得了CT1突变体融合蛋白,为深入研究CT1片断在Cav1.2通道调节中的作用和机制奠定基础。
- 雷明赵美眯封瑞王红梅毛楠朱彤郝丽英
- 关键词：融合蛋白突变体
- Calmodulin及其突变体与去磷酸化的Cav1.2钙通道片段CT1的结合情况
- 目的研究Calmodulin(CaM)及其突变体与去磷酸化CT1的结合情况。方法本实验中研究的CaM突变体包含CAM12(N-lobe上的两个Ca结合发生突变)、CAM34(C-lobe上的两个Ca结合发生突变)和CAM...
- 王红梅何桂林邵冬雪封瑞孙威郝丽英
- 文献传递
- 细胞内高镁对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道活性的影响被引量：1
- 2014年
- 本文旨在研究细胞内高镁对离体豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的单通道门控特性的影响。急性酶消化法分离豚鼠心室肌细胞,应用膜片钳膜内向外单通道记录模式观察不同浓度细胞内镁([Mg2+]i)对心肌细胞L-型钙通道单通道电流的影响。结果显示,对照组([Mg2+]i 0.9 mmol/L)的心肌细胞L-型钙通道相对活性为(176.5±34.1)%,而高镁组([Mg2+]i 8.1 mmol/L)钙通道相对活性显著降低至(64.8±18.1)%(P<0.05)。另外,8.1 mmol/L[Mg2+]i使心肌细胞L-型钙通道的平均开放时间缩短至对照组的约25%(P<0.05),但对通道平均关闭时间无明显影响。以上结果提示,细胞内高镁主要通过缩短通道平均开放时间抑制豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的活性。
- 赵美眯连雯雯孙睿王红梅封瑞胡慧媛孙雪菲郝丽英
- 关键词：L-型钙通道心室肌细胞膜片钳技术
- 体外重组CaV1.2不同蛋白片段纯化及其与CaM相互作用的研究被引量：4
- 2013年
- 目的纯化CaV1.2不同蛋白片段并研究其与CaM的相互作用。方法质粒转化、筛选得到转化成功BL21菌株,利用IPTG诱导GST钙通道融合蛋白表达,Glutathione-Sepharose 4B beads纯化钙通道不同蛋白片段;采用GST pull-down assay实验研究钙通道蛋白不同片段与CaM以及突变体的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得钙通道不同蛋白片段;GST pull-down assay结果显示CT1可与CaM及突变体结合,且GST-CT1与野生型CaM结合量显著多于与突变体CaM结合量。结论成功纯化CaV1.2钙通道蛋白片段并顺利完成GST pull-down assay实验,为深入研究蛋白相互作用或发现新的蛋白相互作用奠定了基础。
- 何桂林邵冬雪印丹丹胡慧媛郭凤王红梅郝丽英
- 关键词：CAM融合蛋白
- High intracellular Mg2+ affects upon the activities of L-type calcium channel in guinea-pig ven-tricular myocytes
- This study is aimed to investigate the effects of high intracellular Mg2+(Mg2+i)upon the gating-mechanism of L...
- 赵美眯雷明邵冬雪王红梅封瑞胡慧媛孙雪菲郭凤赵金生郝丽英
- 文献传递
- 顺铂低渗腹腔化疗的动物实验方法与体会
- 2002年
- 目前认为,腹腔化疗是治疗胃癌腹膜转移较为理想的方法.本组采用犬为研究对象,分为顺铂低渗腹腔化疗组和顺铂等渗腹腔化疗组,两组动物分别行腹腔化疗后采外周血、门脉血和腹腔液,用非火焰原子吸收光谱法检测铂的含量,并分别计算出各自药代学参数.……
- 王红梅佟玉章张闻辉
- 关键词：顺铂低渗腹腔化疗
- PreIQ及其突变体载体构建表达纯化和活性鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的构建心肌L型钙通道片段PreIQ及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化和活性鉴定。方法将PreIQ及其突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导PreIQ及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化。采用SDS-PAGE鉴定目的蛋白分子质量和相对纯度。采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度。采用pull-down法检测纯化后蛋白的活性。结果 PreIQ及其突变体融合蛋白得到了大量表达;纯化的PreIQ及其突变体具有较高的纯度;纯化后蛋白能与钙调蛋白(CaM)结合,具有生物活性。结论本研究成功构建了PreIQ及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得具有生物活性的PreIQ及其突变体融合蛋白,为深入研究PreIQ的生能学功能奠定基础。
- 孙威封瑞郭凤赵金生赵美眯高青华王红梅毛楠郝丽英
- 关键词：融合蛋白突变体
