王敏
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：陕西省科技统筹创新工程计划项目国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 共培养的大块组织工程肝构建及体内植入研究被引量：3
- 2014年
- 目的选择大鼠成纤维细胞和原代肝细胞共培养于胶原水凝胶支架中,进行多细胞的大块组织工程肝构建及体内植入研究,以期构建长期存活的功能性肝组织。方法采用3-D打印技术制备硅胶模具,经成胶脱模制备胶原水凝胶支架。将大鼠肺成纤维细胞与原代肝细胞以0.4∶1比例种植于该支架中(B组),以种植同密度单纯原代肝细胞为对照(A组)。体外培养1、3、7、14、21 d,观察细胞形态并检测肝功能(白蛋白和尿素分泌量)。取24只SD大鼠,采用皮下注射四氯化碳方法制备肝硬化模型,将A、B组组织工程肝分别植入大鼠腹腔大网膜内(n=12),植入后3、7、14、21、28 d行HE、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)及ALB染色观察。结果体外实验中,与A组相比,B组肝细胞呈多边形,细胞核大且圆,肝功能表达旺盛,并且在7 d时聚团生长最多,7 d后白蛋白及尿素分泌量显著增高(P<0.05)。体内实验中,B组肝细胞能存活至28 d,白蛋白和尿素分泌也显著增多,细胞团聚成条索形,形成了类正常肝脏组织。结论多细胞大块组织工程肝体内植入时形成了类正常肝脏组织,并长期存活,为构建结构和功能更完整的组织工程肝奠定了基础。
- 曲晓丽王敏贺健康刘亚雄周新民李涤尘靳忠民
- 关键词：成纤维细胞原代肝细胞共培养体内植入
- 一种同时分离培养大鼠肝细胞及肝枯否细胞技术的建立被引量：2
- 2013年
- 目的:建立简便、经济的同步分离培养肝细胞及kupffer细胞的方法。方法:采用肝脏原位灌洗结合离体胶原酶灌注消化的方法获得总细胞悬液,差速离心分离肝细胞及肝非实质细胞,经多次低速离心可分离肝细胞,经percoll密度梯度离心以及选择性贴壁法得到纯化的kupffer细胞。台盼蓝染色鉴定细胞活力。使用倒置相差显微镜、HE染色、PAS染色及白蛋白免疫组织化学染色对培养肝细胞的形态及功能进行检测。使用光学显微镜、荧光显微镜及CD68免疫荧光染色鉴定分离的kupffer细胞。结果:体外成功的同步分离培养了肝细胞及kupffer细胞,肝细胞产率为1.37±0.53×108/大鼠,kupffer得率为3.45±0.41×106/g肝脏。细胞存活率及纯度都可达90%。肝细胞培养24 h后呈典型肝细胞形态,7天后仍具有糖原合成和白蛋白合成能力。贴壁后的kupffer细胞呈典型的星型或三角形,且其标志分子CD68免疫荧光染色阳性。结论:应用改良的原位灌注方法可以很好的同时分离具有活性及功能的肝细胞和kupffer细胞。
- 王敏兰亚胡皓时永全韩英周新民
- 关键词：肝细胞枯否细胞
- 以胶原水凝胶为支架构建肝细胞三维培养系统被引量：10
- 2013年
- 背景:肝细胞体外培养时快速失去功能限制了肝细胞疗法的发展。目的:以胶原水凝胶为支架建立能够长时间有效维持肝细胞功能的肝细胞三维培养系统。方法:将SD大鼠肝细胞与预混肝细胞生长因子及DMEM的液态Ⅰ型胶原混合,形成肝细胞/胶原凝胶复合物,将该复合物接种至培养板,待形成胶冻状凝胶后再加培养液进行培养。通过光学显微镜、苏木精-伊红染色及透射电子显微镜对肝细胞的形态学特征及超微结构进行观察;并通过糖原染色、免疫荧光染色、实时定量PCR进一步对肝细胞特异表型及功能进行检测。收集培养上清,检测细胞白蛋白及尿素合成能力。结果与结论:①肝细胞/胶原水凝胶复合物形成后,可见肝细胞呈圆形分布于水凝胶中,培养14d后仍保持肝细胞形态并呈类似肝脏结构的肝索样聚集排列,超微结构观察显示肝细胞之间形成紧密连接。②培养14d后,糖原染色、白蛋白及肝细胞核因子4α免疫荧光染色呈阳性,证实肝细胞具有糖原及白蛋白合成能力并仍具有分化潜能。③三维培养中,肝细胞的白蛋白及尿素合成能力及分泌水平明显高于二维培养,且至少能够在较高水平维持15d。④培养7d后,Albumin、HNF-4α、Claudin-3、CYP1A1、CYP3A1以及G6P等肝细胞特异性基因的表达水平明显高于二维培养。以上结果证实,以胶原水凝胶为支架构建的三维培养系统使肝细胞在结构上更类似肝脏组织,并能在更长时间内有效的维持肝细胞合成代谢等各方面功能。
- 王敏兰亚胡皓时永全韩英周新民
- 关键词：细胞外基质材料肝细胞水凝胶合成代谢
