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Alzheimer's Disease相关基因NCT启动子分离及其转录调控机制的研究: 本文从基因转录起始位点的确认、启动子的分离与克隆以及顺式元件的鉴定等方面开展了对NCT基因转录调控机制的初步研究。首先设计引物通过5’RACE和引物延伸实验确定转录起始位点以及扩增12个互相套叠的缺失片段，构建Luc报告...; 杨眉; 关键词：老年痴呆症启动子顺式元件基因转录; 文献传递

阿尔兹海默病相关基因nicastrin启动子的克隆和鉴定被引量：4: 2006年; 目的:克隆和鉴定与阿尔兹海默病发生有关的γ-分泌酶的组成蛋白之一n icastrin(NCT)基因的启动子,用于开展其转录调控机制的研究。方法:用PCR方法从人基因组DNA中分离NCT基因编码区上游大小约为1.8 kb的片段并以此为基础对启动子进行两端删除分析,分别扩增大小不等的片段,与pGL3-Enhancer荧光素酶报告基因载体质量组,通过瞬时转染Hela细胞,细胞裂解液进行双荧光素酶活性分析,分离NCT基因的启动子区。结果:NCT基因启动子的420 bp片段在Hela细胞中具有最强的启动活性,另237 bp片段为有活性的最小片段。结论:NCT启动子很可能位于翻译起始位点上游-432/-133处,其基础启动子位于-359/-90。; 杨眉蔡芳王瑞山潘乾龙志高邓小云夏昆夏家辉张灼华; 关键词：阿尔兹海默病 NICASTRIN 启动子

酵母双杂交筛选帕金森病相关基因LRRK2互作蛋白以及LRRK2和UCH-L1基因启动子区与帕金森病的关联研究: 帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是发病率仅次于老年痴呆症的一种进行性神经系统退行性疾病。它多发于中老年人，在50岁以上的人群中发病率约1％。还有一小部分患者，在儿童期或青春期即发病。PD的主要临床...; 杨眉; 关键词：帕金森病突变检测启动子酵母双杂交筛选; 文献传递

运用酵母双杂交技术筛选LRRK2相互作用蛋白(英文): 2008年; 目的:使用酵母双杂交来筛选LRRK2基因的相互作用蛋白,以研究其功能。方法:使用的诱饵片段包含MAPKKK和ROC功能域的一部分与COR功能域的全长。诱饵片段由聚合酶链式反应(PCR)扩增后连入酵母表达质粒pGBKT7,pGBKT7-bait质粒经测序验证后转化酵母菌株AH109,用免疫印迹来检验该质粒在酵母中的表达,人类胎脑cDNA文库被转化到能稳定表达诱饵蛋白的酵母菌株中,并铺到含有X-α-gal的四缺(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)的培养皿上。分别使用含有pGBKT7或pGBKT7-bait的AH109酵母菌株进行回交检测,进一步确证从初步筛选中获得的阳性克隆,并用生物信息学来分析其中的文库质粒。结果:获得9个真阳性的克隆,经生物信息学分析其中有3个克隆中的序列不在已知基因的开放阅读框内,其余6个克隆中的序列在以下几个已知基因的开放阅读框中:STRBP,BAG5,PTPN23,L3MBTL3,RA-LYL,KIAA1783。结论:经酵母双杂交后成功地获得了真阳性克隆。这些相互作用蛋白将为研究LRRK2的功能、帕金森病发病机制和其他神经性疾病提供一些新的线索。; 郑晓业杨眉谭洁琼潘乾龙志高戴和平夏昆夏家辉张灼华

一种改进的原代神经元的制备方法被引量：5: 2005年; 神经元是神经组织的结构和功能单位。从胚胎中分离出神经元时,由于它们在原位组织中完成了分裂和分化,原代培养的神经元将不会分裂、增殖。18d孕龄的SD大鼠胎鼠脑组织中分离原代神经元的过程中,采用了改进的细胞分离方法。分离的原代细胞经免疫荧光实验证实含有大量的神经元。pEGFP质粒转染和细胞免疫荧光实验结果显示,转染的原代神经元中GFP报告基因有较高的表达,这表明,原代培养的神经元适宜于后续实验的进行。在对改进型方法和传统型方法的细胞分离效果比较时,发现改进型方法在消化过程中产生的gDNA絮状物较传统型的少,接种后发现细胞分散均匀,无杂物。所获得的原代细胞的总数比传统型方法多出大约23%。; 邓小云杨眉蔡芳潘乾龙志高邬玲仟梁德生戴和平夏昆夏家辉张灼华; 关键词：原代细胞培养神经元细胞

老年痴呆症相关基因Nicastrin的转录调控(英文)被引量：3: 2009年; APP蛋白经过降解,形成老年痴呆症患者脑内老年斑的主要成分.由PS(早老素),NCT,PEN-2和APH-14种膜蛋白组成的γ分泌酶催化该降解过程.为了了解人类nicastrin(NCT)基因的转录调控机制,确定了其在人脑中的转录起始位点以及其编码区上游大小不等片段的转录起始活性.EMSA分析证实NCT启动子区的4个AP-1结合位点和2个NFAT结合位点能够与相应的转录因子结合,能够改变转录因子调控能力的定点突变和PDTC诱导使得NCT启动子在HeLa细胞和大鼠皮质神经元中的启动活性都有所改变.以上结果说明:AP-1和NFAT确实参与了人类NCT基因的转录调控.; 杨眉蔡芳潘乾龙志高夏家辉夏昆张灼华; 关键词：老年痴呆症 NICASTRIN 转录调控 AP-1 NFAT

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杨眉