杨国庆
- 作品数：11 被引量：72H指数：3
- 供职机构：中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 离子强度对于牛精蛋白在大肠杆菌中的表达的影响被引量：1
- 2003年
- 通过基因合成将大肠杆菌偏好的精氨酸密码子CGT取代野生型牛精蛋白基因中的稀有精氨酸密码子AGA和AGG ,得到密码子优化的牛精蛋白基因 ,并将其克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PS。将这个表达载体转化入大肠杆菌表达菌株BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,可得到一 33kD融合蛋白表达带 ,首次成功地将牛精蛋白在大肠杆菌中进行了表达 ,但其表达量很低 ,约为总菌体蛋白的 13%。增加表达菌株培养液的离子强度 ,可将蛋白表达含量提高到 2 8% ,且蛋白表达量与离子强度呈正相关。纯化后的牛精蛋白可在体外条件下与DNA发生结合。
- 张雅丽任立明郭英陈立栋杨国庆陈永福
- 关键词：离子强度大肠杆菌纯化
- 用动物乳房生产人的生长激素
- 本发明提供了一种可在动物乳腺组织中表达并且其产物与天然人生长激素相同的人生长激素基因，还提供了将所述基因置于特定启动子控制之下转移生产转基因动物的方法，所述动物可在其奶中产生人的生长激素，从而提供了利用动物乳房作为反应器...
- 陈永福郭志勤陈东杨国庆齐顺章戴蕴平
- 文献传递
- 牛BLG基因5'调控成分的克隆和制备乳腺生物反应器研究被引量：37
- 1996年
- 用PCR法克隆了牛β-乳球蛋白(BLG)基因的 1个片段,它包括 650 bp的 5’侧翼序列,第一二外显子和第一内含子.以该片段中的 650 bP的侧翼序列及转录起始位点下游 11 bP的非编码区(共 661 bP)作为调控序列,与人生长激素(hGH)基因构建成了表达载体,在培养的原代山羊乳腺上皮细胞中进行暂时表达,结果在激素诱导下, hGH基因能够表达,并且表达产物的绝大部分分泌到培养基中.将上述表达载体中的BLG/hGH融合基因部分经显微注射法制得5只转基因阳性小鼠,其中1只小鼠乳清中hGH的含量为420 μg/mL而血清中仅为0.051μg/mL,说明本实验克隆的牛BLG基因5’调控序列可以控制目的基因在转基因动物中表达,基本上具有乳腺特异性,而且产物能分泌至乳汁中.
- 杨国庆戴蕴平朱宝利陈永福齐顺章
- 关键词：乳腺生物反应器生物制品
- 兔胎儿成纤维细胞转外源基因二倍体单细胞克隆株的建立
- 体细胞克隆技术的成功为转基因动物的生产掀起一场革命,以体细胞克隆法来生产转基因动物的最大优点是,使转基因操作主要集中在细胞水平上完成,从而极大地降低了生产成本和减少了工作强度。本实验对这一过程进行了探索。 从怀孕17日母...
- 侯健安晓荣苟克勉杨国庆陈永福
- 文献传递
- 用动物乳房生产人的生长激素
- 本发明提供了一种可在动物乳腺组织中表达并且其产物与天然人生长激素相同的人生长激素基因,还提供了将所述基因置于特定启动子控制之下转移生产转基因动物的方法,所述动物可在其奶中产生人的生长激素,从而提供了利用动物乳房作为反应器...
- 陈永福郭志勤陈东杨国庆齐顺章戴蕴平
- 文献传递
- 密码子优化的牛精蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：23
- 2002年
- 以PCR的方法得到牛精蛋白基因组基因 ,去其内含子 ,得到牛精蛋白cDNA ,克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PE。利用大肠杆菌偏好的编码精氨酸的密码子CGT将野生型牛精蛋白基因中编码精氨酸的稀有密码子 (AGA或AGG)替换掉 ,通过基因合成得到密码子优化的牛精蛋白基因 ,将其克隆入原核表达载体pGEX 2T ,组装成表达载体pGEX 2T PS。将这两个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,同样条件下 ,野生型牛精蛋白基因无法得到表达 ,密码子优化的牛精蛋白基因能够得到良好的表达 ,表达产物约占细菌总蛋白的 18%。将表达蛋白纯化 ,进行DNA—蛋白结合实验 ,发现其能与DNA发生非特异性的结合。
- 张雅丽杨国庆郭英陈永福
- 关键词：密码子优化大肠杆菌基因表达
- 云南省临沧市农民培训的问题与对策研究
- 杨国庆
- 关键词：农民培训
- 牛BLG基因5′调控序列控制GFP基因在原代乳腺上皮细胞中的表达
- 2004年
- 采用胶原酶分阶段消化法对家兔的原代乳腺上皮细胞进行了分离培养 ,并且构建了以牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因5′调控序列为启动子、以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因的真核表达载体。将该载体转染兔原代乳腺上皮细胞 ,然后用不同质量浓度的皮质醇、胰岛素和催乳素诱导。结果表明 ,用 5 mg/ L 催乳素 +5 mg/ L 胰岛素 +1m g/ L 皮质醇诱导 ,在诱导 36 h后开始有荧光出现 ,诱导 4 8～ 6 0 h时荧光更强一些 ,而未经诱导的细胞
- 孙丽翠刘朋朋杨国庆仲飞刘维全齐顺章
- 关键词：基因GFP
- 牛BLG基因5’调控成分的克隆和用以制备乳腺生物反应器的研究
- 杨国庆
- 关键词：生物反应器人生长激素
- 小鼠和兔原代乳腺上皮细胞的培养被引量：8
- 2004年
- 目的 :对小鼠和兔的原代乳腺上皮细胞进行培养。方法 :取小鼠和兔的乳腺组织 ,用加葡萄糖的PBS稀释胶原酶III作消化液 ,分三个阶段进行消化 ,选择离心后的小细胞团 ,用含激素的培养液培养。结果 :在基本培养液中添加 10ng ml的表皮生长因子和 5 μg ml的胰岛素可以使乳腺上皮细胞富集。 结论 :成功地培养出了小鼠和兔的原代乳腺上皮细胞。
- 孙丽翠刘朋朋杨国庆仲飞戴钟铨齐顺章
- 关键词：乳腺细胞原代培养胶原酶胰岛素小鼠
