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李岭

作品数：15 被引量：28H指数：4
供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室更多>>
发文基金：国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项国家科技重大专项更多>>
相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 14篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 9篇医药卫生
  • 7篇农业科学
  • 3篇生物学

主题

  • 14篇病毒
  • 8篇蛋白
  • 8篇抗体
  • 5篇犬病
  • 5篇狂犬
  • 5篇狂犬病病毒
  • 4篇多克隆
  • 4篇多克隆抗体
  • 4篇原核表达
  • 4篇糖蛋白
  • 4篇克隆
  • 3篇西尼罗病毒
  • 3篇间接ELIS...
  • 2篇疫病
  • 2篇兽疫
  • 2篇小反刍兽疫
  • 2篇小反刍兽疫病...
  • 2篇狂犬病病毒糖...
  • 2篇基因
  • 2篇间接ELIS...

机构

  • 15篇吉林大学
  • 14篇军事医学科学...
  • 7篇吉林农业大学
  • 3篇长春西诺生物...
  • 2篇东北农业大学
  • 1篇中国科学院
  • 1篇石河子大学

作者

  • 15篇李岭
  • 14篇夏咸柱
  • 14篇杨松涛
  • 13篇赵永坤
  • 12篇冯娜
  • 12篇王铁成
  • 12篇王化磊
  • 11篇高玉伟
  • 9篇金宏丽
  • 8篇曹增国
  • 7篇郑学星
  • 7篇闫飞虎
  • 5篇黄耕
  • 4篇盖微微
  • 4篇赵国星
  • 4篇李倩
  • 3篇王琪
  • 3篇吴芳芳
  • 2篇薛向红
  • 2篇马金柱

传媒

  • 6篇中国生物制品...
  • 5篇中国兽医学报
  • 1篇微生物学报
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国病原生物...

年份

  • 4篇2017
  • 6篇2016
  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 2篇2013
  • 1篇2012
共 15 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
狂犬病病毒CVS-11株全序列测定及其感染性克隆的构建被引量：1
2013年
【目的】测定狂犬病病毒标准攻击毒CVS-11株全基因组序列,构建CVS-11株全长cDNA感染性克隆。【方法】RT-PCR扩增CVS-11株全基因组得到有重叠的12个片段,分别克隆至平端载体pEASY-Blunt,测定CVS-11株全基因组核苷酸序列。用软件DNAMAN分析CVS-11全序列单一性酶切位点,设计引物,分4段扩增CVS-11全基因组,扩增产物经多步酶切、连接逐步插入至真核表达载体pcDNA3.1,获得全长质粒pcDNA3.1-CVS-11。pcDNA3.1-CVS-11与其辅助质粒pcDNA3.1-N、P、L、G共转染NA细胞,经免疫荧光染色、RT-PCR鉴定,拯救得到重组病毒rCVS-11。【结果】CVS-11全基因组序列由11 927个核苷酸组成,编码5个结构蛋白,结构基因排列同已知的其他狂犬病病毒一致。成功构建了CVS-11全长cDNA重组质粒pcDNA3.1-CVS-11和其辅助质粒pcDNA3.1-N、P、L和G。经共转染,成功拯救了重组病毒rCVS-11。【结论】CVS-11株感染性克隆的构建为从分子水平上进一步研究狂犬病病毒奠定了基础。
薛向红郑学星盖微微梁红茹马金柱李岭王铁成冯娜黄耕赵永坤杨松涛夏咸柱
关键词：狂犬病病毒全序列测定
应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中表达狂犬病病毒糖蛋白
2012年
目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中高效表达狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)糖(G)蛋白。方法从狂犬病病毒CVS-11株总RNA中扩增G基因片段,插入供体质粒pFastBacⅠ-G中,构建重组供体质粒pFastBacⅠ-G,转化大肠杆菌DH10Bac,构建重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G,将其转染BmN细胞,获得含G基因的重组杆状病毒。将重组病毒感染蚕蛹,收集血淋巴,进行Western blot分析。结果重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G经PCR鉴定证明构建正确;狂犬病病毒糖蛋白在重组杆状病毒感染的BmN细胞中和蚕蛹中获得正确表达,在蚕蛹中表达的重组蛋白可与His标记的单克隆抗体和狂犬病病毒阳性血清特异性结合。结论成功构建了重组狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒,并在蚕蛹中获得了表达,表达产物具有良好的抗原性。
赵丽丽孙伟洋冯昊胡桂秋李岭李露郭鹤赵平森王化磊杨松涛夏咸柱
关键词：杆状病毒表达系统狂犬病病毒糖蛋白蚕蛹
马尔堡病毒糖蛋白RBD基因的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
2017年
原核表达并纯化马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)糖蛋白(glycoprotein,GP)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,并以此为抗原免疫家兔制备抗MARV-GP-RBD多克隆抗体。参照GenBank提供的MARV GP全基因序列,找到主要抗原表位区域,设计特异性引物,采用PCR方法扩增RBD基因,扩增产物经双酶切(EcoRⅠ/XhoⅠ)后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a(+)-GP-RBD,转化BL21(DE3)感受态表达宿主菌,在不同条件下(时间、IPTG浓度、温度)诱导表达目的蛋白,并用His-Band N+柱进行亲和层析纯化;以纯化的重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western blot和IFA鉴定重组蛋白的反应原性及免疫原性。结果显示:PCR扩增到长度为453bp的RBD基因片段;构建的重组质粒pET-30a(+)-GP-RBD经双酶切后得到与目的片段长度相同的特异性条带,测序结果显示没有突变;转化产物在培养7h、终浓度为0.4mmol/L IPTG和37℃条件下能够充分诱导目的蛋白表达,得到相对分子质量为25 000的重组蛋白,主要以包涵体形式存在,BCA试剂盒产量测定,每升诱导的重组菌可纯化约20mg纯度较高的目的蛋白;Western blot检测证实重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白能同时被抗His标签的单抗和兔源多抗识别并发生特异性反应,证明重组蛋白有良好的反应原性;IFA鉴定证实所制备的兔源多抗能够特异性识别表达MARV GP蛋白的重组杆状病毒rBacmid-GP-VP40,证明重组蛋白具有良好的免疫原性。结果表明:成功表达、纯化了MARV GP RBD蛋白,并完成了兔源多抗的制备,为MARV亚单位疫苗的制备和抗原、抗体检测方法的建立奠定基础。
王琪盖微微闫飞虎冯娜吴芳芳赵梓淇曹增国李岭迟航金宏丽邱泊宁崔健男赵永坤王铁成高玉伟王化磊杨松涛夏咸柱
关键词：马尔堡病毒多克隆抗体
犬细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：4
2014年
利用本实验室建立的昆虫细胞/杆状病毒表达系统表达犬细小病毒病毒样颗粒(CPV-VLPs),采用硫酸铵沉淀、蔗糖密度梯度离心对表达的CPV-VLPs进行纯化,用电子显微镜、SDS-PAGE及Western-blotting方法检测纯化效果。以纯化的CPV-VLPs作为包被抗原建立CPV间接ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、敏感性、重复性。结果显示,CPV-VLPs经过纯化后纯度可达到95%以上;优化的ELISA最佳工作条件为:纯化抗原包被浓度为5.0mg/L,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;待检血清1∶40稀释,37℃孵育1.5h;HRP标记的酶标二抗1∶20 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min;确定的血清阴性阳性临界值D450nm值为0.264。该方法可特异性检测犬细小病毒阳性血清,与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬冠状病毒病、狂犬病阳性血清均不发生反应。该方法的敏感性为1∶640,批内重复试验变异系数小于6%,批间重复试验变异系数小于8%。42份临床血清样本的检测结果表明,与血凝抑制试验的符合率为90.48%。
赵国星王化磊金宏丽李倩郑学星冯娜李岭李露王超赵永坤王铁成高玉伟杨松涛夏咸柱
关键词：犬细小病毒病毒样颗粒间接ELISA抗体检测
西尼罗病毒抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及其应用被引量：4
2016年
目的建立及验证西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)抗体间接ELISA检测方法,并用于评价疫苗的免疫效果。方法以纯化后的WNV E蛋白第三结构域(EDⅢ)蛋白作为包被抗原,建立WNV抗体间接ELISA检测方法,对抗原包被浓度(2.5、5、10、20、40、80μg/ml)、血清稀释度(1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320)、抗原封闭时间(0.5、1、1.5、2 h)、血清孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)、HRP标记的山羊抗马Ig G稀释倍数(1:5 000、1:10 000、1:20 000、1:40 000、1:80 000稀释)及其孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)进行优化,并验证该方法的特异性、敏感性及精密性。采用建立的方法检测WNV阴性马血清和病毒样颗粒(WNV-VLPs)疫苗免疫的马血清,与ALPHA公司试剂盒的检测结果进行比较。结果间接ELISA法最佳检测条件为:抗原包被浓度为20μg/ml,4℃包被过夜;Blocking ACE封闭液于37℃封闭1.5 h;加入血清(1:80稀释),37℃孵育1.5 h;加入HRP标记的山羊抗马Ig G(1:20 000稀释),37℃孵育1 h。该方法可特异性检测WNV阳性血清中的WNVE-Ig G抗体;阳性血清稀释至1:2 560时,检测结果仍为阳性;批内和批间的变异系数(CV)均小于7%。25份WNV阴性马血清检测结果均为WNVE-Ig G抗体阴性,经WNV-VLPs疫苗免疫的马血清中的WNVE-Ig G抗体效价水平随免疫次数的增加呈递增趋势,间接ELISA法与ALPHA公司试剂盒的检测结果完全一致。结论成功建立了WNV抗体间接ELISA检测方法,可用于疫苗免疫效果的评价,为开展WNV流行病学调查、诊断及新型疫苗的研发奠定了基础。
曹增国王化磊李岭李岭金宏丽冯娜王丽娜冯娜李倩郑学星赵国星李倩闫飞虎赵永坤夏咸柱
关键词：西尼罗病毒抗体间接ELISA法
鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1
2017年
目的构建鼠源Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白7种选择性剪接异构体(alternatively spliced isoforms)真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中表达。方法以提取的N2a细胞总RNA为模板,采用RT-PCR、重叠延伸PCR等方法扩增目的基因Bif-1(transcript variant 1、transcript variant 2、transcript variant 3、transcript variant x1、transcript variant x2、transcript variant x3、e),并将目的基因连入真核表达载体p IRES2-EGFP,构建重组质粒。重组质粒经鉴定正确后经脂质体介导转染BHK和N2a细胞,采用荧光显微镜观察及Western blot法检测转染细胞中Bif-1蛋白的表达。结果琼脂糖凝胶电泳可见与预期大小相符的核酸条带;重组质粒经PCR、双酶切、测序鉴定证明构建正确;重组质粒转染BHK或N2a细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光;Westen blot可检出相应大小的目的条带。结论成功构建了鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中获得表达。为进一步探索Bif-1蛋白不同选择性剪接异构体的生物学功能,研究其在细胞自噬、细胞凋亡以及抗肿瘤等方面的作用奠定了基础。
侯朋飞金宏丽金宏丽曹增国李岭曹增国吴芳芳闫飞虎李国华赵永坤高玉伟王化磊
关键词：真核细胞基因表达
双抗体夹心ELISA定量检测狂犬病病毒糖蛋白方法的建立及初步应用被引量：3
2016年
目的定量检测狂犬病病毒病毒样颗粒糖蛋白含量。方法以狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体作为捕获抗体,狂犬病病毒多克隆抗体作为检测抗体,标准品为以细胞半数感染量（TCID50）准确定量的狂犬病病毒SRV9毒株病毒液,建立检测狂犬病病毒糖蛋白（RABV-GP）含量的双抗体夹心ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、重复性和灵敏度。结果双抗体夹心ELISA定量检测方法最佳工作条件为：狂犬病病毒糖蛋白蛋白单克隆抗体包被浓度为2.5μg/ml,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;狂犬病病毒多克隆抗体1∶200稀释,37℃孵育1.5h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min。结论该方法可特异性定量检测狂犬病病毒,与犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬传染性肝炎病毒均不发生反应。该方法线性检测范围为1×10^4～1.0×10^7 TCID50/ml,平均批内变异系数小于6%,平均批间变异系数小于8%。
孙宏宇王化磊金宏丽李岭闫飞虎曹增国冯娜王铁成徐盾黄耕赵永坤高玉伟杨松涛夏咸柱
关键词：狂犬病病毒双抗体夹心ELISA糖蛋白
西尼罗病毒E蛋白在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中的表达及其鉴定被引量：1
2015年
目的利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)囊膜E蛋白,并进行鉴定。方法利用分子克隆技术将WNV E基因克隆至杆状病毒供体质粒p Fast Bac1中,构建重组供体质粒p Fast Bac-E,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组穿梭质粒Bac-E,转染sf9细胞,收获含WNV E基因的重组杆状病毒Ac MNPV-E,采用间接免疫荧光及Western blot法检测E蛋白的表达。结果重组供体质粒p Fast Bac-E经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,重组穿梭质粒Bac-E经PCR鉴定证明构建正确,转染约96 h后,sf9细胞体积变大、变圆,细胞颗粒化,进而从培养板上脱落,漂浮,收获的第1代Ac MNPV-E经PCR鉴定为阳性。感染重组杆状病毒Ac MNPV-E的sf9细胞周围出现绿色荧光,表达的目的蛋白可与兔抗WNV E蛋白多克隆抗体及鼠抗His单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约53 000处可见目的蛋白条带。结论利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统成功表达了WNV E蛋白,为WNV快速诊断方法及新型疫苗的建立奠定了基础。
李岭王化磊曹增国金宏丽郑学星冯娜赵国星李倩李楠赵永坤王铁成高玉伟杨松涛夏咸柱
关键词：西尼罗病毒囊膜蛋白
委内瑞拉马脑炎病毒E2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
2017年
原核表达并纯化委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)E2蛋白胞外区,并以此为抗原免疫动物制备多克隆抗体。利用PCR扩增VEEV E2蛋白胞外区基因并将其插入到原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-VEEV-E2,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。优化诱导条件并对目的蛋白进行亲和纯化,用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光方法检测抗体的结合能力。通过PCR扩增出约为1 023bp的VEEV E2基因胞外区,成功构建重组表达质粒pET-30a(+)-VEEV-E2,在37℃,0.6mmol/L IPTG诱导3h条件下目的蛋白表达量最高且主要以包涵体形式存在;将纯化的目的蛋白免疫BALB/C小鼠成功制备了抗VEEV E2蛋白胞外区鼠源多克隆抗体,经间接免疫荧光鉴定制备的抗体能够特异性识别真核表达的VEEV E2蛋白。VEEV E2基因胞外区在大肠杆菌中获得稳定表达,且表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,为VEEV快速诊断方法及新型疫苗的研究奠定了基础。
焦翠翠金宏丽蒋天琪曹增国曹增国吴芳芳李岭邱泊宁吴芳芳黄培王琪赵永坤冯娜迟航高玉伟黄培杨松涛夏咸柱
关键词：委内瑞拉马脑炎病毒原核表达纯化多克隆抗体
RABV感染小鼠脑组织蛋白质组学分析及自噬与RABV复制关系研究
狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染引起的一种急性、高致死性中枢神经系统(CNS)疾病。该病病原RABV属于弹状病毒科狂犬病病毒属成员。据世界卫生组织(WHO)统计,全球范围内每...
李岭
关键词：狂犬病狂犬病病毒蛋白质组学病毒复制
文献传递
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