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定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价: 2015年; 目的：建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子（CFTR）的生物素-亲和素ELISA（BA-ELISA）方法并评价其可靠性。方法：优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用生物素对其标记,从人精子提取CFTR作为抗原,用辣根过氧化物酶偶联的亲和素检测,优化两种抗体浓度及实验参数,建立可定量检测CFTR蛋白的双抗体夹心BA-ELISA方法;用临床精子标本评估所建立方法的重复性、特异性等。结果：CFTR包被抗体和生物素化CFTR抗体最适浓度分别为4μg/ml和10μg/ml,最佳封闭液为1%BSA-PBST,抗原与包被抗体最佳反应时间60 min,底物显色最佳时间15 min。批内、批间变异系数分别为2.16%~9.23%和2.29%~11.71%,包被的CFTR抗体与精子胞浆蛋白无交叉反应,最低检出下限为0.15 ng/ml,标准反应曲线具有良好的线性关系R2=0.962。结论：成功创建了定量检测CFTR蛋白的ELISA方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。; 邱枫曾杰李坤陈爱君徐万祥倪崖

精子优选新方法建立及相关调节机制研究: 目的建立一种人精子优选方法并研究相关调节机制。方法设计制作一种新装置,利用孕酮进行条件优化,通过精子浓度检测验证方法可行性,同时检测精子优选前后的形态、DNA片段和凋亡状态以评价优选效果;进一步用特异性抑制剂格尔德霉素和...; 李坤孙培蓓李瑞郑东旺王雅艳倪崖; 关键词：精子辅助生殖技术孕酮 HSP90 磷酸化

调节精子功能的生殖道胞外囊泡: 哺乳动物精子从发生开始到达受精部位，在雄性及雌性生殖道均会经历一段漫长的旅程。在此过程中，精子所处的雄性和雌性生殖道环境，存在膜囊泡、外泌体和微泡等胞外囊泡(extracellular vesicles)，可与精子发生相...; 李坤倪崖

Adjudin抑制人精子获能和受精能力及其作用机制: 背景Adjudin系Lonidamine衍生物。以往我们在大鼠、家兔及猎犬研究证明Adjudin是一种潜在的男性避孕药,它通过干扰睾丸支持细胞和生精细胞的粘附连接,由此引起成熟前生精上皮精子细胞释放,导致雄性不育(Mru...; 李坤倪崖贺毅陈文颖吕建新C Yan ChengRen-shan Ge石其贤; 关键词：避孕药人精子受精能力免疫荧光染色法

人免疫缺陷病毒流行毒株的脱氧核糖核酸低密度芯片基因分型检测法: 本发明提供一种快速鉴别人类免疫缺陷病毒(HIV)流行毒株基因分型的方法，特别适宜基层普及使用的人免疫缺陷病毒流行毒株的脱氧核糖核酸低密度芯片(DNA macroarray)基因分型的检测方法。通过从HIV-1抗体阳性标本...; 倪崖黄云坚房国坚谭卓金妙坚李坤蒋娴; 文献传递

一种检测人精子活动力和化学趋向性的装置: 本实用新型公开了一种用于检测人精子活动力和化学趋向性的装置，包括底座和与底座相配合的盖子，底座的顶面凹设有样本室、引诱室和对照室，其中，引诱室和对照室之间通过第二通道相连，样本室与第二通道的中点之间通过第一通道相连，第二...; 李坤薛亚梅倪崖陈爱君石其贤谢海锋邱枫; 文献传递

快速检测尿液中人类免疫缺陷病毒-Ⅰ型抗体的垂直流免疫印迹法: 本发明提供一种免疫化学和生物化学分析方法，特别适用于婴儿、采血困难和不愿采血者快速检测尿液中人类免疫缺陷病毒-I型(HIV-1)抗体的垂直流免疫印迹法。本发明是通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电转，将HIV-1抗...; 倪崖谭卓黄云坚李坤房国坚李忠辉; 文献传递

HIV-1VN Jurkat细胞株HIV-1病毒分泌动力学及培养优化的研究被引量：1: 2006年; 目的：研究HIV-1VN Jurkat细胞株HIV-1病毒分泌动力学及新生小牛血清对细胞生长及病毒产量质量的影响。方法：通过对HIV-1VN Jurkat细胞分泌病毒的滴度、细胞活力指数、活细胞密度、病毒比分泌速率和细胞比生长速率进行观察来评价其动力学；通过对抗原纯度的变化来说明不同浓度的新生小牛血清对分泌的病毒质量的影响。结果：HIV-1VN Jurkat细胞分泌病毒的滴度与细胞活力指数、活细胞密度呈现正相关性；病毒滴度、病毒比分泌速率与细胞比生长速率不相关，随着小牛血清浓度的增加，抗原纯度有下降趋势。结论：细胞生长对数期几乎同步出现病毒分泌对数期，小牛血清浓度为9％～12％的培养基是最佳的培养条件。; 倪崖谭卓黄云坚房国坚李坤沈小琴周富英; 关键词：JURKAT细胞株小牛血清

Adjudin抑制人精子获能和受精能力及其作用机制: 2013年; 背景：Adjudin系Lonidamine衍生物。以往我们在大鼠、家兔及猎犬研究证明Adjudin是一种潜在的男性避孕药，它通过干扰睾丸支持细胞和生精细胞的粘附连接，由此引起成熟前生精上皮精子细胞释放，导致雄性不育（MrukandCheng，2011）。然而，Adjudin是否干扰人精子的受精能力及其可能的作用机制，至今尚未研究。; 李坤倪崖贺毅陈文颖吕建新C Yan ChengRenshan Ge石其贤; 关键词：受精能力精子获能睾丸支持细胞男性避孕药细胞释放生精上皮

囊性纤维化跨膜转导调节因子多表位重组蛋白的抗血清制备及表位鉴定: 囊性纤维化跨膜转导调节因子(Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)是上皮细胞膜上一种转导氯离子的离子通道,其基因突变可导致上皮细胞液体运输失调及...; 李坤陈爱君李瑞邱枫唐海平徐万祥孙志达倪崖; 关键词：重组蛋白抗血清

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李坤