李传光
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 供职机构：温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建含有小鼠CD40-IgG2aFc—IRS—GFP融合基因腺病毒并体外检测被引量：2
- 2010年
- 目的构建载有小鼠CD40-IgG2aFc—IRS—GFP融合基因片段的腺病毒载体，并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况。方法提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc—GFP质粒，测序成功后包装构建AdS—PDC316-CD40-IgG2aFc—GFP，转染293细胞。出毒后大量复制病毒并纯化，测定病毒滴度，体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的蛋白情况并检测目的蛋白表达量。结果成功构建了质粒及病毒，体外感染显示该病毒能有效的感染细胞并表达蛋白（荧光显示），检测目的蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加。当病毒浓度增加到一定程度时目的蛋白表达趋于无明显差异性。结论构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内，分泌表达目的蛋白是可行的，为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定了基础。
- 李传光方益锋谭映霞沈志坚张启瑜
- 关键词：CD40质粒构建
- 含有小鼠CD40、IgG2aFc基因片段腺病毒的构建及检测被引量：2
- 2009年
- 目的:构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况。方法:提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-IRS-GFP,转染293细胞。出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的蛋白情况并检测目的蛋白表达量。结果:成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效地感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加。当病毒浓度增加到一定程度时目的蛋白表达趋于无明显差异性。结论:构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内、分泌表达目的蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定基础。
- 李传光谭映霞沈志坚张启瑜
- 关键词：CD40融合基因质粒构建重组腺病毒
- 供肝转染含CD40Ig基因的腺病毒抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究
- 2010年
- 目的:通过腺病毒介导的CD40Ig基因治疗,阻断CD40/CD40L共刺激途径诱导免疫耐受,探讨CD40Ig对大鼠肝移植急性排斥反应的影响。方法:采用"二袖套管"法建立Lewis到BN大鼠肝移植急性排斥反应模型30只,A组10只为对照组;B组为病毒空壳组10只,术中肝脏冷保存前门静脉注射腺病毒空壳液1mL(7×1010vp/mL);C组10只为实验组,肝脏冷保存前门静脉注射含有CD40Ig基因病毒液1mL(7×1010vp/mL)。分别于术后4、7、10d每组各处死2只受体取血标本及肝组织,病理学检查肝组织及免疫组织化学检测CD40抗原的表达,ELISA法检测受体血清中的CD40Ig的表达,余大鼠观察生存情况。结果:C组移植大鼠平均存活时间延长至(53.25±13.37)d,较A组、B组明显延长(P<0.01)。C组肝脏急性免疫排斥明显减轻。A组、B组肝脏CD40抗原表达明显,C组未见CD40抗原明显表达。CD40Ig在受体内能成功表达,蛋白量于第7天最高,C组血中CD40Ig浓度明显高于A组、B组(P<0.01)。结论:重组CD40Ig基因的腺病毒能有效阻断T细胞共刺激途径,特异性抑制急性排斥反应,延长生存时间。
- 方益锋张启瑜李传光吕和平沈志坚
- 关键词：肝移植CD40重组腺病毒
