朱小飞
- 作品数：19 被引量：58H指数：5
- 供职机构：江苏省中医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HHV-8 K13基因编码蛋白在人血管内皮细胞和前列腺癌细胞系中的表达及其对细胞增殖影响的初探
- 2011年
- 目的:研究人类疱疹病毒8型(HHV-8)K13(v-FLIP)基因编码蛋白分别在人血管内皮细胞和前列腺癌细胞中的表达及其对上述两种细胞增殖能力的影响。方法:将PEF-K13-Flag-IRES/Puro重组质粒瞬时转染人血管内皮细胞系EA.HY926细胞和前列腺癌细胞系PC-3细胞,采用Western blot方法检测K13基因编码蛋白表达情况;分别运用流式细胞术和MTT方法检测K13基因编码蛋白对这两种细胞增殖的影响。结果:HHV-8 K13基因编码蛋白能够在人血管内皮细胞和前列腺癌细胞中表达,流式细胞分析和MTT结果显示,HHV-8 K13基因编码蛋白对上述两种细胞的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:HHV-8 K13基因编码蛋白可以明显抑制人血管内皮细胞和前列腺癌细胞的增殖。
- 糜远源华立新冯宁翰闵治超周峰朱小飞王子盾程伟卢春
- 关键词：前列腺癌人类疱疹病毒8型K13PC-3
- 川芎嗪对脐带间充质干细胞移植缺血性脑卒中迁移率的影响及作用机制
- 2022年
- 目的 观察体内外川芎嗪(TMP)对脐带间充质干细胞(ucMSCs)迁移的影响并研究其相关作用机制。方法 体内尾静脉移植ucMSCs入脑中动脉栓塞模型(MCAO)大鼠,荧光显微镜观察GFP-ucMSCs的迁移定位情况,Western blot检测基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体CXCR4的表达;体外采用Transwell法检测ucMSCs的迁移,观察TMP处理以及加入拮抗剂后对ucMSCs迁移率的影响,ELISA检测白介素-1β(IL-1β)的表达水平,检测迁移相关蛋白表达。结果 体内结果发现TMP预处理后ucMSCs迁移至脑梗死区的数量(IOD 2.9×105)较未处理组(IOD 0.4×105)显著增加(P <0.05),SDF-1和CXCR4的表达量也显著升高(P <0.05),且加入拮抗剂后各指标均明显降低(P <0.05);体外实验显示TMP预处理后的ucMSCs迁移细胞数由每区域20个提高至88个(P <0.05),与CXCR4的表达升高一致;TMP处理损伤PC12细胞可有效降低炎症因子IL-1β的表达(17.2 pg/mL降至13.5 pg/mL)。结论 川芎嗪通过调节SDF-1/CXCR4轴提高脐带间充质干细胞移植迁移率,并抑制炎症反应改善移植微环境,为中医药与干细胞联合治疗缺血性脑卒中提供实验依据。
- 曹慧玲汪小蓉朱小飞张洁钱世宁
- 关键词：川芎嗪脐带间充质干细胞脑卒中迁移
- HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列的初寻被引量：2
- 2011年
- 目的:构建卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)ORF50启动子系列截短序列克隆,初步寻找HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列。方法:以KSHV基因组为模板,PCR扩增KSHVORF50启动子系列截短序列,克隆至含有虫荧光素酶(Luciferase)报告基因的基本载体pGL-3中,构建含ORF50启动子系列截短序列的重组Luciferase报告质粒。系列重组报告质粒经酶切鉴定和序列测定分析后,分别转染单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染后的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),进行Luciferase活性检测,计算并比较相对Luciferase活性单位(Relative luciferase activity unit,RLU)。结果:成功分离、克隆KSHV ORF50启动子系列截短序列;HSV-1感染随后转染重组质粒p50-95、p50-46和p50-17与转染p50-1500、p50-750、p50-375及p50-185相比,Vero细胞中Luciferase活性显著下降。结论:成功构建了含KSHV ORF50启动子系列截短序列的重组Luciferase报告质粒;HSV-1所对应的、能够主导ORF50启动子活性的最小顺式调控区位于-185 bp和-95 bp之间。
- 程伟郝婷婷王子盾朱小飞冯宁翰华立新秦娣卢春
- 关键词：KSHVHSV-1虫荧光素酶
- POCT法和常规检测法在BNP检测中的对比分析被引量：3
- 2014年
- 目的比较即时检验(POCT)法和常规检测法在B型钠脲肽(BNP)检测中的相关性。方法运用Alere Triage?MeterPro(美国)荧光免疫分析仪或Beckman Coulter Access?2化学发光仪分别检测40份住院患者全血或血浆样本中BNP含量,按照CLCS EP9-A2文件要求进行对比分析。结果 POCT法和常规检测法检测住院患者血样BNP含量的线性回归良好,相关系数(r)=0.999 7。结论 POCT法和常规检测法在BNP检测中的相关性良好,POCT法具有较高的可靠性,可以用于临床检测。
- 朱小飞季明德李思洋葛亮顾万建
- 关键词：利钠肽
- 重组慢病毒载体介导HIV-1 Nef蛋白对原发性渗出性淋巴瘤细胞系和血管内皮细胞增殖作用影响的初探被引量：1
- 2011年
- 目的:构建含有HIV-1负调控因子(Nef)基因的重组慢病毒表达载体,并检测Nef蛋白在人胚肾293T细胞、体腔渗出性淋巴瘤细胞BCBL-1和人血管内皮细胞EA.hy926中的表达情况及其对BCBL-1和EA.hy926细胞增殖的影响。方法:从本实验室已构建好的含Nef基因的重组真核表达质粒pCI-neo-Nef中扩增出Nef基因,插入到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-Izs-Green中构建成pHAGE-Nef,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞。荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达并收集培养上清,此上清经0.45μm滤器过滤后即获得慢病毒悬液。梯度稀释法测定慢病毒滴度。将重组慢病毒分别感染293T、BCBL-1和EA.hy926细胞,用Western blot检测Nef蛋白的表达。通过细胞增殖实验检测Nef蛋白对BCBL-1和EA.hy926细胞增殖的影响。结果:限制性内切酶鉴定和核酸序列测序证实成功构建了含HIV-1 Nef基因的重组慢病毒表达载体,病毒滴度为1×107 TU/ml。以重组慢病毒分别感染293T、BCBL-1和EA.hy926细胞,均能检测到Nef蛋白的表达,且Nef蛋白能够抑制BCBL-1和EA.hy926细胞的增殖作用。结论:成功构建了含HIV-1 Nef基因的慢病毒表达载体,获得的慢病毒不仅能够有效感染293T、BCBL-1和EA.hy926细胞,而且能够介导Nef蛋白在这些细胞中表达。重组慢病毒载体介导的Nef蛋白能够抑制BCBL-1和EA.hy926细胞的增殖。
- 朱小飞秦娣周峰卫冰冰卢春
- 关键词：慢病毒NEF卡波济肉瘤
- 人孕酮受体膜组分1表达载体的构建及其重组蛋白对体外血管形成的诱导作用
- 2016年
- 目的:构建含人孕酮受体膜组分(progesterone receptor membrane component,PGRMC)1的重组表达质粒,转染人卵巢癌细胞,研究其调控卵巢癌细胞血管生成的作用。方法:以卵巢癌细胞为模板,采用PCR技术扩增PGRMC1基因编码序列,插入真核载体pSecTag-2B构建重组表达载体;然后,将重组载体pST-PGRMC1分别转染人胚肾上皮细胞HEK293T和卵巢癌细胞SKOV-3,采用蛋白质印迹法检测PGRMC1蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测卵巢癌细胞中VEGF m RNA的变化,用ELISA法检测上清液中VEGF的分泌情况。体外血管生成实验进一步观察PGRMC1促进体外血管生成的情况。结果:重组表达载体pST-PGRMC1构建成功,重组蛋白PGRMC1在HEK293T和SKOV-3细胞中都能够表达;PGRMC1过表达可促使卵巢癌细胞合成VEGF,并且促进体外血管的形成。结论:重组蛋白PGRMC1在促进卵巢癌细胞体外血管形成中起着重要作用,可能促进卵巢癌细胞的远处转移。
- 季明德朱小飞杨学文张春兵
- 关键词：质粒构建血管形成
- KSHV抗凋亡蛋白vFLIP编码基因的克隆表达及抗vFLIP多克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:制备由卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)的多克隆抗体,通过vFLIP重组蛋白对该抗体特异性进行鉴定,并将此抗体初步应用于天然病毒vFLIP蛋白表达的检测。方法:对vFLIP蛋白抗原表位进行预测分析,设计并合成3条多肽,将合成肽与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为抗原,免疫新西兰白兔,制备抗vFLIP的多抗;以pCDH-vFLIP质粒为模板扩增vFLIP片段,插入到真核表达载体pEF-MCS-Flag-IRES/Puro中,构建pEF-vFLIP表达载体,利用脂质体将其转染HEK293T细胞,并在其中表达vFLIP。采用ELISA、蛋白质印迹法鉴定vFLIP多克隆抗体的效价及特异性,将该抗体用于天然病毒vFLIP的检测。结果:经限制性内切酶鉴定和核酸序列测定证实成功构建了重组质粒pEF-vFLIP,Flag抗体可以特异性识别该质粒在HEK293T和EA.hy926细胞内表达的vFLIP-flag融合蛋白。进一步的ELISA结果显示,制备的兔抗vFLIP多克隆抗体效价为1∶11 000以上。该抗体不但与HEK293T和EA.hy926细胞内表达的重组vFLIP-flag融合蛋白反应,而且能够特异性识别PEL细胞中天然的病毒vFLIP蛋白。结论:构建了含vFLIP基因的重组真核表达载体;采用人工合成肽作为半抗原制备的抗KSHV vFLIP多抗,可以成功地检测重组vFLIP蛋白和天然病毒蛋白。
- 马新廷郝婷婷朱小飞卢春
- 关键词：合成肽多克隆抗体卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- 分泌性HIV-1 Nef-EGFP融合蛋白表达载体的构建与鉴定
- 2012年
- 目的:构建含有人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)负性调节因子(nega-tive regulation factor,Nef)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的重组融合蛋白分泌性表达载体,并检测该融合蛋白在真核细胞中的表达及其在培养上清中分泌情况,为进一步研究Nef功能奠定基础。方法:利用PCR扩增出HIV-1 Nef和EGFP基因,插入到分泌性表达载体pSecTag2B中。构建的pSecTag2B-Nef-EGFP融合蛋白表达质粒,转染293T细胞,荧光显微镜下观测细胞中Nef-EGFP融合蛋白的表达。收集细胞及上清液,蛋白质印迹和ELISA法分别检测Nef-EGFP融合蛋白的表达及其分泌。结果:限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实,成功构建了含有Nef-EGFP基因的分泌性表达载体,该质粒转染293T细胞后,蛋白质印迹法能够检测到Nef-EGFP融合蛋白的表达条带,ELISA法检测上清液中目的蛋白分泌量为1.7 ng/ml。结论:成功构建含有Nef-EGFP的融合蛋白表达质粒,融合蛋白Nef-EGFP在293T细胞中获得表达,并能分泌到胞外。
- 郝婷婷马新廷朱小飞卢春
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白融合蛋白
- 人类免疫缺陷病毒-1负调控因子通过调控糖原合成酶激酶-3β/β连环蛋白信号通路促进人类疱疹病毒8型病毒白细胞介素6诱导血管生成
- 2014年
- 目的 探讨糖原合成酶激酶（GSK）3β/β连环蛋白信号通路在HIV 1负调控因子（Nef）蛋白促进人类疱疹病毒8型（HHV-8）病毒白细胞介素6（vIL-6）诱导血管生成中的作用.方法 将GSK-3β突变质粒GSK-3β-S9A、显性负相质粒GSK 3β-DN及其对照质粒pcDNA3.1＋分别转染稳定表达HHV-8 vIL-6、HIV-1-Nef以及共表达vIL-6和Nef蛋白的内皮细胞,观察EA.hy 926细胞微管形成;将上述转染质粒的细胞接种鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）检测血管生成情况;Western印迹法检测转染上述质粒的细胞及CAM组织中GSK-3β/β连环蛋白通路中信号分子的表达水平.计量资料两两比较采用t检验.结果 转染GSK-3β-DN降低GSK-3β活性,能增强HIV-1 Nef蛋白促进vIL-6诱导微管形成（3.42比2.51,t=3.67,P＜0.01）和血管生成（6.25比3.97,t=4.06,P＜0.01）的能力.转染GSK-3β-S9A活化GSK-3β,则能显著抑制Nef蛋白的上述功能（0.62比2.51,t=8.48,P＜0.01;0.39比3.97,t=8.59,P＜0.01）.转染GSK-3β-DN后,细胞或组织中信号通路下游β连环蛋白（细胞中：3.53比2.07,t=6.60,P＜0.05;组织中：2.76比1.74,t=17.40,P＜0.01）、血管内皮生长因子（VEGF,细胞中：2.68比1.87,t=4.28,P＜0.01;组织中：2.20比1.39,t=7.08,P＜0.01）的表达升高;转染GSK-3β-S9A后,GSK-3β的磷酸化水平降低（细胞中：0.50比1.47,t=7.33,P＜0.01;组织中：0.35比1.97,t=10.72,P＜0.01）,β连环蛋白（细胞中：1.05比2.62,t=29.50,P＜0.01;组织中：0.79比1.77,t=5.72,P＜0.01）、VEGF（细胞中：0.74比2.16,t=20.95,P＜0.01;组织中：0.43比1.65,t=11.89,P＜0.01）的表达也随之减少.结论 GSK-3β/β连环蛋白信号通路参与调控HIV-1 Nef蛋白促进HHV-8 vIL-6诱导血管生成,极可能成为临床治疗艾滋病患者卡波齐肉瘤的一个潜在分子靶点.
- 姚水洪邱惠萍刘建军朱小飞秦娣严沁卢春
- 关键词：人免疫缺陷病毒1型负调控因子糖原合成酶激酶3白细胞介素6
- 川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后氧化应激、Ca^(2+)-ATP酶活性及炎症因子的影响被引量：17
- 2021年
- 目的通过观察脑组织氧自由基、钙离子负荷及炎性反应变化研究川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗作用。方法30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、川芎嗪组(n=10),模型组、川芎嗪组采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法建立大鼠脑缺血再灌注模型,24 h后腹腔注射川芎嗪(50 mg/kg,每日1次,连续6 d),造模第1、3、7天进行神经功能评分,造模第7天通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色及扫描脑梗死区光密度计算梗死率,检测脑组织氧自由基一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)水平、钙离子腺苷三磷酸酶(Ca^(2+)-ATP酶)活性、炎症因子基因相对表达水平。结果造模第7天,模型组大鼠神经功能评分、梗死率与假手术组比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,川芎嗪组大鼠神经功能评分和梗死率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),脑组织NO、MDA水平及炎症因子基因表达均下调(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和Ca^(2+)-ATP酶活性均升高(P<0.05)。结论川芎嗪通过调节大鼠脑组织氧化和抗氧化平衡,清除氧自由基,提高Ca^(2+)-ATP酶活性,抑制细胞内钙超载,抑制炎性反应等起到改善脑缺血再灌注损伤,保护神经细胞的作用,为探讨临床中药治疗脑卒中机制奠定实验基础。
- 葛亮曹慧玲张洁徐敏朱小飞陈云峰
- 关键词：川芎嗪脑缺血再灌注炎症因子
