张超
- 作品数：11 被引量：22H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- C型肉毒毒素的制备及类毒保护力初探
- 将肉毒梭菌经适宜条件的产毒培养后纯化,并进行相关鉴定。制备的毒素用分段脱毒法脱毒,并进行类毒素保护力的初步研究。以不同蛋白含量类毒素免疫小鼠后攻毒,结果显示,蛋白含量为0.625ug的类毒素免疫2针或蛋白含量为1.25u...
- 高建军张超赵红王棣
- 关键词：免疫原性
- 文献传递
- A、B、E、F型肉毒抗毒素的制备与检定被引量：1
- 2005年
- 目的 制备马抗肉毒 (Botulinum)A、B、E、F型抗毒素。方法 菌种经过复苏分离与检定后 ,采用产毒培养、酸沉、盐析及脱毒等步骤 ,制备肉毒A、B、E、F四型类毒素 (Toxoid)和试验毒素 (Testtoxin) ,免疫健康马匹。结果 各型血浆效价均超过 2 0 0 0年版《中国生物制品规程》中对于抗毒素的要求 ,B型与F型的效价均超过 2倍以上 ,A型与E型也达到较好的应答水平。结论 已成功制备四型肉毒抗毒素。
- 王棣陆俭杨仲璠赵红傅思武王永红张超陈孝婷彭恭嘉
- 关键词：抗毒素效价《中国生物制品规程》盐析产毒
- 从人源天然ScFv噬菌体抗体库中筛选A型肉毒毒素特异性抗体被引量：5
- 2011年
- 目的:以不同形式的A型肉毒毒素或类毒素为靶抗原,对已经构建的人源天然ScFv噬菌体抗体库进行特异性抗体的筛选及特异性抗体的序列分析。方法:制备3种不同形式的A型肉毒毒素或类毒素,抗原梯度包被免疫管,对人源天然ScFv噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮"吸附-洗脱-扩增"淘选富集,制备单克隆噬菌体抗体颗粒,用ELISA验证ScFv的结合活性,并对获得的阳性克隆进行基因序列分析。结果:用3种不同形式的抗原进行筛选,各挑180个克隆进行单克隆噬菌体抗体颗粒的ELISA分析,其中以A型肉毒类毒素筛选获得52个阳性克隆,阳性率为28.8%,随机挑取12个克隆测序,结果表明7个ScFv序列正确且各不相同;以纯化后A型肉毒神经毒素(BONT/A)筛选获得18个阳性克隆,阳性率为10%,测序结果表明获得的14个ScFv序列正确且各不不同;以原核表达的A型肉毒毒素重链C段筛选获得122个阳性克隆,阳性率为68%,随机挑取55个克隆测序,结果表明30个正确的ScFv序列中14个系列完全相同,16个序列各不相同;结论:应用固相筛选的方法,从人源天然ScFv噬菌体抗体库可以获得肉毒毒素特异性抗体,为抗肉毒毒素马血清的更新替换提供了研究依据与应用基础。
- 毛晓燕卢卫嘉乔玉玲熊颖张超马瑞
- 关键词：噬菌体抗体库A型肉毒毒素
- 16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用
- 目的:建立一种快速,可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法:从肉毒梭菌中提取基因组DNA为模板,通过16S rRNA特异性引物进行PCR,扩增得到16S rDNA序列并测序。将结果通过Clustal和Mega两个软件分...
- 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋
- 关键词：肉毒梭菌进化树
- 文献传递
- C型肉毒梭菌的鉴定及其神经毒素基因全序列测定被引量：5
- 2011年
- 目的对3株C型肉毒梭菌进行鉴定,并选择其中1株进行基因全序列测定。方法对3株C型肉毒梭菌(C6514、C314/91和CAXA)进行生化鉴定、检出试验、确证试验、毒力测定、毒素定型试验,并对C6514株进行神经毒素基因全序列测序。结果 3株菌均能发酵葡萄糖,不能发酵乳糖,不能发酵牛奶和形成吲哚;3株菌均为产毒株;C6514株毒力较高,为2×104 LD50/ml;加C型或混合型肉毒诊断血清或加明胶磷酸盐缓冲液(GPB)煮沸均可中和或灭活C型肉毒梭菌产生的毒素;BoNT/C测得的序列拼接后与GenBank中序列号为D90210的基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99%。结论 3株肉毒梭菌均为典型的C型肉毒梭菌。
- 高建军张超毛晓燕曹馨匀
- 关键词：生物学鉴定神经毒素类
- C型肉毒毒素的制备及类毒素保护力初探
- 将肉毒梭菌经适宜条件的产毒培养后纯化，并进行相关鉴定。制备的毒素用分段脱毒法脱毒，并进行类毒素保护力的初步研究。以不同蛋白含量类毒素免疫小鼠后攻毒，结果显示，蛋白含量为0.625μg的类毒素免疫2针或蛋白含量为1.25μ...
- 高建军张超赵红王棣
- 关键词：纯化生物制品
- 文献传递
- 16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用被引量：3
- 2011年
- 目的建立一种快速、可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法以从LCL063、830110、LC175、LCL155、66418、N153、61082、ALASKA、IWANAI共9株梭菌中提取的基因组DNA为模板,利用16SrRNA特异性引物分别进行PCR扩增并进行T-A克隆转化、测序。通过Clustal和Mega软件分析16SrDNA序列,以NJ法和MP法构建进化树,分析其种属特异性。结果 16SrRNA分型结果可判断出LCL063、830110、LCL175为产E型毒素的酪酸梭菌。IWANAI与ALASKA株为E型肉毒梭菌。与传统分型鉴定得到的结果一致。结论 16SrRNA在肉毒梭菌分型鉴定中具有快速、准确的优势,随着核糖体库的不断完善,有望成为细菌分型鉴定的标准依据。
- 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋
- 关键词：肉毒梭菌进化树细菌分型技术
- F型肉毒毒素的制备及类毒素免疫原性初探被引量：2
- 2010年
- 将F型肉毒梭菌经适宜条件产毒培养后,以硫酸铵盐析和酸沉两种不同工艺制备的F型肉毒毒素,用分段脱毒法脱毒制备类毒素,分别免疫豚鼠、马匹后测定免疫血清抗体效价。结果显示,两种工艺制备的毒素其类毒素都具有较好的免疫原性。
- 高建军彭恭嘉谢小荣唐琰张超
- 关键词：精制类毒素免疫原性
- C型肉毒毒素的制备及类毒素保护力初探被引量：3
- 2008年
- 将C型肉毒梭菌经适宜条件的产毒培养后纯化,并进行相关鉴定。制备的C型肉毒毒素用分段脱毒法脱毒,并进行类毒素保护力的初步研究。以不同蛋白含量C型肉毒类毒素免疫小鼠后攻毒,结果显示,蛋白含量为0.625μg的类毒素免疫2针或蛋白含量为1.25μg的类毒素免疫1针均可保护50LD50的C型肉毒毒素攻击。蛋白含量为5μg的C型肉毒类毒素与福氏不完全佐剂配制的抗原免疫小鼠3次所得抗血清的保护力(Anti LD50/ml)为4.3×104。说明用该纯化工艺制备的C型肉毒类毒素具有很好的免疫原性,作为抗原成分用于C型肉毒疫苗和C型肉毒抗毒素的研究和生产具有较好的应用潜力。
- 高建军张超赵红王棣
- 关键词：纯化类毒素
- 鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选被引量：3
- 2015年
- 目的：构建鼠源E型肉毒毒素（BoNT/E）免疫噬菌体单链抗体库,筛选BoNT/E特异性抗体。方法：从E型肉毒类毒素免疫小鼠的脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,分别扩增出小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因;通过重叠延伸PCR将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成scFv基因,重组于噬粒pS100中,电转化大肠杆菌TG_1,合并所有克隆成初级库;随机挑取克隆进行核苷酸序列测定,对初级库序列多样性进行分析;在辅助噬菌体M_（13）K_（07）的拯救下,构建成scFv噬菌体抗体库;用纯化的BoNT/E对鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库进行3轮富集筛选,制备单克隆的噬菌体抗体颗粒进行酶联免疫吸附试验,阳性克隆进行核苷酸序列测定。结果：鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库的库容为7.09×10^7,随机挑取的20个克隆序列各不相同,序列正确率为85%,基本覆盖了IgHV、IgKV、IgLV的优势家族;纯化的BoNT/E作为抗原通过3轮筛选,噬菌体抗体富集了66倍,第3轮筛选后随机挑取90个克隆制备噬菌体抗体颗粒,酶联免疫吸附试验分析有88个呈现阳性反应,序列比对得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。结论：构建了库容量达7.09×10^7的鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库,筛选得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。
- 秦海艳王建锋熊颖卢卫嘉张超毛晓燕
- 关键词：噬菌体展示抗体库单链抗体
