卢卫嘉
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
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- 16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用被引量：3
- 2011年
- 目的建立一种快速、可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法以从LCL063、830110、LC175、LCL155、66418、N153、61082、ALASKA、IWANAI共9株梭菌中提取的基因组DNA为模板,利用16SrRNA特异性引物分别进行PCR扩增并进行T-A克隆转化、测序。通过Clustal和Mega软件分析16SrDNA序列,以NJ法和MP法构建进化树,分析其种属特异性。结果 16SrRNA分型结果可判断出LCL063、830110、LCL175为产E型毒素的酪酸梭菌。IWANAI与ALASKA株为E型肉毒梭菌。与传统分型鉴定得到的结果一致。结论 16SrRNA在肉毒梭菌分型鉴定中具有快速、准确的优势,随着核糖体库的不断完善,有望成为细菌分型鉴定的标准依据。
- 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋
- 关键词：肉毒梭菌进化树细菌分型技术
- 从人源天然ScFv噬菌体抗体库中筛选A型肉毒毒素特异性抗体被引量：5
- 2011年
- 目的:以不同形式的A型肉毒毒素或类毒素为靶抗原,对已经构建的人源天然ScFv噬菌体抗体库进行特异性抗体的筛选及特异性抗体的序列分析。方法:制备3种不同形式的A型肉毒毒素或类毒素,抗原梯度包被免疫管,对人源天然ScFv噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮"吸附-洗脱-扩增"淘选富集,制备单克隆噬菌体抗体颗粒,用ELISA验证ScFv的结合活性,并对获得的阳性克隆进行基因序列分析。结果:用3种不同形式的抗原进行筛选,各挑180个克隆进行单克隆噬菌体抗体颗粒的ELISA分析,其中以A型肉毒类毒素筛选获得52个阳性克隆,阳性率为28.8%,随机挑取12个克隆测序,结果表明7个ScFv序列正确且各不相同;以纯化后A型肉毒神经毒素(BONT/A)筛选获得18个阳性克隆,阳性率为10%,测序结果表明获得的14个ScFv序列正确且各不不同;以原核表达的A型肉毒毒素重链C段筛选获得122个阳性克隆,阳性率为68%,随机挑取55个克隆测序,结果表明30个正确的ScFv序列中14个系列完全相同,16个序列各不相同;结论:应用固相筛选的方法,从人源天然ScFv噬菌体抗体库可以获得肉毒毒素特异性抗体,为抗肉毒毒素马血清的更新替换提供了研究依据与应用基础。
- 毛晓燕卢卫嘉乔玉玲熊颖张超马瑞
- 关键词：噬菌体抗体库A型肉毒毒素
- 一种检测A型肉毒毒素的高灵敏度酶联免疫吸附法被引量：3
- 2012年
- 目的:建立检测A型肉毒毒素的酶联免疫吸附法。方法:利用重组A型肉毒毒素重链羧基端片段作为免疫原和B淋巴细胞杂交瘤技术,获得了56株高亲和力的抗A型肉毒毒素单克隆抗体(mAb),建立了检测A型肉毒毒素的双mAb夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。结果:该方法理论检测下限达到了8.34 pg/mL,检测天然A型肉毒毒素制剂时其实际检测下限可达0.78 LD50/mL,与其他型别的肉毒毒素均未见交叉反应。通过测定基质中的回收率,发现基质中的相关的蛋白对检测具有较大的影响。结论:该方法具有灵敏度高,特异性好,使用方便等优点,具有较高的的实用价值。
- 刘志佳李永明宋朝君李娜卢卫嘉孙元杰毛晓燕杨琨金伯泉
- 关键词：A型肉毒毒素酶联免疫吸附法单克隆抗体
- 重组表达A型肉毒毒素重链C端多肽及其在多抗血清中的抗原性研究
- 2016年
- 目的对A型肉毒毒素重链C端多肽原始基因序列进行密码子优化后转入大肠杆菌系统进行原核表达并纯化,研究其在多抗血清中的抗原性。方法使用http://www.jcat.de/数据库等生物信息学技术对A型肉毒毒素重链C端多肽原始基因序列进行密码子优化后装入原核表达载体p ET-22b(+)中,转入大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)表达并纯化,通过动物实验研究其在多抗血清中的抗原性。结果成功表达并纯化了A型肉毒毒素重链C端多肽,并对其抗原性进行验证。结论 A型肉毒毒素重链C端多肽作为抗肉毒毒素的二代亚单位疫苗组分以及肉毒类毒素的替代品,在制备以及激起中和抗体的方面具有明显的优势。
- 卢卫嘉王建锋陈继军秦海燕毛晓燕
- 关键词：抗原性
- 16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用
- 目的:建立一种快速,可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法:从肉毒梭菌中提取基因组DNA为模板,通过16S rRNA特异性引物进行PCR,扩增得到16S rDNA序列并测序。将结果通过Clustal和Mega两个软件分...
- 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋
- 关键词：肉毒梭菌进化树
- 文献传递
- 人源天然ScFv噬菌体抗体库的构建及鉴定被引量：8
- 2010年
- 噬菌体抗体库技术是获得治疗性抗体的一条重要途径。以20份健康人外周血为样本,通过提取淋巴细胞、逆转录-PCR(RT-PCR)、抗体可变区基因的扩增、重叠PCR获得单链抗体(ScFv)基因,将ScFv克隆入噬粒载体,通过近300次的电转化获得了库容量为1.3×109的全人源天然ScFv噬菌体抗体库。通过随机挑克隆测序和用5种不同抗原筛选对抗体库进行了初步验证。随机测序表明抗体库具有较好的多样性,用5种不同抗原对其进行筛选,均获得了特异性噬菌体抗体的不同富集,表明成功构建了一个多样性良好的人源天然ScFv噬菌体抗体库。
- 毛晓燕乔玉玲卢卫嘉马瑞赵红
- 关键词：噬菌体展示技术抗体库
- 鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选被引量：3
- 2015年
- 目的：构建鼠源E型肉毒毒素（BoNT/E）免疫噬菌体单链抗体库,筛选BoNT/E特异性抗体。方法：从E型肉毒类毒素免疫小鼠的脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,分别扩增出小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因;通过重叠延伸PCR将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成scFv基因,重组于噬粒pS100中,电转化大肠杆菌TG_1,合并所有克隆成初级库;随机挑取克隆进行核苷酸序列测定,对初级库序列多样性进行分析;在辅助噬菌体M_（13）K_（07）的拯救下,构建成scFv噬菌体抗体库;用纯化的BoNT/E对鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库进行3轮富集筛选,制备单克隆的噬菌体抗体颗粒进行酶联免疫吸附试验,阳性克隆进行核苷酸序列测定。结果：鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库的库容为7.09×10^7,随机挑取的20个克隆序列各不相同,序列正确率为85%,基本覆盖了IgHV、IgKV、IgLV的优势家族;纯化的BoNT/E作为抗原通过3轮筛选,噬菌体抗体富集了66倍,第3轮筛选后随机挑取90个克隆制备噬菌体抗体颗粒,酶联免疫吸附试验分析有88个呈现阳性反应,序列比对得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。结论：构建了库容量达7.09×10^7的鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库,筛选得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。
- 秦海艳王建锋熊颖卢卫嘉张超毛晓燕
- 关键词：噬菌体展示抗体库单链抗体
- 小鼠E型肉毒毒素中毒血清蛋白质组学及组织病理学研究
- 目的:以小鼠为动物模型研究E型肉毒毒素中毒主要器官病理变化及血清蛋白变化,为肉毒毒素中毒早期诊断寻找生物标志物及中毒病理学研究奠定基础。方法:腹腔注射清洁级小鼠E型肉毒毒素1个LD,眼眶采集存活小鼠血液,离心分离血清,取...
- 王建锋毛晓燕张超卢卫嘉陈继军秦海燕
- 关键词：肉毒毒素中毒病理学蛋白质组
- 文献传递
