张萍
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划创新研究群体科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞周期抑制因子p19ARF对人二倍体细胞衰老的影响被引量：4
- 2007年
- 为了探讨细胞周期抑制因子p19ARF对人二倍体细胞复制性衰老的影响,构建了重组p19ARF真核表达载体,并通过脂质体的介导将p19ARF基因转染到人二倍体成纤维细胞WI-38中过表达,观察其对WI-38细胞衰老的影响.结果发现与对照细胞相比,在p19ARF基因导入后,细胞中p53和p21的表达水平明显上调,细胞传代数减少10～12代,生长速率降低,细胞周期阻滞于G1期,衰老标志物SA-β-gal染色阳性率上升,线粒体膜电位下降,细胞形态呈衰老细胞样变化,这些结果表明p19ARF高表达可促进人二倍体细胞的衰老进程.
- 白雪源陈香美侯剀张萍冯哲傅博
- 关键词：细胞衰老二倍体细胞细胞周期抑癌基因
- 抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究
- 2006年
- 目的采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-humanorganicaniontransporter3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人肾组织RNA中扩增其261bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FlT3L同时免疫小鼠,5周后获得血清抗体,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果成功构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,序列分析鉴定正确,ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白62×103的hOAT3,人肾组织免疫组化提示该抗体识别定位在肾小管上皮细胞基底膜。结论成功用基因免疫方法制备高效特异性抗hOAT3多克隆抗体,为今后的生理病理研究奠定基础。
- 张萍陈香美许国双何娅妮吴镝杨聚荣
- 关键词：肾脏基因免疫抗体制备
- 抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究被引量：1
- 2005年
- 目的:拟采用一套新的基因免疫系统制备高特异性和高效价的小鼠抗有机阴离子转运蛋白4(hOAT4 )多克隆抗体,并用该抗体对hOAT4在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法:应用Accelrys软件分析hOAT4抗原表位,选择其中免疫源性较强的细胞内表位(E2 78～R345 ) ,从人肾组织总RNA中用反转录-聚合酶链反应(RT -PCR)方法扩增其2 0 4bp的cDNA序列,克隆到pBQAP -OVA构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi -FlT3L同时免疫小鼠,5周后取血清抗体,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果:成功构建基因免疫载体pBQAP -OVA -hOAT4 ,经酶切及序列分析鉴定完全正确。ELISA方法测得抗体滴度高达1∶30 0 0 ,该抗体识别人肾皮质膜蛋白和肾小管刷状缘蛋白6 5kD糖基化的hOAT4。人肾组织免疫组化结果提示该抗体识别定位在近段肾小管上皮细胞刷状缘的hOAT4。结论:用基因免疫方法可以成功制备高效价和高特异性抗hOAT4多克隆抗体。
- 吴镝许国双陈香美师锁柱洪权张萍吕扬
- 关键词：多克隆抗体免疫系统
