张慕蕊
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：吉林大学白求恩医学院病理生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划吉林省科技厅重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 逆转录病毒介导的靶向人Slingshot-1L基因稳定转染人骨髓间充质干细胞系的建立
- 2010年
- 目的建立过表达该基因的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)稳定转染细胞系。方法采用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离、纯化hMSCs。应用脂质体法将Slingshot-1L重组逆转录病毒载体pLNCX-Slingshot-1L转染PA317包装细胞,G418筛选,滴度测定。收集病毒上清感染第2代hMSCs,G418筛选,挑选阳性克隆,扩增培养。结果采用密度梯度离心法联合贴壁培养法成功分离、纯化了hMSCs,应用pLNCX-Slingshot-1L重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,获得滴度为5×108CFU/L的病毒上清。收集病毒上清感染hMSCs,获得了过表达Slingshot-1L基因的hMSCs。结论应用Slingshot-1L重组逆转录病毒载体,成功建立了过表达该基因的hMSCs稳定转染细胞系。
- 张慕蕊王岩马英智赵东旭杨旭芳李玉林
- 关键词：逆转录病毒稳定转染干细胞
- 转移潜能不同的人前列腺癌细胞系差异膜蛋白质组学的分析被引量：2
- 2008年
- 目的:通过应用鸟枪法蛋白质组学技术发现早期诊断和逆转前列腺癌转移的分子标志。方法:应用鸟枪法蛋白质组学技术,比较人高转移前列腺癌细胞株(PC-3M)和人低转移前列腺癌细胞株(PC-3)间膜蛋白表达的差异。用SDS-PAGE胶分离膜蛋白,并且进行胰酶消化,用反相液相色谱分离肽混合物后进行ESI-MS/MS鉴定,用数据库查询结合生物信息学技术比较分析并识别细胞间的差异表达膜蛋白。结果:1)利用Gel-1DLC-MS/MS分析,在严格的过滤参数条件下鉴定了PC-3和PC-3M两种细胞中的蛋白,在PC-3细胞中鉴定了2172个蛋白,在PC-3M细胞中鉴定了2023个蛋白。2)用GOA分析软件进行分类,PC-3细胞中1499个蛋白为已知细胞组分,其中564(38.13%)个蛋白为膜蛋白或者膜相关蛋白;PC-3M细胞中1391个蛋白为已知细胞组分,细胞组分中527(38.30%)个为膜蛋白或者膜相关蛋白。几个假设蛋白和cDNA序列也被预测。3)用蛋白名称和IPI数据库号对比分析后发现有161个蛋白质仅在PC-3前列腺癌细胞株中检测到有表达,135个蛋白质仅在PC-3M中检测到有表达。结论:人高、低转移前列腺癌细胞株的膜蛋白表达存在明显差异,为进一步发现前列腺癌转移相关分子和阐明前列腺癌侵袭转移的分子机制提供实验证据。
- 李群李一雷李荣贵张丽红张慕蕊李玉林
- 关键词：鸟枪法
- 逆转录病毒介导的靶向人Slingshot-1L基因的稳定转染细胞系的建立被引量：1
- 2010年
- 目的应用Slingshot(SSH)-1L重组逆转录病毒载体,建立过表达该基因的稳定转染细胞系。方法用脂质体法将含SSH-1L的重组逆转录病毒载体pLNCX-SSH-1L转染PA317包装细胞,G418筛选,滴度测定。收集病毒上清感染MG63细胞,G418筛选。结果应用pLNCX-Slingshot-1L重组逆转录病毒载体,获得滴度为5×108 CFU/L的病毒上清,感染MG63细胞,获得了过表达SSH-1L基因的MG63细胞。结论应用SSH-1L重组逆转录病毒载体,成功建立了过表达该基因的稳定细胞系。
- 张慕蕊王岩赵东旭李新娜李群李玉林
- 关键词：逆转录病毒稳定转染
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞实验方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨体外培养并诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为心肌细胞(CMs)的实验方法。方法:采用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离、纯化hMSCs,采用5-氮杂胞苷(5-Aza)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对hMSCs进行联合诱导,诱导3～4周,观察细胞形态学的变化,免疫组织化学方法鉴定肌细胞及心肌细胞特异蛋白的表达。结果:hMSCs体外经5-Aza和bFGF联合诱导1～2周后,细胞体积较诱导前增大,呈长梭形。诱导2～3周后细胞伸出伪足呈多爪形;诱导3～4周后细胞伪足间相互连接形成肌管样结构。联合诱导3～4周后免疫组织化学鉴定结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnⅠ)和横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)表达均呈阳性。结论:hMSCs在体外经5-Aza和bFGF联合诱导可以分化为CMs。
- 张慕蕊王岩李玉林
- 关键词：间质干细胞5-氮胞苷
- Slingshot-1L磷酸酶在人骨髓间充质干细胞成心肌诱导分化中的作用研究
- 本研究以体外培养的hMSCs为对象,联合应用密度梯度离心法,贴壁筛选法和单克隆培养法分离培养出高纯度的hMSCs,在体外可以传代培养和大量扩增,细胞在12代前生物学特性稳定,仍保持未分化状态,可作为后续实验的细胞来源。 ...
- 张慕蕊
- 关键词：人骨髓间充质干细胞
- 文献传递
- 人脂肪干细胞向内皮分化最佳诱导体系的建立被引量：3
- 2010年
- 目的探讨人脂肪干细胞(human Adipose-derived stem cells,hADSCs)体外分化为内皮细胞的最佳诱导体系。方法利用胶原酶消化法和贴壁筛选法从人脂肪组织中分离、培养及扩增hADSCs,分3组分别进行内皮诱导:即纤维连接蛋白(fibronectin,FN)包被组、明胶包被组和未铺组;同时诱导液分为两组:单纯内皮细胞生长培养基(EGM2-MV)组及内皮细胞生长培养基(EGM2-MV)+50ng/ml血管内皮细胞生长因子(VEGF165)组。诱导15d后,通过流式细胞术检测各组内皮细胞特异性表面抗原CD34的表达;通过相差显微镜观察诱导前后细胞的一般形态学特征。结果体外分离、培养出高度同源性的hADSCs,CD29、CD44、CD90、CD105及CD166呈阳性表达,而CD34、CD45及HLA-DR呈阴性表达;诱导后细胞流式结果显示单纯EGM-2MV诱导的3组细胞内皮细胞特异性标志CD34阴性表达,而EGM2-MV+50ng/mlVEGF165诱导的细胞,其中FN包被组CD34表达率为8.4%,明胶包被组为5.4%,未铺组为4.2%;相差显微镜下可见诱导后细胞呈三角形或多边形,融合处呈铺路石样生长。结论FN作为细胞外基质与EGM2-MV+50ng/mlVEGF165组成的诱导液协同作用,构成了hADSCs体外分化为内皮细胞的最佳诱导体系,可为临床上缺血性疾病的自体细胞移植治疗提供大量的种子细胞来源。
- 杨旭芳何旭何牮张慕蕊张丽红李玉林
- 关键词：人脂肪干细胞流式细胞术内皮分化
