尹尚莲
- 作品数：12 被引量：70H指数：4
- 供职机构：云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究被引量：2
- 2014年
- 为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。
- 刘晓慧杨云庆叶玲玲祝贺吕建强赵文华颜红尹尚莲花群义杨仕标张光培周晓黎董俊艾军
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体竞争ELISA
- 羊痘病毒P32蛋白编码基因的克隆及表达被引量：14
- 2006年
- 为获得山羊痘病毒膜蛋白重组P32抗原,根据其基因序列设计合成了1对特异性引物, 对CaPV P32基因进行了PCR扩增,产物大小约为969 bp;产物回收纯化后,将其克隆至pBAD／ Thio-TOPO载体中,转化TOP10大肠埃希氏菌感受态细胞,与已报道的多株CaPV P32基因序列的同源性高达99％;相应地,氨基酸序列同源性为98％。经测序筛选出阳性克隆,该重组菌株经 L-arabinose诱导,可稳定、高效地表达CaPV P32抗原。表达蛋白为融合蛋白,分子质量约 51．53 ku。
- 康文玉徐自忠花群义杨云庆周晓黎董俊尹尚莲高洪
- 关键词：山羊痘病毒克隆
- 蓝舌病灭活苗免疫与自然感染的鉴别诊断研究
- 周晓黎艾军杨云庆叶玲玲张光培祝贺董俊尹尚莲
- 蓝舌病主要侵害绵羊等反刍动物,是世界动物卫生组织(OIE)需通报的动物疫病,中国规定为一类动物传染病.2008年,欧洲流行的蓝舌病病毒8型,给当地反刍动物的健康造成极大危害.欧洲国家采取了疫苗免疫的方式进行防控.为此,课...
- 关键词：
- 关键词：蓝舌病动物疫病疫苗免疫动物传染病
- 小反刍兽疫的诊断方法和疫苗研究现状
- 小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)对绵羊和山羊的发病率和死亡率分别可高达100%和90%[1],在发展中国家引起严重的社会经济问题,被OIE列为A类疾病。该病首次...
- 尹尚莲艾军叶玲玲董俊杨晓花张其艳周晓黎
- 关键词：小反刍兽疫病毒地理分布
- 文献传递
- 猴B病毒ELISA检测方法的建立
- 董俊艾军叶玲玲杨云庆周晓黎祝贺张光培尹尚莲
- 猴B病毒是一种人畜共患病,感染多种哺乳动物和禽类.近年来,在中国每年均有一定数量的猕猴、食蟹猴等出口欧美地区,而且也从东南亚地区进口一定数量的猴子,为此对其进出境猴子B病毒的检测,一直是检验检疫工作的重要任务之一.在国家...
- 关键词：
- 关键词：人畜共患病抗体检测方法
- 检验检疫新技术研究进展
- 2006年
- 最近几年才兴起的生物芯片、核酸序列依赖性扩增法(NASBA)及荧光定量PCR技术同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐。但仍有好多初学者对这方法的知识了解甚少,为了解决这一问题,本文就从生物芯片、核酸序列依赖性扩增法及荧光定量PCR的定义、原理、检测中的应用和各自的优点做一简单的综述,以便相互之间的学习和进步。
- 刘玉洪徐自忠花群义高洪杨云庆周晓黎董俊尹尚莲
- 关键词：生物芯片NASBA荧光定量
- 小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因原核表达载体的构建及表达被引量：13
- 2006年
- 参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRV H基因,将其克隆至pUC18-T质粒中,转化E.coliJM109感受态细胞,构建并选择PPRV H基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio-TOPO载体中,转化E.coliTOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRV H基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRV H抗原。SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2 g/L的L-阿拉伯糖诱导5 h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83 ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占菌体总蛋白的10%。Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRV H蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRV H糖蛋白抗原。
- 刘玉洪花群义徐自忠杨云庆周晓黎董俊尹尚莲许靖逸高洪
- 关键词：小反刍兽疫病毒
- 羊痘病毒实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立被引量：27
- 2006年
- 参照羊痘病毒(CaPV)P32的基因序列,设计合成了2套引物和1条探针,建立了实时荧光定量PCR技术,对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示,用300 nmol／L引物浓度和200 nmol／L探针浓度,获得的Cr值较小,而△Rn最大;可检测到相当于0．1 TCID50的病毒DNA;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0．999 5以上;组内和组间试验重复性的变异系数分别为2．3％和3．4％;与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,可同时检测大量样品等优点。表明。荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法,可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。
- 康文玉徐自忠花群义杨云庆周晓黎董俊尹尚莲高洪
- 关键词：羊痘病毒PCR
- 小反刍兽疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备与初步应用被引量：4
- 2012年
- 针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用。以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗,Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法。结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8。生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b;5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800;血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性;相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点;2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104。应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20%的符合率。本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV的c-ELISA检测方法。
- 龙云凤周晓黎杨俊兴王琼祝贺叶玲玲董俊吕建强王金萍陈朝银花群义杨仕标尹尚莲徐维佳艾军
- 关键词：小反刍兽疫单克隆抗体
- 非洲猪瘟病毒VP73基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达被引量：5
- 2006年
- 参照Genebank中非洲猪瘟VP73基因序列,人工合成的VP73全基因克隆至pMD18-T克隆载体质粒中,采用PCR扩增得到1188bp的VP73基因;将VP73基因片段亚克隆插入pBAD/Thio表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP73基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了非洲猪瘟病毒VP73基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP73蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002%的L-Arabinose进行诱导,4h后表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,分子量约60kDa,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting和ELISA检测表明,表达的融合蛋白能与非洲猪瘟阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物为非洲猪瘟病毒VP73融合蛋白,且具有良好的反应原性,这为应用该表达蛋白抗原制备ASFV免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础。
- 常华花群义段纲杨云庆周晓黎董俊尹尚莲项勋曾昭文
- 关键词：非洲猪瘟病毒克隆
