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尤颖健: 作品数：15 被引量：22H指数：3; 供职机构：同济医科大学更多>>; 发文基金：湖北省卫生厅科研基金卫生部科技专项基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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人胎盘酸性a-1,4葡萄糖苷酶的纯化研究: 1994年; 本文对GAA的纯化进行了改良，通过CM-SephadexC-50离子交换、酸化沉淀、（NH_4)_2SO_4分段盐析和SephadexG-100亲和层析等步骤，从人胎盘中提纯了GAA，其比活性为698，729nmol（mgPto．h）^（-1），纯化倍数达3319.4倍，获得率为10．58％。IEF证明已达电泳单点纯，PI=4.7。PAGE上呈现两条蛋白带，与酶染位点一致，分子量分别为110kD和76kD。; 唐玉珠尤颖健何善述; 关键词：胎盘

小鼠B7-1cDNA克隆、测序、表达及其抗瘤效应的初步探讨被引量：4: 1999年; 用反转录ＰＣＲ的方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ后，插入ｐｃＤＮＡ３质粒中构建成小鼠Ｂ７－１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤ－ｍＢ７．１，经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的Ｂ７－１ｃＤＮＡ的序列与文献报道一致．通过脂质体介导将ｐＣＤ－ｍＢ７．１导入Ｂ７－１的小鼠黑色素瘤细胞系Ｂ１６（Ｆ０）中，经ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＮＡ斑点杂交初步证实Ｂ７－１在肿瘤细胞中获得了稳定有效的表达．同源小鼠脾淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养后采用ＬＤＨ释放改良法测定淋巴细胞特异杀伤活性，结果显示，与野生型和模拟转染的Ｂ１６细胞相比，Ｂ７－１基因转染的Ｂ１６细胞能较有效诱导淋巴细胞产生针对野生型Ｂ１６细胞的特异杀伤活性（ｐ＜０．０２）．这说明，将Ｂ７－１基因导入肿瘤细胞表达能提高其免疫原性。; 刘然义屈伸尤颖健邓耀祖; 关键词：B7-1 基因治疗 T细胞抗癌效应

利用复感儿T淋巴细胞作为外源性ADA基因表达效应细胞的实验探讨: 1997年; 对４１例健康儿童和１７例反复呼吸道感染患儿（复咸儿）的外周血淋巴细胞ＡＤＡ活性进行了检测．两例ＡＤＡ活性明显低下的复感儿的外周血Ｔ淋巴细胞被选作实验样品，经体外培养后，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的的方法导入外源性ＡＤＡ基因．结果表明：体外培养的两例复感儿淋巴细胞中ＡＤＡ活性较基因转移前升高；; 尤颖健屈伸何善述王晓琳沈关心; 关键词：反复呼吸道感染腺苷脱氨酶基因表达

转染人CD80基因的黑色素瘤细胞生长特性及免疫原性探讨被引量：3: 1999年; 目的：初步探讨弱免疫原性肿瘤细胞导入ＣＤ８０基因后免疫源性是否增强，以及肿瘤免疫原性与细胞表面分子的关系。方法：通过脂质体介导将ＣＤ８０基因导入小鼠黑色素瘤Ｂ１６细胞后，利用ＳＡＢＣ法检测ＣＤ８０的表达；ＭＴＴ法测定肿瘤细胞体外增殖能力；将肿瘤细胞接种至同源小鼠皮下后观察成瘤期、荷瘤小鼠存活期及肿瘤结节生长速度；在同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养（ＭＬＴＣｓ）后，通过测定淋巴细胞增殖指数（ＭＴＴ法）和ＣＴＬ杀伤活性（ＬＤＨ释放改良法）检测肿瘤细胞的免疫原性。结果：ＣＤ８０基因转染的Ｂ１６细胞中存在ＣＤ８０的稳定表达；与野生型Ｂ１６细胞和模拟转染的Ｂ１６细胞比较，ＣＤ８０转染的Ｂ１６细胞体外生长速度无明显变化（Ｐ＞０－０５），体内生长速度明显减慢（Ｐ＜０－０５），体外刺激淋巴细胞增殖和诱导ＣＴＬｓ的能力明显增强（Ｐ＜０－０５）。结论：弱免疫原性肿瘤细胞导入ＣＤ８０基因可增强免疫原性，其作用强弱与肿瘤细胞表达ＭＨＣ及ＩＣＡＭ１等分子的状况有关。; 刘然义熊宇芳屈伸尤颖健邓耀祖; 关键词：黑色素瘤免疫原性 B7-1分子

ADA-LacZ融合基因直接注射导入小鼠皮肤组织后的表达: 1998年; 将ADA－LacZ融合基因经直接注射导入小鼠皮肤组织，用注射点处的皮肤组织制作冰冻切片，经组织化学方法显示：此融合基因可在皮肤成纤维细胞中表达一种具有腺苷脱氨酶（ADA）和β-半乳糖昔酶（β-gal）双重酶活性的融合蛋白，这种直接将融合基因导入体内进行表达的方式．为在基因治疗和基因疫苗研究中探索一条新的简便可行的外源基因在体内表达的途径，提供了有益的实验依据。; 屈伸尤颖健杨仕林刘绍春邓耀祖何善述; 关键词：直接注射融合基因基因表达成纤维细胞

氯化锂离心纯化质粒DNA方法的建立及其效果评价被引量：3: 1996年; 本文建立了一种采用氯化锂离心纯化质粒ＤＮＡ的方法。该法不需要特殊的仪器设备和昂贵的试剂材料，操作简便易行。用此法对ｐＵＣ和ｐＧＥＭ等多种系统的质粒进行了提取纯化。结果表明：纯化的质粒ＤＮＡ无ＲＮＡ、蛋白质和染色质ＤＮＡ污染，其得率与氯化铯超离心法相近；酶切效果良好；可直接用于哺乳动物细胞的基因转移并获得有效表达。; 王淳本尤颖健陶莎屈伸; 关键词：DNA 提纯氯化锂质粒

腺苷脱氨酶同工酶的醋纤膜电泳及其应用: 1995年; 采用醋酸纤维薄膜电泳分辨人、鼠淋巴细胞与红细胞中的腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）同工酶。对已进行人ＡＤＡ基因转移并筛选后的鼠Ｔ淋巴细胞株Ｙａｃ－Ｉ进行分析检测，发现该细胞株出现一条泳动速率与人ＡＤＡ同工酶相同的电泳带，证实外源性人ＡＤＡ基因可导入体外培养的鼠Ｔ淋巴细胞株Ｙａｃ－Ｉ并表达人的ＡＤＡ。; 余涓黄亮尤颖健屈伸; 关键词：腺苷脱氨酶电泳基因表达免疫缺损综合征

ADA-LacZ融合基因直接注射导入大鼠骨骼肌后的表达: 1998年; ＡＤＡ－ＬａｃＺ融合基因经直接注射导入大鼠骨骼肌内，用Ｘ－ｇａｌ和ＡＤＡ组化染色方法检测的结果表明：在大鼠骨骼肌细胞中，可检测到由ｐＦＰ表达的ＡＤＡ和β－ｇａｌ活性。这提示有望探索出一条对某些遗传性疾病、肿瘤及其它多种疾病导入外源基因实施基因治疗的便捷。; 杨仕林尤颖健屈伸张春明邓耀祖何善述肖同浩; 关键词：直接注射融合基因骨骼肌基因治疗

ADA活性紫外吸收测定法的改良及复感儿淋巴细胞该酶活性的检测被引量：3: 1997年; 检测了42例健康儿童和17例反复上呼吸道感染患儿（复感儿）的血淋巴细胞腺苷脱氨酶（ADA）活性，结果表明：复感儿的血淋巴细胞中ADA活性较健康儿童低下，且大多同样伴有不同程度的免疫功能低下；从复感儿组中筛选了两侧ADA活性和免疫功能明显低下的患儿，拟采用这两例患儿的血淋巴细胞进行ADA－SCID基因治疗的实验研究。; 尤颖健王淳本陶莎屈伸何善述; 关键词：腺苷脱氨酶反复呼吸道感染淋巴细胞

Lipofectin介导转移的外源性ADA基因在反复上感儿T淋巴细胞的表达: 1996年; 本文对４１例健康儿童和１７例反复上呼吸道感染患儿外周血淋巴细胞腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）活性进行了检测。在此基础上筛选出２例反复上感伴ＡＤＡ活性低下患儿。在体外对这２例患儿的外周血Ｔ淋巴细胞进行培养后，以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（脂质体）介导的方法对其进行了外源性ＡＤＡ基因的基因转移。结果显示：２例患儿体外培养淋巴细胞ＡＤＡ活性较转基因前升高。同步进行的标志基因ｐＢＬａｃＺ的基因转移的检测结果也直观地证实了Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的基因转移是成功的。该研究为ＡＤＡ－ＳＣＩＤ淋巴细胞基因治疗的研究提供了初步的体外实验资料。; 尤颖健屈伸陈明何善述; 关键词：呼吸道感染腺苷脱氨酶

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