孟雯
- 作品数：4 被引量：13H指数：1
- 供职机构：上海师范大学生命与环境科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金上海市教育委员会创新基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 大鼠中性氨基酸转运蛋白SNAT1-HA融合蛋白的构建和表达(英文)
- 2011年
- Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1是一种膜蛋白,属于转运蛋白第38家族(SLC38),在中枢神经系统(CNS)中起到重要的生理学作用.为了更容易地检测SNAT1在细胞膜上的表达,以pBK-CMVΔ-SNAT1为模板,用PCR,双酶切和T4连接酶连接的方法在SNAT1的C端加上了一个HA标签蛋白,构建了一个新质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA.用该质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T),转染36 h以后,融合蛋白SNAT1-HA可以用HA抗体检测.Western blot结果显示在约54 kDa处有一条特异性条带,与预期分子量大小一致.利用重组质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA可以更方便地检测到SNAT1在细胞膜上的表达与定位,为进一步研究SNAT1结构与功能奠定了基础.
- 王函孟雯董晓云李洋张舟
- 关键词：融合蛋白
- 大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT2-EGFP融合蛋白的表达与鉴定被引量：1
- 2011年
- 谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白,对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2(SNAT2)在细胞膜上的表达与定位,利用亚克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)构建于SNAT2的C端,通过菌液PCR、酶切和DNA测序鉴定重组真核表达质粒;将测序正确的重组质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T cells),用Western blot和激光共聚焦电子显微镜荧光检测技术鉴定SNAT2-EGFP的表达与亚细胞定位。结果表明,SNAT2-EGFP融合蛋白重组质粒在细胞中表达并正确定位于细胞膜上。SNAT2-EGFP融合蛋白重组质粒的成功构建为今后深入研究SNAT2的结构和功能提供了一个有效的工具。
- 孟雯王函董晓云李洋张舟
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白融合蛋白
- 1-取代哌啶-4-酮芳甲酰腙的合成及其抗白血病活性被引量：12
- 2011年
- 以取代苄胺或伯胺为原料,依次经过Michael加成、Dieckmann缩合、水解脱羧、酰腙化反应合成了10个未见文献报道的1-取代哌啶-4-酮芳甲酰腙9a～9j,化合物结构经1H NMR,IR,MS和元素分析确证.初步的生物活性测试表明,部分化合物能有效抑制白血病K562细胞的增殖,具有潜在的抗白血病活性.
- 倪振杰薛思佳王静孟雯
- 关键词：K562MTT
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Western blot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位.pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法.
- 董晓云王函孟雯李洋张舟
- 关键词：融合蛋白
