孙付保
- 作品数：58 被引量：233H指数：10
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程农业科学生物学更多>>
- 啤酒酵母生理代谢过程中钠、钾、镁、钙离子含量变化的跟踪检测被引量：11
- 2004年
- 采用空气 -乙炔火焰原子吸收光谱法分别测定了啤酒酵母发酵液中的Na+、K+、Mg2 +、Ca2 +离子动态变化中的含量 ,用La3 +盐消除P对Ca2 +的干扰 ,以Sr2 +盐作为Na +、K +的消电离剂。本实验室采用配制培养基 ,通过对不同种类及不同发酵阶段培养的发酵液样品进行测定 ,以研究在啤酒酵母生长代谢过程中Na +、K +、Mg2 +、Ca2 +离子代谢动态变化。方法的Na +、K +、Mg2 +、Ca2 +相对标准偏差 (RSD)分别为0.31 % ,0.73 % ,1.78 % ,0.28 % ;样品加标回收率为98 %～107 % ;检出限 :Na +为0.159mg/L ,K +为0.789mg/L ,Mg2 +为0.039mg/L ,Ca2 +为0.029mg/L。该方法简便快速 ,具有很好的精密度。
- 赵长新孙付保窦少华任洪艳徐龙权
- 关键词：啤酒酵母NA^+K^+MG^2+CA^2+
- 产3-羟脯氨酸重组菌的构建及发酵优化
- 2017年
- 顺式-3-羟基-L-脯氨酸(顺式-3-羟脯氨酸)可用于合成多种抗癌药物,具有重要的商业价值,目前大多通过添加IPTG来诱导表达脯氨酸-3-羟化酶,采用两步法生物合成顺式-3-羟脯氨酸。作者通过目的基因优化设计,引入强启动子色氨酸串联启动子(Ptrp2)来避免异源表达时的诱导剂使用,构建重组质粒p ES-Ptrp2-P3H,成功构建了重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET21a-Ptrp2-P3H,优化后的脯氨酸-3-羟化酶基因(P3H)改变了168个碱基,GC含量由原来的64.83%降低到49.31%。该菌在初步优化培养基(葡萄糖1 g/d L,甘油0.125 g/d L,胰蛋白胨1.6 g/d L,(NH_4)_2SO_40.5 g/d L,K_2HPO_40.1 g/d L,NaCl 0.2 g/d L,FeSO_41 mmol/L,MgSO_40.5 g/d L,CaCl_20.015 g/d L,脯氨酸10 g/L,pH 7.5)上能一步法原位合成顺式-3-羟脯氨酸,摇瓶发酵24 h,产量0.8 g/L,比优化前提高一倍以上,为进一步开展顺-3-羟脯氨酸产业化提供了依据。
- 姚雪娜张震宇孙付保陈昶黄建华沈松
- 关键词：密码子优化发酵优化
- 产丙谷二肽重组大肠杆菌的构建及发酵优化被引量：2
- 2017年
- SAET基因编码的α-氨基酸酯酰基转移酶能够以丙氨酸甲酯盐酸盐和谷氨酰胺为底物缩合生成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺.为了使α-氨基酸酯酰基转移酶能够在大肠杆菌中过量表达,在保证氨基酸序列不变的前提下,优化密码子和m RNA二级结构,共改变了396个碱基,GC含量由原来的42.15%升高到48.22%;将优化后的基因分别与phoC启动子和色氨酸串联启动子相连并插入到不同质粒中,将重组质粒转入大肠杆菌,DH5α/p ET21a-phoC-SAET产量最高。通过对重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的条件研究发现,最佳培养基是:葡萄糖15 g/L,酵母提取物10 g/L,胰蛋白胨10 g/L,NH_4AC 5 g/L,KH_2PO_46.75 g/L,K_2HPO_42.25 g/L,MgSO_4·7H_2O0.5 g/L。最适转化条件是:将发酵液加入到含Ala-OMe·HCl 100 mmol/L,Gln 50 mmol/L的pH 9的溶液中,25℃反应1.5 h。优化后产量达到383 mg/L,是优化前的3.9倍。
- 何艳春刘沛沛张震宇孙付保沈松
- 关键词：重组大肠杆菌发酵条件优化
- 大麦制麦酶系中果胶酶的性质及形成机理被引量：2
- 2004年
- 实验采用凝胶层析法从绿麦芽中分离、提纯出果胶酶 ,并对其性质、形成机理进行了研究。结果表明 :在麦汁中果胶酶最适pH值为 4 5 ,而纯果胶酶的最适 pH值为 4 0 ;低浓度的Na Cl、CaCl2 对果胶酶具有激活作用。果胶酶的形成机理与其他水解酶基本相同 ,其形成依赖于赤霉素 ,受胚所分泌的赤霉素刺激 ,同时 ,亦是多种因素 (如大麦麦芽中抑制蛋白、金属盐等 )共同作用的结果。
- 赵长新窦少华孙付保张春玲
- 关键词：大麦果胶酶啤酒
- 利用代谢工程技术强化肉桂地链霉菌莫能菌素的生物合成
- 2024年
- 【目的】莫能菌素(monensin)是由肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)产生的聚醚类抗生素。本研究以肉桂地链霉菌2110为研究材料,利用代谢工程技术开展其重要前体甲基丙二酰CoA合成途径强化的研究,以此提高莫能菌素产量。【方法】首先过表达巴豆酰CoA还原酶(crotonyl-CoA reductase,CCR)强化乙酰乙酰CoA途径,接着过表达甲基丙二酰CoA变位酶(methylmalonyl-CoA mutase,MCM)强化琥珀酰CoA途径,最后串联过表达CCR和MCM并评估工程菌株的发酵性能。【结果】过表达CCR能促进菌体生长,同时提高莫能菌素产量,摇瓶发酵10 d后过表达菌株的生物量和发酵效价分别提高10.4%和19.0%;过表达MCM未能促进菌体生长,但提高了莫能菌素产量,过表达菌株摇瓶发酵10 d时效价提升9.9%;串联过表达CCR和MCM也使菌株的生物量和发酵效价提高,工程菌株2110-CCR-MCM在摇瓶发酵10d时生物量和发酵效价分别提升9.4%和26.8%,在5L罐上发酵6 d时达到最高的生物量和发酵效价分别为54.6 g/L和11.3 kU/mL,比原始菌株分别增加12.7%和36.2%。【结论】CCR和MCM的确介导了莫能菌素生物合成的关键代谢途径,串联过表达CCR和MCM更有效地促进了莫能菌素的合成。本研究为其他聚酮类化合物高产工程菌株的构建提供技术借鉴。
- 刘旻炜张善飞黄子瑄邢浩博孙付保
- 关键词：莫能菌素
- 国产垦啤-2号大麦制麦酶系的影响因素被引量：11
- 2004年
- 以垦啤 2号大麦(适合东北气候、土质种植)为原料,将酶活分析方法与传统制麦方法相结合,按照最佳制麦工艺所得成品麦芽各项指标均介于一级品与优级品之间,其中,糖化力、糖化时间、α 氨基氮、可溶性氮均优于优级品.通过研究制麦过程中各种添加剂对绿麦芽酶活的影响表明,利用体积分数0.1%甲醛浸麦1h效果较好;同样条件下,较质量分数0.9%NaOH浸麦,制麦酶系都有所提高.
- 赵长新窦少华孙付保
- 关键词：酶活分析影响因素
- 多杀菌素生产菌的复合诱变选育及发酵优化
- 2024年
- 生物农药多杀菌素的发酵水平限制了其产业化发展。为了提高多杀菌素产量,以刺糖多孢菌T1(Saccharopolyspora spinose T1)为出发菌,通过常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变和硫酸二乙酯(diethyl sulfate,DES)诱变,并以链霉素和鼠李糖作为筛选因子结合微孔板培养进行筛选,获得高产菌株S.spinosa F5;发酵后其多杀菌素产量为572.3 mg/L,比出发菌提高35.9%;通过单因素实验和响应面实验确定柠檬酸钠、异亮氨酸的最适添加量分别为0.46、0.10 g/L,豆油的最适添加体积分数为1.77%,此时多杀菌素产量为707.2 mg/L。在5 L发酵罐中进行分批发酵,发酵240 h产量接近800 mg/L;进一步分批补料发酵264 h,多杀菌素产量达1175.5 mg/L。结果表明,ARTP和DES复合诱变育种及添加外源诱导物可以显著提高多杀菌素产量。
- 陈润杰李云飞张妍张善飞孙付保
- 关键词：多杀菌素刺糖多孢菌抗性筛选
- 酒精沼气双发酵偶联工艺中沼液有机酸对酒精发酵的影响被引量：7
- 2010年
- 木薯酒精蒸馏废液经厌氧沼气发酵后的沼液全部回用作为酒精发酵配料的工艺用水,形成酒精沼气双发酵偶联工艺。研究发现,乙酸和丙酸是抑制酒精发酵的主要的小分子有机酸。乙酸对酒精发酵产生抑制的有效质量浓度为0.4g/dL,丙酸对酒精发酵产生抑制的有效质量浓度为0.1g/dL,乳酸质量浓度达到2.5g/dL时才会对酒精发酵产生影响。
- 翟芳芳张静张建华孙付保张宏建毛忠贵
- 关键词：木薯酒精发酵沼气发酵有机酸
- 高效液相色谱法同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中5种物质及其样品处理方法对色谱峰的影响分析被引量：3
- 2016年
- 建立了同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中5种物质(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-谷氨酰胺、L-丙氨酸甲酯、L-谷氨酸、L-丙氨酰-L-丙氨酸)的高效液相色谱分析方法。考察了样品处理中存在的发酵液、磷酸、三氯乙酸对色谱峰的影响,建立了一种对色谱峰无干扰的样品处理方法。选用邻苯二甲醛(OPA)为衍生剂,以在线衍生的方式实现了标准品或样品的柱前自动衍生。选用C18色谱柱进行分离,柱温40℃,以12.5 mmol/L磷酸盐缓冲液(88%,pH 7.4)与12%乙腈为流动相进行等度洗脱,流速为1 m L/min,在λex=338 nm,λ_(em)=450 nm下进行荧光检测,外标法定量。结果显示,该色谱条件下5种物质的测定线性范围广,相关系数均大于0.999 4。低、中、高3组加标水平下的回收率为93.5%~104.9%,相对标准偏差(RSD)小于7%。1日内间隔2 h进行6次进样,5种物质保留时间的RSD均小于0.12%,峰面积RSD均小于1.2%。该方法操作简单,分离度与灵敏度高,定量精确,重复性好。
- 魏照辉张震宇孙付保
- 关键词：高效液相色谱法
- 麦草木质素在甘油蒸煮过程中结构的变化被引量：7
- 2010年
- 主要对麦草经过甘油蒸煮后分离得到的木质素进行化学结构分析,并将其和麦草中原有的木质素进行对比。可知,两种木质素均是由愈创木基、紫丁香木基和对羟苯基木基3种基本结构单元组成,其中愈创木基单元为主要单元。麦草在蒸煮过程中,连接木质素苯丙烷单体的醚键在蒸煮过程中遭到不同程度的破坏,生成新的酚羟基和醇羟基,从而造成甘油木质素的紫外吸收峰较二氧六环木质素的紫外吸收峰向长波方向移动(红移)。由两种木质素的凝胶色谱可知,二氧六环木质素和甘油木质素的数均相对分子质量分别为3172和2241,重均相对分子质量分别为6601和2361,多分散系数分别为2.08和1.05。甘油木质素较二氧六环木质素相对分子质量更小更均匀,这种较窄的分子量分布有利于其更广泛的应用。
- 陈晓旭孙付保张建华毛忠贵
- 关键词：麦草甘油木质素紫外光谱核磁共振
