呼格吉乐
- 作品数：43 被引量：78H指数：5
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- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金内蒙古自治区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 促红细胞生成素小干扰RNA真核表达载体的构建
- 2016年
- 目的探讨促红细胞生成素（EPO）新靶点的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体构建策略。方法设计合成3个EPO siRNA片段，与含有绿色荧光蛋白和卡那霉素抗性的质粒载体连接，转化到JM109大肠埃希菌感受态细胞中，采用碱基序列测序方法鉴定其构建情况。在人脑神经胶质瘤U251细胞株中，转染成功构建的3个EPOsiRNA真核表达载体，采用倒置荧光显微镜，观察U251细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果①本研究成功构建了新靶点EPOsiRNA真核表达载体，即P^EPO-1、P^EPO-2。与P^EPO-3，并且构建的3个EPO siRNA真核表达载体序列，与所设计的标准序列完全相同，未发现任何突变、缺失、插入等基因异常情况。②本研究成功将3个EPOsiRNA真核表达载体P^EPO-1、P^EPO-2与P^EPO-3。转染至人脑神经胶质瘤U251细胞内，并且所有转染P^EPO-1、P^EPO-2与P^EPO-3的U251细胞均表达绿色荧光蛋白。结论本研究成功构建新靶点EPO siRNA真核表达载体，并将其转染于人脑神经胶质瘤细胞中，为EPO在贫血等疾病中的作用机制研究奠定了实验基础。
- 呼格吉乐韩艳秋
- 关键词：RNA干扰红细胞生成素
- 新靶点CyclinE干扰RNA对人脑胶质瘤侵袭能力的影响
- <正>目的构建人CyclinE建新靶点的干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的侵袭能力的变化,为进一步研究CyclinE表达受抑制后对人脑胶质瘤细胞质和细...
- 呼格吉乐
- 文献传递
- 促红细胞生成素受体干扰RNA慢病毒表达载体的构建及干扰细胞的筛选被引量：2
- 2015年
- 目的构建人促红细胞生成素受体(EPOR)干扰RNA慢病毒(LV)表达载体,并筛选出EPOR能稳定干扰人脑胶质细胞瘤U251细胞的最佳感染复数(MOI)。方法构建人EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,即LV-EPOR,收集病毒,检测病毒滴度后感染人脑胶质细胞瘤U251细胞(LV-EPOR-U251细胞),根据MOI值的不同分为MOI_(100)、MOI_(10)、MOI_1组,选出荧光表达量最高的一组,经RT-PCR检测m RNA表达,计算干扰效率。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。经RT-PCR检测结果证实,MOI_(100)组的LV-EPOR-U251细胞荧光表达量最高,其干扰效率为72%。结论成功构建LV-EPOR,LV-EPOR-U251细胞稳定干扰的MOI值为100。
- 呼格吉乐
- 关键词：干扰RNA促红细胞生成素受体慢病毒胶质瘤
- 新靶点CyclinE干扰RNA对人脑胶质瘤增殖的影响被引量：3
- 2014年
- 目的构建人CyclinE建新靶点的干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的增殖能力的变化,为进一步研究CyclinE表达受抑制后对人脑胶质瘤细胞质和细胞核蛋白组学的影响及人脑胶质瘤发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法①构建4个新靶点Cyclin E干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否。②用Lipofectamine 2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤U251细胞株,通过RT-PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量,选出干扰效果最好的1个。③用塞唑蓝(MTT)法检测CyclinE沉默后细胞增殖能力的变化。结果①成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体,即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4。②CyclinE mRNA表达明显受到抑制,并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。③PCyclinE-1-U251组细胞与两对照组相比增殖能力减弱。结论成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,与对照组比增殖能力削弱。
- 呼格吉乐高乃康韩艳秋
- 关键词：干扰RNA细胞周期蛋白E增殖
- 新生儿缺血缺氧性脑病辅助检查和治疗手段的研究进展被引量：6
- 2018年
- 新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)是指围生期窒息引起的部分或完全缺氧、脑血流减少或暂停而导致胎儿或新生儿脑损伤。早期诊断和早期干预治疗是降低HIE死亡率和致残率的重要手段。本文就缺血缺氧性脑病的血清学NSE、S100B、MBP、TNF-α的检查、DWI(磁共振加权成像)、EPO和脑苷肌肽等治疗手段的新进展进行简要综述。
- 刘晓欢呼格吉乐高乃康兰海霞
- 关键词：新生儿缺血缺氧性脑病S100BDWI脑苷肌肽
- 外伤性脑损伤后神经细胞保护因子表达的变化被引量：1
- 2018年
- 外伤性脑损伤(traumatic brain injuries,TBI)是指外力作用于颅骨所致的头皮、颅骨、硬脑膜和脑组织与外界相通,并由此引发脑组织一系列病理生理学改变的疾病。脑组织损伤后导致神经细胞缺血缺氧,脑血管通透性增加并引发一系列炎性细胞分泌增加,在促进炎症发生的同时改变多种细胞保护因子的表达,如低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible-1,HIF-1)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)、小泛素样修饰蛋白-1(small ubiquitin-like modifier,SUMO-1)、CC趋化因子配体2(CC chemokines ligand 2,CCL2)、瞬时受体电位阳离子通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)等蛋白质的表达产生一系列应激反应来应对缺氧,进而保护神经细胞免受进一步损伤。本文将围绕脑组织损伤后的神经细胞保护因子改变进行综述。
- 范宇鸿呼格吉乐高乃康兰海霞
- 关键词：外伤性脑损伤低氧诱导因子-1葡萄糖转运蛋白-1
- 胶质瘤U251细胞外源基因瞬时转染方法的选择被引量：1
- 2017年
- 目的选择一种将外源基因瞬时转入胶质瘤细胞的高效转染方法。方法以去内毒素真核表达载体DsRed2为外源基因,分别采用脂质体Lipofectamine2000转染法、脂质体Viafect转染法以及电转染法,将不同浓度的DsRed2质粒(0.25、0.5、1.0μg)转染入胶质瘤U251细胞(以下称胶质瘤细胞,细胞数量均为1.0×105个)。荧光显微镜下采用可见光、红色荧光滤镜观察细胞形态及红色荧光蛋白表达,紫外光滤镜下观察细胞核Hocest33342染色情况,计算转染效率。结果三种方法均能将质粒转染至胶质瘤细胞中,红色荧光蛋白表达效果均良好。转染后的细胞形态基本正常,但表达红色荧光蛋白与未表达红色荧光蛋白的细胞形态差异较大。相同质粒浓度下,电转染法转染后表达红色荧光蛋白的细胞数量多于脂质体Lipofectamine2000转染法、脂质体Viafect转染法。随着质粒浓度的升高,脂质体Viafect转染法和电转染法对胶质瘤细胞的转染效率逐渐升高。相同质粒浓度下,电转染法对胶质瘤细胞的转染效率均高于脂质体Lipofectamine2000转染法和脂质体Viafect转染法(P均<0.01)。结论电转染法对外源基因瞬时转染胶质瘤细胞的转染效率较高,并呈质粒浓度依赖性。
- 呼格吉乐高乃康刘秉春袁建龙
- 关键词：胶质瘤细胞质粒转染效率
- CDK2干扰RNA对人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的影响
- 2012年
- 目的构建人CDK2的干扰RNA真核表达载体,稳定转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞,经RT-PCR检测后,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的改变,探讨CDK2在SHG44细胞中的作用,为人脑胶质瘤的发生、发展的研究及诊断与治疗提供有价值的资料。方法 (1)构建CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定。(2)G418筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染的SHG44细胞系。(3)通过RT-PCR比较转染后CDK2mRNA的表达量。(4)双向凝胶电泳-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后细胞质蛋白质组的变化。结果 (1)成功构建了CDK2干扰RNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo-CDK2-1。(2)获得稳定转染细胞系,命名为PCDK2-1-SHG44细胞。(3)通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到细胞质未见表达的蛋白质5个,包括醛缩酶A、波形蛋白等蛋白质。结论成功建立稳定转染CDK2干扰RNA的SHG44细胞系。质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、正常细胞的恶性转化及发育调控以及肿瘤的发生、发展和耐药性形成。
- 呼格吉乐张军力段美庆王俊瑞高乃康
- 关键词：神经胶质瘤蛋白质组学干扰RNACDK2
- 兔迷走神经压迫后对血浆血管紧张素Ⅱ及其1型受体mRNA表达水平的检测被引量：2
- 2013年
- 目的通过手术建立兔颈总动脉对迷走神经的持续压迫的动物模型,检测血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平及其1型受体(AT1R)mRNA在心肌中的表达水平。方法构建手术组动物模型,将25只新西兰兔的迷走神经与颈部结缔组织固定,造成颈总动脉对迷走神经的持续压迫。同时将25只未经手术处理的新西兰兔作为对照组。采用放射免疫法检测两组新西兰兔血浆AngⅡ的水平,用RT-PCR法检测两组新西兰兔心肌AT1RmRNA的表达水平。结果手术组兔血浆AngⅡ水平和心肌中AT1RmRNA的表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论兔颈总动脉对迷走神经的持续压迫会刺激左侧颈部迷走神经,导致兔血浆AngⅡ和心肌AT1RmRNA表达水平的增高。
- 呼格吉乐董莉张彩虹渠志臻高乃康
- 关键词：迷走神经
- 小鼠14-3-3ε蛋白基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2015年
- 目的构建小鼠14-3-3ε真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录-聚合酶链反应从小鼠肝组织中获得编码14-3-3ε的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-ZEO(+)中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体转染HEK293细胞,并通过蛋白免疫印迹检测细胞内14-3-3ε的表达。结果构建了真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,将其转染HEK293细胞48h后,蛋白免疫印迹检测到细胞内14-3-3ε的表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,为研究14-3-3ε在小鼠卵母细胞和小鼠-细胞受精卵G2/M转换中作用的研究奠定了基础。
- 孟峻侯艳军唐韬张永梅刘珊刘洋呼格吉乐
- 关键词：HEK293细胞真核表达载体
