周育森 作品数:275 被引量:969 H指数:15 供职机构: 首都医科大学附属北京佑安医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 交通运输工程 更多>>
一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用 本发明公开了一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用。HNF1α的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。HNF1α能够抑制肝细胞分泌表达s抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg)以及降低HBV DNA载量,HNF1α... 周育森 李军锋 代晓朋 张伟 孙世惠 寇志华 赵光宇 于虹 郭彦文献传递 重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价 被引量:9 2014年 目的检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b融合蛋白(HSA-IFNα-2b)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法构建含1.6倍HBV基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒(AdGFP-HBV),感染人肝细胞系HepG2细胞,构建HBV复制细胞模型;ELISA法检测HBV乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)表达;MTT法检测HSA-IFNα-2b对HepG2细胞的毒性作用;定量PCR法检测细胞内HBV RNA的相对表达以及细胞上清中HBV DNA绝对表达水平;双报告基因法检测HSA-IFNα-2b对HBV增强子Ⅰ活性的影响。结果 AdGFP-HBV感染HepG2细胞后可以复制表达HBV。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1加入AdGFP-HBV感染的HepG2细胞,使HBsAg表达降低51.32%(P<0.01),HBeAg降低50.26%(P<0.01),而相同浓度的HSA-IFNα-2b并不抑制细胞的增殖。随HSA-IFNα-2b浓度增加,其对HBsAg表达的抑制作用逐渐升高,HSA-IFNα-2b对HBsAg表达的抑制率(Y)与其浓度(X)的回归方程是Y=21.11 lgX+11.91(r2=0.954),IC50为63.76 kU·L-1。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使细胞中HBV RNA下降52.83%(P<0.01),培养上清中HBV DNA降低53.07%(P<0.01)。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使HBV增强子Ⅰ活性下降40.04%(P<0.01)。结论构建了可用于药物评价的HBV复制细胞模型,HSA-IFNα-2b体外具有抗HBV活性。 张伟 张伟 代晓朋 武福军 祁碧玉 刘志敏 刘志敏 李军锋关键词:乙型肝炎病毒 血清白蛋白 干扰素Α-2B 融合蛋白 LETMD1单克隆抗体的鉴定及其在肝细胞癌临床诊断研究中的初步应用 2012年 目的:对制备的LETMD1-C末端单克隆抗体进行免疫特性鉴定,并将其应用于肝细胞癌的临床诊断研究。方法:使用ELISA,细胞免疫荧光及Western blot等免疫学技术对所制备的单克隆抗体进行免疫特性鉴定;以鉴定的抗体为工具,检测肝癌组织中LETMD1编码产物表达情况。结果:免疫学鉴定结果验证了制备的单克隆抗体具有较高的使用效价和良好的特异性。检测肝组织标本中LETMD1编码产物表达情况,发现其在正常组织中不表达,在肝癌组织表达明显高于癌旁组织。结论:制备了抗-LETMD1-C末端的单克隆抗体,经鉴定具有较高的效价和良好的特异性,可以应用于LETMD1癌基因的功能研究和肝细胞癌的临床诊断研究,为深入研究LETMD1蛋白的生物学功能和建立新的肝细胞癌早期诊断方法奠定了可靠基础。 胡冬 李军锋 于虹 陈万荣 周育森关键词:单克隆抗体 肝细胞癌 庚型肝炎病毒C_(26)抗原基因的cDNA序列研究 2002年 目的 :确定我国庚型肝炎病毒 (河北株 ) C2 6 抗原基因的 c DNA序列。方法 :采用 RT- PCR方法从人血清中扩增出庚型肝炎病毒 C2 6 抗原的 c DNA产物 ,使之与 T-载体连接构建成克隆重组质粒。用 PCR和限制性内切酶切割方法鉴定出阳性重组质粒 ,然后扩增并抽提质粒进行 DNA序列测定。结果 :获得的庚型肝炎病毒 C2 6 抗原基因的 c DNA核苷酸序列与国外已报道的庚型肝炎病毒 4 4 4 0 2、庚型肝炎病毒 4 5 96 6、庚型肝炎病毒 36 380的相应区域进行比较 ,核苷酸同源性在 84 %以上 ,氨基酸同源性在 90 %以上。结论 :庚型肝炎病毒中国河北株的 C2 6 c DNA序列在遗传上是比较保守的。 赵惠柳 周育森 王海涛 张振权 黄天壬 何振芳 余家华关键词:庚型肝炎病毒 CDNA 人高致病性禽流感H5N1病毒M2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1 2009年 目的:以人高致病性禽流感H5N1病毒M2蛋白为靶抗原,制备针对H5N1病毒M2蛋白的单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。方法:用针对H5N1病毒M2蛋白胞外区设计的四分肽作为免疫原免疫BALB/c小鼠,将免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选出阳性细胞,经多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定。结果:获得10株能稳定分泌抗H5N1病毒M2蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗体效价高,抗原特异性强。结论:成功地获得了针对H5N1病毒M2蛋白的单克隆抗体,为H5N1病毒感染的诊断、治疗及病毒致病机制研究奠定了基础。 于虹 管洁 赵光宇 孙世惠 寇志华 陈万荣 周育森关键词:单克隆抗体 中东呼吸综合征冠状病毒S1蛋白在昆虫细胞中的重组表达及免疫效果评价 被引量:2 2015年 目的:利用昆虫杆状病毒表达系统重组表达中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-Co V)S1蛋白,并对其免疫效果进行评价。方法:构建含有MERS-Co V S1基因的重组杆状病毒质粒,转染Sf9细胞包装杆状病毒;重组病毒传代3次获得种子病毒,感染Sf9细胞,收获感染上清,通过镍离子亲和层析纯化获得S1重组蛋白;用纯化的S1蛋白免疫BALB/c小鼠,采用ELISA检测免疫小鼠血清抗原特异性的抗体水平;采用假病毒中和试验检测血清中抗体的中和活性。结果:获得了表达MERS-Co V S1蛋白的重组病毒株,在昆虫细胞中表达并纯化了S1重组蛋白;利用重组表达的S1蛋白免疫小鼠3次,血清S1特异性Ig G抗体滴度可达1∶102 400,免疫小鼠血清稀释至1/5120后中和百分比仍达50%以上。结论:利用昆虫细胞重组表达的MERS-Co V S1蛋白具有良好的免疫原性,并能有效诱导产生高滴度中和抗体,为发展MERS-Co V重组蛋白疫苗奠定了基础。 潘婷 郭彦 邱洪杰 于虹 太万博 孙世惠 赵光宇 周育森关键词:S1蛋白 昆虫细胞 杆状病毒表达系统 肝特异性假病毒转运系统的构建 被引量:2 2007年 目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段。方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因。同时构建辅助细胞系,为上述病毒载体(假病毒)提供包装所需要的病毒蛋白。以该假病毒载体转染辅助细胞系,以酶联免疫方法检测细胞培养上清中乙型肝炎病毒抗原,并在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用透射电镜观察培养上清中的病毒颗粒,同时用实时定量PCR的方法对分泌到细胞培养上清中的假病毒进行了定量检测。结果与结论:以假病毒载体转染辅助细胞后,电镜观察到培养上清中乙肝病毒的丹氏粒(Dane particle)。实时定量PCR分析结果显示,细胞分泌到培养上清的假病毒含量达103拷贝/μl。ELISA结果显示该上清中同时表达了HBV表面抗原和e抗原,通过荧光显微镜观察发现外源基因绿色荧光蛋白获得有效表达。 安小平 朱晓峰 张昕 陈锦辉 陈士华 周育森 童贻刚关键词:病毒载体 乙型肝炎病毒 中国人TTV部分基因的克隆及序列测定 被引量:106 1998年 目的:了解我国人群中是否存在TT病毒(TTV)感染,分析国内TT病毒株基因结构特点。方法:用PCR方法检测血清标本中TTVDNA,对TTVDNA阳性的标本进行序列测定。结果:10例临床诊断为非甲至非戊型肝炎病人血清标本中,用PCR方法检测出5例为TTVDNA阳性。将其中的一株命名为TTVCH1(TTV中国株1)并进行序列测定,该序列与日本TTV部分基因(CLON22)相对应位置的核苷酸同源性为98%。用BLAST程序检索了GenBank+EMBL+PDB序列库的332949个序列数据,没有发现与之有明显同源性的序列;与已知的肝炎病毒(A至G)也没有明显的相关性,而只同日本报道的部分基因有很高的同源性。结论:该研究建立了检测TTV的PCR方法并测定了TTV中国株的部分基因序列,首次证实在我国人群中存在TTV的感染。 周育森 何忠平 董京芳 王海涛关键词:TT病毒 聚合酶链反应 核苷酸 肝炎病毒 呼肠病毒,在SARS患者中分离与初步鉴定 被引量:14 2003年 严重急性呼吸综合征(SARS)疫情在北京造成了严重后果,冠状病毒已被广泛认定为导致SARS的病原体。但是临床和实验提示,SARS病因可能不是单一冠状病毒感染。本文报道了我们从北京市第1例SARS患者和其母亲的咽拭子中分离出呼肠病毒。在电子显微镜下,可观察到典型的呼肠病毒。血清学实验显示,38例SARS患者中24例对呼肠病毒呈阳性反应。针对呼肠病毒的基因保守序列(S2基因片段)设计引物,RT-PCR实验扩增出特异性DNA片段。进一步DNA序列分析表明是一种独特的呼肠病毒(呼肠病毒科正呼肠病毒属)。初步动物实验显示,该呼肠病毒可导致非典型样肺炎发生和小鼠死亡,尽管如此,呼肠病毒感染是否与SARS疫情有关,还有待进一步研究才能阐明。 端青 朱虹 杨怡 李卫华 周育森 何君 何昆 张浩杰 周涛 宋立华 甘永华 檀华 靳宝锋 李慧艳 左庭婷 陈德蕙 张学敏关键词:呼肠病毒 SARS 冠状病毒 严重急性呼吸综合征 Glypican-3作为检测肝细胞癌新标志物的研究进展 被引量:7 2007年 吴明健 李军锋 周育森关键词:GPC3 肿瘤标记物 肝细胞癌