吕建
- 作品数：17 被引量：96H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G_2/M周期停滞被引量：2
- 2007年
- 目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础。方法体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Westernblot检测相关蛋白及磷酸化改变。结果As2O3作用K562细胞24h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Sur-vivin、cdc2、chk1基因表达,As2O3处理后Survivin、chk1的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-p、chk1等4种蛋白的表达,作用24h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2～5μmol/L时无明显变化,在10μmol/L时受抑明显,chk1蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变。结论As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关。不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制。
- 陈智超李秋柏吕建邵菁游泳仲照东黎纬明邹萍
- 关键词：三氧化二砷K562细胞SURVIVIN
- 脂肪来源干细胞诱导分化为神经元样细胞的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的:研究脂肪来源干细胞(ASCs)的分离、纯化、扩增以及在体外定向分化为神经元样细胞的能力。方法:获取并培养正常人的ASCs,倒置显微镜下观察其形态;流式细胞仪检测其免疫表型。全反式维甲酸(ATRA)诱导ASCs在体外分化为神经元样细胞,倒置显微镜观察神经元样细胞的形态,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测巢蛋白基因的表达;免疫组织化学染色法和Western blotting法检测神经丝蛋白(NF)和神经元烯醇化酶(NSE)的表达。结果:ASCs呈纤维样贴壁生长,体外培养易扩增;ASCs表达相关抗原CD29和CD105,不表达CD31、CD34、CD45和HLA-DR;不同扩增代数的ASCs经诱导剂的作用可呈现典型的神经元样细胞形态,巢蛋白基因及NF、NSE均呈阳性表达。结论:脂肪组织中分离培养的ASCs具有体外大量扩增并保持低分化状态的特性,以及定向分化为神经元样细胞的能力,是一种可用于神经系统疾病治疗的种子细胞。
- 王红祥李宾公唐晓琼赵智刚李秋柏吕建邹萍
- 关键词：干细胞神经元样细胞
- 三氧化二砷联合甲磺酸伊马替尼、咖啡因对K562白血病细胞的协同作用
- 2007年
- 目的探讨三氧化二砷(Arsenic trioxide,As_2O_3)与酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼(实验药物代号STI571)以及细胞周期调节剂咖啡因联合诱导K562细胞凋亡的作用及机制,为寻找克服K562细胞对As_2O_3抵抗的有效手段提供实验依据。方法以As_2O_3与STI571、咖啡因联合作用于K562细胞,采用MTT方法检测细胞增生活性,PI染色流式细胞仪检测细胞周期,PI和Annexin V双染色流式检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞周期相关调节蛋白的表达。结果5.0μmol/L浓度的咖啡因对K562细胞增生无抑制作用,亦不能增强As_2O_3的抑制作用,单独以STI571 1.0μmol/L处理,即可有效抑制K562细胞的生长,与As_2O_3联用能明显增加其抑制增生的效应;咖啡因与As_2O_3联合作用,不增加As_2O_3诱导的K562细胞凋亡率[(14.7±3.6)%vs(15.3±3.3)%,P>0.05];STI571具有轻度诱导K562细胞凋亡的作用[(18.3±4.5)%],与As_2O_3合用可显著增加诱导凋亡率[(14.7±3.6)%vs(42.8±4.2)%,P<0.01],并明显降低As_2O_3诱导的G_2/M期细胞比例。与单用As_2O_3比较,As_2O_3+STI571明显抑制cdc2、cdc2-p及survivin蛋白表达,而As_2O_3与咖啡因合用不能诱导survivin蛋白表达下调,对cdc2、cdc2-p蛋白的表达无明显影响。结论周期调节药物咖啡因对As_2O_3诱导K562细胞凋亡无增敏作用;酪氨酸激酶抑制剂STI571能协同As_2O_3诱导K562细胞凋亡,下调抗凋亡蛋白survivin的表达可能是其机制之一,值得深入研究其临床应用效果。
- 陈智超李秋柏吕建邵菁游泳仲照东黎纬明邹萍
- 关键词：砷剂K562细胞咖啡因
- 全文增补中
- 不同类型急性白血病患者骨髓间充质干细胞的病理学特征被引量：5
- 2006年
- 骨髓间充质干细胞（MSC）具有在体内和体外支持造血的功能，因此联合MSC的造血干细胞移植有可能增强移植效果，最近研究结果证实联合MSC的造血干细胞移植可以促进造血干细胞的植入和造血恢复。既往研究发现急性白血病患者骨髓造血微环境存在病理改变，包括细胞的组成和功能改变。但是，急性白血病患者骨髓MSC是否受到影响以及影响程度，尚不清楚。此外，MSC的来源有限，而且异基因MSC存在归巢效率低等问题。
- 赵智刚袁文素葛薇唐晓琼王红祥李秋柏吕建陈智超邹萍
- 关键词：骨髓间充质干细胞急性白血病患者病理学特征同类型骨髓造血微环境MSC
- 参芪扶正注射液对急性髓系白血病患者树突状细胞作用的体外研究被引量：8
- 2007年
- 目的研究参芪扶正注射液对完全缓解期急性髓系白血病患者树突状细胞的影响,并探讨其调节免疫功能的机制。方法分离培养20例急性髓系白血病患者的树突状细胞,与不同浓度参芪扶正注射液共同培养,MTT法检测其增殖率,流式细胞术检测CD1a、CD83、CD80和CD86的表达,酶联免疫吸附法检测其分泌IL-12的水平,RT-PCR法检测吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的表达。结果参芪扶正注射液对急性白血病患者树突状细胞的增殖和凋亡无明显影响。加入参芪扶正注射液后树突状细胞表达CD80和CD86增多,分泌IL-12明显增加,而表达IDO减少,且具有剂量依赖关系。结论参芪扶正注射液对完全缓解期急性白血病患者的树突状细胞细胞具有明显的影响,提示其可能临床应用于完全缓解期急性白血病患者的免疫调节治疗。
- 陈智超王红祥游泳李秋柏吕建邵菁邹萍
- 关键词：参芪扶正注射液
- 慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞的分离及其支持造血的研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离以及体外支持造血的能力。方法采用细胞贴壁法获取16例CML患者的骨髓MSCs,在低血清培养液中培养和扩增。流式细胞仪检测免疫表型。通过油红O染色和Von Kossa染色检测MSCs向脂肪和骨的分化。逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测bcr/ahl融合基因的表达。对MSCs进行核型分析。RT PCR检测细胞因子表达情况。将CML患者的骨髓MSCs作为滋养层,应用甲基纤维素半固体培养,检测其支持造血能力。结果CML来源的MSCs在倒置显微镜下为梭形,表达CD29、CD44、CD105,而CD14,CD31、CD34、CD45、HLA-DR均为阴性。在相应的诱导条件下可以向骨和脂肪分化。CML来源的MSCs不表达bcr/abl融合基因,具有正常细胞核型。CML来源的MSCs表达造血相关因子,在体外可以维持和扩增造血干/祖细胞。结论CML患者骨髓中存在具有多向分化能力的MSCs,其具有在体外支持造血的功能。
- 赵智刚唐晓琼王红祥李秋白吕建陈智超邹萍
- 关键词：白血病髓样慢性间质干细胞造血系统
- 美洛昔康对急性单核细胞白血病细胞增殖和凋亡作用的研究被引量：4
- 2006年
- 急性单核细胞白血病（acute monocyte leukemia，M5）有其独特的核型特征和临床表现，血液病研究者一直以来都在努力寻求治疗M5的新方法。目前，环氧化酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂在消化系统肿瘤等实质肿瘤发生、发展中的作用已得到广泛研究，最近有研究表明，COX-2也参与慢性髓性细胞白血病等血液肿瘤的发生和发展，并起着重要的作用，但COX-2抑制剂在急性单核细胞白血病中的作用尚未见报道。
- 李秋柏游泳陈智超吕建邵菁王红祥邹萍
- 关键词：急性单核细胞白血病细胞增殖凋亡作用美洛昔康COX-2抑制剂环氧化酶
- 急性髓细胞白血病细胞的吲哚胺2,3-双加氧酶介导免疫逃逸的实验研究被引量：9
- 2006年
- 为了探讨急性髓细胞白血病细胞的吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)参与肿瘤免疫逃逸的机制,从23例急性髓性白血病患者获取骨髓细胞,采用免疫组织化学染色法和RT-PCR法检测白血病细胞IDO的表达;在有或无1-甲基色氨酸(1-MT)存在下,以白血病细胞为刺激细胞,外周T淋巴细胞为反应细胞建立单向混合淋巴细胞反应体系(MLR),利用MTT法检测T淋巴细胞增殖率,并以反相高效液相色谱法检测相应MLR体系上清液中的IDO活性。结果显示,在23例急性髓细胞白血病患者中17例患者的骨髓白血病细胞上有IDO的表达;白血病细胞上的IDO活性抑制MLR体系中T淋巴细胞的增殖。结论:白血病细胞表达的IDO活性能阻抑外周T淋巴细胞的增殖,它可能参与了肿瘤免疫逃逸。
- 唐晓琼赵智刚王红祥李秋柏吕建邹萍华
- 关键词：急性髓细胞性白血病吲哚胺2,3-双加氧酶1-甲基色氨酸免疫逃逸
- 三氧化二砷对5种人类白血病细胞体外效应的比较研究
- 2007年
- 目的:了解三氧化二砷(AS2O3)在体外对K562、BV173、HL60、U937等白血病细胞生长增殖、凋亡、细胞周期的影响,并与NB4细胞进行比较。方法:体外培养上述细胞株,在不同浓度AS2O3作用不同时间后以锥虫蓝拒染计数法计数细胞,绘制生长曲线;通过PI和AnnexinV双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI染色、流式细胞仪检测药物作用前后白血病细胞的周期分布改变。结果:AS2O3明显抑制实验所用NB4、K562、BV173、U937、HL60等5种白血病细胞的生长增殖,且其效应在2～10μmol/L的浓度范围内均呈剂量依赖性和时间依赖性;5μmol/L浓度AS2O3处理48h后细胞凋亡率分别为K562(14.6±2.5)%、BV173(19.4±3.1)%、U937(13.8±3.6)%、HL60(18.2±4.0)%,与NB4细胞(41.8±2.6)%比较,差异有统计学意义(均P<0.01)。以5μmol/L浓度的AS2O3经24h处理,NB4细胞的周期改变以亚G1峰增加为主(5.2%∶36.2%);BV173细胞以G0/G1期细胞比例的增加为主(55.2%∶71.7%),K562细胞及U937细胞以G2/M期细胞比率增加最为明显(分别为22.6%∶45.8%,15.7%∶48.6%)。结论:在本实验浓度范围内AS2O3对5种白血病细胞株均具有明显生长抑制作用,对不同白血病细胞抑制生长的机制不同,NB4细胞以诱导凋亡为主,K562、BV173、U937白血病细胞以诱导周期停滞为主。提示周期停滞而凋亡不足是AS2O3对NB4以外白血病细胞体外效应的普遍特点;探讨周期停滞及凋亡耐受的机制对提高这些白血病细胞的AS2O3敏感性具有重要意义。
- 陈智超李秋柏吕建邵菁游泳仲照东黎纬明邹萍
- 关键词：白血病三氧化二砷凋亡
- Livin与肿瘤研究新进展被引量：16
- 2006年
- Livin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,具有凋亡抑制蛋白家族的特征性结构——BIR结构域。这一结构域介导了Livin与Caspase-3、7、9的直接结合,从而阻断caspase凋亡作用的发挥,达到抑制细胞凋亡的作用。Livin基因定位于染色体20q13,编码Livinα和β两种蛋白。亚细胞定位显示,在细胞质和细胞核均有表达,羧基末端的RING结构域介导了Livin的亚细胞定位。目前的研究表明,Livin可表达于消化系统的胃癌、泌尿系统的膀胱癌、呼吸系统肺癌和血液系统的淋巴细胞性白血病等多个系统的肿瘤中,也存在于乳腺癌及黑色素瘤中,在肿瘤的细胞系中也有较广泛的表达,但在各系统的正常组织中却很少表达。研究还表明,在药物诱导凋亡时,Livin的表达有明显升高。用RNA干扰技术对Livin基因的表达进行干预后,细胞对诱导凋亡药物和放射线的敏感性增加。根据Livin设计的抗原肽可以特异性诱导肺癌患者杀伤性T细胞的活化。目前的研究已表明,Livin在肿瘤的发展和耐药中都有重要作用。Livin特异表达于肿瘤组织的特性有可能为肿瘤的早期诊断、基因治疗和细胞治疗提供新靶点。
- 吕建陈智超
- 关键词：肿瘤衔接蛋白质类膜泡运输细胞凋亡肿瘤蛋白质类
