卢向锋
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：浙江大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 芽胞杆菌BSD-8肌氨酸氧化酶的纯化与性质被引量：4
- 2010年
- 对一株从土壤中分离到的芽胞杆菌Bacillus sp.BSD-8菌株所产生的热稳定性较高的肌氨酸氧化酶进行纯化,并对该酶的特性进行了研究。通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换柱、Toyopearl疏水层析柱和Sephadex G-75分子筛层析,使酶提纯25倍,比活力达到5.3U/mg。研究了纯化后的酶的生化特性,确定了该酶的主要特性：该酶为黄素蛋白,与黄素以非共价键的方式结合,由单一亚基组成,其亚基分子量为51kDa。酶的最适反应温度及pH分别为60℃与8.5。该酶在60℃及pH8.0～10.0条件下稳定。以Lineveaver-Burk作图法求得该酶米氏常数Km值为3.1mmol/L。Ag^＋、Hg^2＋、SDS及Tween80对该酶有强抑制作用,而Tween20和Triton X-100对酶活性无影响。该肌氨酸氧化酶在耐热性质上比以前所报道的肌氨酸氧化酶有很大的提高,在酶法肌酐测定应用中有明显的优势。
- 刘辉孙桂琴马晓航孙玲艳卢向锋张鹏程
- 关键词：肌酸热稳定性
- Microbacterium属细菌耐热尿酸氧化酶基因及其用途
- 本发明公开了一种Microbacterium属细菌耐热尿酸氧化酶基因，其具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。本发明还同时公开了该基因编码的蛋白质，其具有SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。本发明还同时公开了上述Mic...
- 马晓航张鹏程周学来卢向锋李倩延孙玲艳
- 文献传递
- 假单胞菌L-1菌株（Pseudomonas sp.L-1 strain）L-肉碱代谢酶系及转化研究
- L-肉碱/(L-/(-/)-Carnitine/),又称维生素BT,化学名为L-p-羟基-γ-三甲铵丁酸。在自然界中广泛存在,是一种基本的细胞成分。主要功能是在脂肪代谢过程中作为载体,将长链脂肪酸以脂酰肉碱的形式从胞质转...
- 卢向锋
- 关键词：L-肉碱假单胞菌基因敲除
- 文献传递
- 氧化葡萄糖酸杆菌DHA3-9的葡萄糖代谢酶系
- 2014年
- 研究氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)对细胞内葡萄糖代谢除直接氧化途径外可能存在的其他途径.以G.oxydans DHA3-9菌株为研究对象,利用同源重组构建G.oxydans DHA3-9膜结合的葡萄糖脱氢酶(membrane-bound glucose dehydrogenase,mGDH)基因敲除的突变株,以阻断该菌的葡萄糖直接氧化途径,研究其在葡萄糖培养基中的生长速率、葡萄糖降解与葡萄糖酸转化、代谢产物成分等主要生理生化特性的变化.结果表明:实验成功地筛选到1株G.oxydans mgdh突变菌,该菌丧失了90%以上利用葡萄糖转化为葡萄糖酸的能力,其二羟基丙酮(dihydroxyacetone,DHA)转化量4倍于野生菌;同时,在该突变菌代谢产物中检测出丙酮酸和乙酸,且乙酸对野生菌和突变菌的生长抑制差异极显著.表明葡萄糖在G.oxydans DHA3-9△mgdh菌株细胞内依赖的代谢途径为糖酵解途径,而非2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸裂解途径或磷酸戊糖途径.其中,丙酮酸作为糖酵解途径产物通过丙酮酸脱羧酶和乙醛脱氢酶转化为乙酸,而乙酸积累过多将对菌株生长产生抑制.
- 李倩延卢向锋张鹏程孙玲艳刘于马晓航
- 关键词：氧化葡萄糖酸杆菌基因敲除葡萄糖代谢
- 微杆菌属ZZJ4-1菌株的耐热尿酸氧化酶基因的克隆及重组酶性质被引量：6
- 2012年
- 为了研究微杆菌Microbacterium sp.ZZJ4-1菌株的耐热尿酸氧化酶(Uox)的性质,克隆其基因(uox),得到1个894 bp的开放阅读框。该基因与多数已报道的uox无明显同源性,仅与球形节杆菌Arthrobacterglobiformis的uox有72%的同源性。将基因插入质粒pET-15b构成pET-15b-uox表达载体,转化至Escherichiacoli BL21(DE3)中诱导表达。对重组Uox的主要理化性质研究表明:该酶由大小约为35 kDa的亚基组成;其最佳反应温度和pH分别为30℃和7.5;在65℃以下和pH 8.5～11.0范围内稳定;以尿酸为底物的Km值为0.22 mmol/L;Ag+、Zn2+、Cu2+和SDS均能完全抑制酶活,Tween 20、Tween 80和Triton X-100对酶活有一定的促进作用。该重组酶的耐热性是目前报道的重组Uox中最好的,这一特性有利于其在诊断治疗中的开发应用。
- 张鹏程卢向锋李倩延林小清刘辉马晓航
- 关键词：克隆热稳定性
- 一株假单胞菌(Pseudomonas sp.)L-1菌株γ-丁基甜菜碱羟化酶基因bbh的克隆、表达及酶学性质被引量：2
- 2012年
- 【目的】γ-丁基甜菜碱羟化酶是生物体内合成L-肉碱的关键酶。从假单胞菌(Pseudomonas sp.)L-1中克隆γ-丁基甜菜碱羟化酶基因,实现其在大肠杆菌(Escherichia coli)中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为生物转化生产L-肉碱奠定基础。【方法】通过PCR克隆γ-丁基甜菜碱羟化酶基因,并将其开放阅读框(ORF)克隆至融合表达载体pET-15b;表达产物经His.Bind Resin纯化后对BBH进行酶学性质及三维空间结构分析;并以静止细胞进行L-肉碱的转化。【结果】成功地克隆了一个γ-丁基甜菜碱羟化酶基因bbh(GenBank:JQ250036),并实现了其在E.coli中的高效表达。融合蛋白以同源二聚体的形式存在,单个亚基的分子量约46.5 kDa,最适反应温度为30℃,最适反应pH为7.5。该酶在45℃以下稳定。在pH6.0时该酶有最高的pH稳定性。以表达bbh基因的重组大肠杆菌静止细胞转化L-肉碱,L-肉碱产量可达12.7mmol/L。【结论】Pseudomonas sp.L-1γ-丁基甜菜碱羟化酶与现有报道的bbh基因有较大的差异。由该基因表达的γ-丁基甜菜碱羟化酶能有效地转化γ-丁基甜菜碱生成L-肉碱。本研究不仅丰富了γ-丁基甜菜碱羟化酶基因资源,而且为L-肉碱的生物转化提供了一种新的转化方案。
- 卢向锋张鹏程李倩延刘辉林小清马晓航
- 关键词：假单胞菌BBH克隆
- Microbacterium属细菌耐热尿酸氧化酶基因及其用途
- 本发明公开了一种Microbacterium属细菌耐热尿酸氧化酶基因，其具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。本发明还同时公开了该基因编码的蛋白质，其具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明还同时公开了上...
- 马晓航张鹏程周学来卢向锋李倩延孙玲艳
- 响应面法优化氧化葡萄糖杆菌生产高浓度二羟基丙酮工艺被引量：1
- 2012年
- 采用响应面法优化氧化葡萄糖杆菌甘油脱氢酶的反应及稳定性条件,以提高二羟基丙酮的发酵浓度.结果表明甘油脱氢酶在pH 4.61,温度33.3℃,甘油质量浓度80.0g·L-1时有最高的酶活性;但该酶仅在pH 4.0～5.0很窄范围内及温度低于25℃以下时稳定;100g·L-1甘油或者50g·L-1二羟基丙酮对该酶的稳定有利.由于氧化葡萄糖杆菌的生长条件和甘油脱氢酶催化条件差异较大,为提高二羟基丙酮的转化效率,研究了一种新的二羟基丙酮的转化方法.该方法将二羟基丙酮的发酵过程分成菌体培养期和甘油转化期2个阶段,分别控制其最优条件.实验中利用一个5-L的发酵罐的进行转化,结果显示在136h的转化过程中甘油脱氢酶的稳定性保持良好,最终发酵液中的二羟基丙酮质量浓度达到286.2g·L-1.
- 孙玲艳卢向锋张鹏程李倩延马晓航
- 关键词：甘油脱氢酶
