刘成宏
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金教育部科学技术研究重点项目长春市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 禽流感新型预防疫苗及诊断试剂盒的研发
- 钱爱东金宁一张文慧鲁会军唐艳林单晓枫宋桂才田明尧王春芳张辉郭海勇陈义峰马丽华刘成宏王好李影高云航王伟利赵云娇谭守国胡桂学刘笑扬
- 1.任务来源：该项目“禽流感新型预防疫苗及诊断试剂盒的研发”(合同编号20065020)为吉林省科技发展计划项目-重大农业科技专项项目。2.应用领域和技术原理：(1)应用领域：畜禽养殖和动物疫病防控。(2)技术原理：该项...
- 关键词：
- 关键词：禽流感预防疫苗诊断试剂盒基因工程
- 新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联基因的构建及其原核表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建鸡新城疫(ND)强毒株多裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法奠定基础。方法人工合成一段包含4种不同NDV强毒株裂解位点的基因Fe(F prote in multitude epi-position),其中各裂解位点之间用Linker(GGGGS)使其串联,然后进行2倍和4倍拷贝,并定向克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28a(+)/4Fe,进行表达和Western blot鉴定。结果构建的原核表达重组质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28 a(+)/4Fe测序正确。Western blot检测结果表明,2Fe、4Fe蛋白均与新城疫强毒株F48E9阳性血清呈阳性反应,而与新城疫弱毒株V4阳性血清呈阴性反应。结论已成功构建NDV强毒株F蛋白裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法提供理论依据。
- 刘成宏金扩世金宁一鲁会军贾雷立陈义锋金明兰姜鲲
- 关键词：新城疫强毒株裂解位点串联基因
- 枯草芽孢杆菌启动子基因的克隆及分子进化分析
- 本文根据GenBank中枯草芽孢杆菌的P43启动子基因序列,设计合成了一对引物,用PCR方法钓取枯草芽孢杆菌AS.1700菌株的启动子基因,PCR产物经凝胶回收纯化后连接到pMD18T-simple载体上,进行序列测定....
- 陈晓月金宁一马海利贾雷立刘成宏陈义锋
- 关键词：枯草芽孢杆菌克隆分子进化
- 文献传递
- 新城疫强毒株F蛋白裂解位点基因串联的构建及其真核表达
- 由于 NDV 强弱毒株的快速鉴定在疫苗株的筛选、进出口检疫等方面有重要的意义。常规的 NDV 毒力鉴定方法,如鸡胚平均致死试验、一日龄鸡脑内致病指数试验、六周龄鸡静脉致病指数试验和空斑形成法等,在应用时费力、费时,并且
- 刘成宏金扩世金宁一鲁会军陈义锋
- 文献传递
- H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒构建被引量：9
- 2007年
- 目的构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株。方法筛选流感病毒主要抗原(HANANPM)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7HA融合表达基因为骨架,将多表位基因插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至鸡痘病毒表达载体pUTA-2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA。应用脂质体介导的转染法,将该重组鸡痘病毒中间转移载体与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压筛选挑斑纯化后传代,并对重组以鸡痘病毒进行PCR和IFA检测和Western blot分析。结果成功构建了重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA,PCR、IFA和Western blot检测阳性。结论筛选出稳定共表达H5H7HA基因和通用多表位基因的重组鸡痘病毒vUTA2-H7HA-Epi-H5HA株,该重组鸡痘病毒的构建为跨种通用型流感病毒活载体疫苗的研究奠定了物质基础。
- 陈义锋金宁一贾雷立鲁会军南文龙田明尧陈晓月马海利马鸣潇刘成宏
- 关键词：重组鸡痘病毒
- H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究被引量：8
- 2007年
- 目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架,将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至pVAX1,构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA。最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞总RNA,以RT-PCR方法检测目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)初步测其表达产物抗原性。结果RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在。结论本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-Epi- H5HA,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗。
- 陈义锋金宁一贾雷立鲁会军田明尧南文龙马鸣潇刘成宏沈国顺马海利陈晓月
- 关键词：表位流感病毒核酸疫苗
- 枯草芽孢杆菌启动子基因的克隆及分子进化分析
- 根据GenBank中枯草芽孢杆菌的P43启动子基因序列,设计合成了一对引物,用PCR方法钓取枯草芽孢杆菌AS．1700菌株的启动子基因,PCR产物经凝胶回收纯化后连接到pMDlST-simple载体上,进行序列测定。测序...
- 陈晓月金宁一马海利贾雷立刘成宏陈义锋
- 关键词：枯草芽孢杆菌克隆
- 文献传递
- 新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联基因的构建、表达及对强弱毒株鉴定的研究
- 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类一种急性高度接触性传染病。NDV毒力强弱与F蛋白裂解位点区112～117位的氨基酸序列的...
- 刘成宏
- 关键词：新城疫强毒株诊断试剂盒
- 文献传递
