任晓峰
- 作品数：86 被引量：393H指数：12
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 抗鸡传染性支气管炎病毒多克隆抗体的制备及其生物活性的鉴定被引量：3
- 2010年
- 本试验将商品化疫苗株H120鸡传染性支气管炎病毒(IBV)直接免疫大白兔进行抗IBV全病毒粒子多克隆抗体的制备,通过琼扩试验及酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,同时利用免疫组织化学、免疫荧光及Western blotting技术检测了所制备多抗血清的生物活性。试验结果表明,制备得到的多抗血清具有很高的抗体效价,同时能够与不同形式的IBV相关抗原发生特异性结合。
- 王衡刘博奇尹航唐丽任晓峰李广兴
- 关键词：传染性支气管炎病毒多克隆抗体活性检测
- 传染性支气管炎病毒S-ChIL-15融合基因真核表达质粒的构建及其体外表达被引量：2
- 2009年
- 通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体外瞬时表达情况进行检测。结果显示,成功构建了S-ChIL-15融合基因,转染24 h后能检测到IBVS-ChIL-15融合基因和该融合基因瞬时表达的产物。
- 王衡李广兴刘博奇任晓峰
- 关键词：传染性支气管炎病毒S基因融合基因
- 猪传染性胃肠炎病毒国内分离株S基因克隆及与国外分离株的同源性比较被引量：5
- 2002年
- 用猪睾丸细胞增殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)国内分离株TH 98,根据基因库中已发表的TGEVS基因cDNA序列 ,利用Oligo软件设计并合成 2对引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增出 2 .3kb和 2 .1kb2个片段 ,即Sa与Sb。将Sa与Sb先后插入到pUC18质粒载体上的EcoRⅠ和PstⅠ多克隆位点上 ,构建了重组质粒pUC S。根据TGEVS基因位点和 pUC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式PCR方法鉴定、分析 ,证明克隆的pUC S为TGEVS基因。同时对pUC S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的 5个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 。
- 任晓峰李一经贾永清王君伟刘宝全
- 关键词：分离株传染性胃肠炎病毒S基因同源性
- M13噬菌体肽库扩增及兔抗血清制备被引量：1
- 2013年
- 为制备M13噬菌体多克隆抗体,将噬菌体十二肽原始文库进行大量扩增,作为免疫原制备兔抗M13的多克隆抗体血清并进行间接ELISA鉴定。结果表明,该多抗效价达1 1 048 576,说明此多抗可与扩增噬菌体文库发生很好的抗原抗体反应。将制备的噬菌体M13多克隆抗体与商业化M13抗体水平比较,制备多抗与商业化M13抗体效果相当。本研究成功制备兔抗M13噬菌体多克隆抗体,为深入研究噬菌体展示技术提供了材料。
- 任晓峰马晓微
- 关键词：噬菌体肽库间接ELISA
- 利用猪流行性腹泻病毒S基因真核表达质粒制备多克隆抗体被引量：1
- 2014年
- 将流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的真核表达质粒pVAX1-S作为抗原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。抗体经纯化后,利用间接ELISA、间接免疫荧光、Western Blot方法检测制备多克隆抗体的生物学活性。结果表明,用PEDV S基因真核表达质粒免疫制备的多抗血清抗体效价可达1??214,该多克隆抗体不仅可以很好地识别PEDV S蛋白,还可以特异性检测到PEDV抗原。研究为PEDV的诊断和S蛋白免疫学特性研究提供试验依据。
- 任晓峰王雪高睿泽董博李广兴
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白真核表达质粒多克隆抗体
- 噬菌体展示技术原理及其在生物学研究中的应用被引量：4
- 2009年
- 噬菌体展示技术是一种用于筛选和改造功能性多肽的技术,通过将编码多肽的基因片段与编码噬菌体表面蛋白的基因融合进而以融合蛋白形式表达于噬菌体表面。该技术被广泛用于研究蛋白质的结构与功能、蛋白质间的识别与相互作用、抗原表位筛选及疫苗的研制等,并产生了深远的影响。文章简要介绍了噬菌体展示技术原理、随机肽库生物淘洗过程及该技术在病毒学和新型疫苗研究中的应用。
- 唐丽田海波李广兴任晓峰
- 关键词：噬菌体病毒
- 稳定表达鸡氨肽酶N的MDCK细胞系构建及其对传染性支气管炎病毒感染的影响
- 2015年
- 为研究鸡氨肽酶N(Chicken aminopeptidase N,c APN)在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染细胞过程中作用,构建稳定表达c APN的MDCK细胞系。将重组质粒pc DNA3.1-c APN通过脂质体转染到MDCK细胞中并利用G418筛选,克隆纯化获得稳定表达c APN的MDCK细胞系。通过RT-PCR和间接免疫荧光检测表明c APN在MDCK细胞中持续稳定表达。IBV可以感染稳定表达c APN的MDCK细胞并连续传代,该细胞系接种IBV阳性样品24 h即可产生典型细胞融合病变,而对照MDCK细胞接种后没有细胞病变出现。结果表明c APN在介导IBV感染宿主细胞过程中发挥重要作用。
- 李广兴郭德启王雪葛旭影任玉东任晓峰黄小丹张瑞莉
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒病毒感染
- 猪流行性腹泻病毒M蛋白亲和肽的筛选及其抗病毒作用被引量：3
- 2015年
- 把成功构建的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白的阳性重组质粒pET-32a(+)-M在大肠杆菌表达系统中进行诱导表达。以表达纯化的M蛋白作为靶蛋白,利用噬菌体展示技术对随机十二肽库进行筛选,4轮淘选后,挑选出了10个与PEDV及M蛋白特异性结合力高的噬菌体单克隆,序列测定后推导的氨基酸序列分别为AGWYCTEVLCV、AYCTRHVCYLDN,多肽被命名为M2、M9。就合成多肽体外抗病毒的效果而言,间接免疫荧光试验和实时荧光定量PCR试验证明,多肽M2、M9及多肽M2与M9联合使用均能够有效抑制病毒复制,且都呈剂量依赖性。其中多肽M2抑制病毒的作用比多肽M9的高,两种多肽联合抗病毒的作用最好。上述结果为进一步研究PEDV M蛋白功能性配体和研制防治PEDV的小分子治疗制剂提供了试验依据,奠定了理论基础。
- 高玉葛旭影曹丽艳李训良任玉东任晓峰李广兴
- 关键词：噬菌体展示猪流行性腹泻病毒M蛋白多肽抗病毒作用
- 猪细小病毒VP2亲和肽及其编码核苷酸
- 本发明涉及一种猪细小病毒VP2亲和肽A和B及其编码核苷酸，猪细小病毒VP2亲和肽A，氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。猪细小病毒VP2亲和肽B，氨基酸序列如序列...
- 任晓峰朱卫娟斯琴高娃任玉东李广兴
- 文献传递
- 牛乳中致病性金黄色葡萄球菌快速检测胶体金免疫层析方法研究被引量：8
- 2013年
- 为建立快速检测牛乳中致病性金黄色葡萄球菌(S.aureus)的胶体金免疫层析方法,本研究将鼠抗S.aureus IgG进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以兔抗S.aureus nEBPS重组蛋白IgG和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线,组装制备快速检测牛乳中致病性S.aureus胶体金免疫层析试纸条。结果表明:试纸条对致病性S.aureus具有高度特异性,与沙门氏菌、大肠杆菌、布氏杆菌无交叉反应;试纸条最低检出1.0×105cfu/mL的S.aureus。试纸条批内及批间检测试验均具有良好的重复性。试纸条与S.aureus分离鉴定法符合率为90.0%、与PCR试剂盒符合率为83.3%。表明本研究建立的牛乳中致病性S.aureus免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单、快捷等特点,适合于牛乳中致病性S.aureus的现场快速检测。
- 布日额任晓峰吴金花锡林高娃王学理刘燕孙立杰刘洋
- 关键词：牛乳胶体金免疫层析试纸条
