任志强
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272的表达、纯化及生物活性分析
- 2012年
- 目的制备获得高纯度的重组SSU05_0272蛋白,并研究其对细胞因子的调控。方法以05ZYH33基因组为模版,PCR扩增SSU05_0272基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。上清表达蛋白先后经过镍亲和层析和离子交换层析方法进行纯化。实时定量PCR方法检测纯化后的SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后其细胞因子的转录水平变化。结果制备的SSU05_0272蛋白具有较高的纯度,RT-PCR结果显示,SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后能上调IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β的表达,下调IL-12P40的表达。结论 SSU05_0272蛋白能够调控促炎症细胞因子和趋化因子转录水平变化,提示其在猪链球菌致炎症反应中起重要作用。
- 陈哲郑玉玲郝淮杰律清宇任志强王涛姜永强吕淑霞
- 关键词：猪链球菌细胞因子
- 2型猪链球菌表面蛋白Hp0272的原核表达及其结合人血清IgA的活性分析被引量：1
- 2012年
- 目的：构建带GST标签的2型猪链球菌功能未知表面蛋白Hp0272的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，获得纯度较高的GST-Hp0272重组融合蛋白，鉴定其与人血清IgA（higA）的结合活性。方法：采用分子生物学方法构建pGEX-4T-1-0272重组表达载体，将其转入大肠杆菌BL21（DE3）菌株，IPTG诱导表达后，通过SDS-PAGE分析蛋白表达情况；用GSTrap柱亲和纯化目的蛋白并经Western印迹验证，采用配体印迹和ELISA方法鉴定GST-Hp0272与hlgA的结合活性。结果：构建了GST融合蛋白原核表达质粒，并获得GST-Hp0272融合蛋白，鉴定到Hp0272特异性地与hisA结合，且结合区域位于Hp0272的N端（41-318an）。结论：获得了GST-Hp0272融合蛋白，并鉴定到其能特异性结合hlgA，为进一步了解Hp0272在猪链球菌致病过程中的作用提供了基础。
- 甘淑珍任志强袁媛郑玉玲姜永强陈福生
- 关键词：猪链球菌原核表达特异结合
- 猪溶血素突变体的构建及活性评价被引量：1
- 2012年
- 目的:构建无溶血活性的猪溶血素突变体,并对制备蛋白进行功能评价。方法:根据猪溶素的晶体结构,采用定点突变分别将其353位脯氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸。重组表达的突变体蛋白采用镍柱亲和层析进行柱上复性后,评价纯化蛋白的溶血活性和免疫原性。结果:获得三种猪溶素突变体,SLY(P353A),SLY(P353L)和SLY(P353V)。溶血试证明SLY(P353V)无溶血活性,蛋白质免疫印迹和动物实验显示SLY(P353V)具有免疫原性。结论:猪溶素突变体SLY(P353V)无溶血活性,有免疫原性。
- 任志强郑玉玲甘淑珍律清宇郝淮杰姜永强宗浩
- 关键词：定点突变猪链球菌
