韩振林
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 供职机构：华南理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 高效絮凝素毕赤酵母表面展示系统的构建被引量：3
- 2010年
- 为了获得高效的脂肪酶毕赤酵母表面展示系统,利用来自酿酒酵母絮凝素蛋白Flo1的N端874个氨基酸残基(FS)和C端的1101个氨基酸残基(FL)作为锚定蛋白分别构建了2套载体系统.带有前肽的米黑根毛霉脂肪酶(ProRML)克隆到构建的2套展示载体中,使米黑根毛霉脂肪酶(RML)分别以N端锚定或C端锚定的方式实现在毕赤酵母细胞表面的展示.利用RMLC端的Flag标签,通过流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜检测2套系统中RML在酵母表面的展示情况.研究发现,N端锚定于酵母表面的展示酶FSR以pNPC为底物时,水解活力达到了105.3U/g,大约为C端锚定的展示酶FLR活力的2倍.同时FSR比FLR具有更宽的温度、pH作用范围和更好的热稳定性.与游离酶和固定化酶相比,展示酶FSR也表现出更为优良的热稳定性.结果提示,基于Flo1N端锚定的展示系统更适合展示活性中心近C端的脂肪酶,推动了展示酶的进一步研究和开发.
- 韩双艳韩振林林影郑穗平
- 关键词：酵母表面展示毕赤酵母
- 表面展示米黑根毛霉脂肪酶的毕赤酵母表达载体pKAF-RML的构建
- @@毕赤酵母(Pichia pastoris)是表达外源蛋白质，特别是真核来源的外源蛋白质的优良宿主菌。目前已有多种商业化的胞内型及胞外分泌型毕赤酵母表达系统。表面展示技术可以将要表达蛋白质分子锚定于细胞表面，是研究蛋白...
- 孙宇飞韩振林韩双艳林影
- 关键词：毕赤酵母
- 文献传递
- 南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因在毕赤酵母中的展示表达
- 通过基因组扩增得到南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因,插入到构建的重组质粒pPIC9K—Folp将得到的重组质粒pPIC9K-Folp-CALB用电转移的方法转入毕氏酵母Gs115。用含不同G418浓度的YPD平板筛选...
- 苏国栋韩振林韩双艳林影
- 一种改良的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在酵母展示中的应用
- 本发明涉及一种改良的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在酵母展示中的应用。改良的米黑根毛霉脂肪酶基因序列为SEQ.ID.No2。含有所述基因的重组载体pMD18－T－RML，RML是指脂肪酶基因；携带该质粒的菌株Escherich...
- 林影韩双艳郑穗平韩振林黄登峰王小宁
- 文献传递
- 米黑根毛霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达被引量：11
- 2008年
- 脂肪酶是主要工业用酶制剂之一,在食品、洗涤剂和制药等领域广泛应用。将编码米黑根毛霉(Rhizo-mucor miehei)脂肪酶RML的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载体pPIC9K-RML,载体经线性化后转化Pichia pastorisGS115,G418梯度筛选获得了分泌表达RML的重组毕赤酵母工程菌,SDS-PAGE分析显示表达的脂肪酶分子量大小与预期一致。初步研究表明,重组脂肪酶最适温度为40℃,最适pH值为8.0,以橄榄油为底物时,发酵上清液酶活最大可达102 U/mL,表明构建的重组毕赤酵母工程菌具有较好的工业化生产潜力。
- 徐苏炜林影韩振林梁书利韩双艳
- 关键词：脂肪酶毕赤酵母分泌表达
- 脂肪酶RML毕赤酵母表面展示酶学性质及应用
- 利用毕赤酵母絮凝素表面展示系统将米黑根毛霉脂肪酶基因进行表面展示表达。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物对全细胞酶进行性质检测,结果表明：对硝基苯酚辛酸酯(C8)为最适反应底物,在pH 8．0时,其最适反应温度为45℃,...
- 韩振林苏国栋徐苏炜韩双艳林影
- 关键词：脂肪酶毕赤酵母
- 一种改良的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在酵母展示中的应用
- 本发明涉及一种改良的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在酵母展示中的应用。改良的米黑根毛霉脂肪酶基因序列为SEQ.ID.NO2。含有所述基因的重组载体pMD18-T-RML，RML是指脂肪酶基因；携带该质粒的菌株Escherich...
- 林影韩双艳郑穗平韩振林黄登峰王小宁
- 文献传递
- 米黑根毛霉脂肪酶计算辅助设计改造及其毕赤酵母表面展示研究
- 韩振林
- 关键词：细胞表面展示二硫键
- 酵母展示脂肪酶发酵生产及应用研究
- 林影韩双艳郑穗平王小宁吴晓英韩振林苏国栋黄登峰金子
- 脂肪酶是重要的工业酶制剂之一，除了可以水解脂肪产生脂肪酸与醇外，在非水相中可催化解脂、酯交换、酯合成等反应，具有良好的化学、立体和对映体的结构选择性，因此在食品、精细化工品和医药化工品制造等领域上有着广阔的应用前景。国外...
- 关键词：
- 关键词：脂肪酶工业酶制剂发酵工艺
