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结直肠癌患者粪便细菌实时荧光定量PCR标准品制备方法的比较研究被引量：3: 2009年; 目的:比较结直肠癌患者粪便细菌实时荧光定量PCR标准品制备方法的优缺点及获得DNA的质与量。方法:以粪肠球菌作为试验菌株,分别采用标准菌株法、PCR扩增产物纯化法和PCR扩增目的片段割胶纯化法制备标准品,比较三者用于细菌实时荧光定量PCR标准曲线制作的好坏及用核酸蛋白检测仪Biophotmeter测定获得DNA的质与量。并将PCR扩增产物纯化法得到的产物进行测序。结果:PCR扩增目的片段割胶纯化法获得DNA的量及纯度均较低,为29.9±3.2和2.8±0.2,标准菌株法和PCR扩增产物纯化法的量及纯度均较高,分别为62.9±2.7及1.7±0.1,59.1±2.7及1.8±0.1;PCR扩增目的片段割胶纯化法与标准菌株法和PCR扩增产物纯化法相比,差异有统计学意义(P<0.05),标准菌株法和PC R扩增产物纯化法相比,差异无统计学意义(P>0.05),但以标准菌株法为佳。采用标准菌株法及PCR扩增产物纯化法,能获得很好的标准曲线(r=-1.00)。并且纯化产物序列与目的片段序列完全相同。结论:标准菌株法及PCR扩增产物纯化法制备标准品作荧光定量PCR检测比PCR扩增目的片段割胶纯化法更适合肠道相关分子微生态的研究。; 郭世奎包维民龚昆梅邵剑春陈弟王昆华; 关键词：结直肠肿瘤粪便细菌实时荧光定量PCR

自建实时荧光PCR方法与传统血培养方法的比较: 目的对本实验室前期研究工作中自建的多重实时荧光PCR方法用于临床血培养样本检测的临床应用价值进行初步评价。结果 1.以传统培养鉴定方法检测结果为比较标准,(1)实验室自建的5项实时荧光PCR方法联合应用,对血培养样本中病...; 赵晓丽李晓霞胡大春邵建春陈弟

熔解曲线分析检测临床常见5种革兰阴性菌的方法建立: 2011年; 目的:构建熔解曲线分析法检测5种临床常见革兰阴性病原菌。方法:选取临床最常见的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽单胞菌作为目标检测菌种。对目标菌种设计种特异性引物。构建熔解曲线法,并进行特异性验证。检测不同拷贝浓度稀释液进行敏感性分析。检测临床分离目标菌各20株,进行稳定性评价。结果:(1)经预实验后,对Tm值差异较大的铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌三对引物同时进行熔解曲线分析,对大肠埃希菌、嗜麦芽单胞菌两对引物同时进行熔解曲线分析。(2)特异性验证显示,目标菌种均有特异性的熔解曲线,各自的Tm值依次为88.37、86.32、80.86和87.56、86.32℃。(3)可检测到的拷贝浓度稀释液约为3.0×103copies/mL。(4)稳定性评价的结果显示,Tm值变化范围窄小,差异有统计学意义。结论:所构建的熔解曲线法具有较好的特异性、敏感性和稳定性。; 陈弟胡大春邵剑春刘德华周玲秦海燕; 关键词：熔解曲线分析

产ESBLs大肠埃希菌磺胺耐药基因sulⅠ的检测与分析: 目的了解昆明市第一人民医院产ESBLs大肠埃希菌中磺胺耐药基因的分布情况.方法采用聚合酶链反应(PCR)检测2007年我院临床分离的96株产ESBLs大肠埃希菌磺胺耐药基因sulI.结果 96株产ESBLs大肠埃希菌...; 赵晓丽杨辉胡大春陈弟周玲陈俊

熔解曲线分析检测大肠埃希菌、嗜麦芽单胞菌方法的构建被引量：1: 2012年; 目的构建熔解曲线分析法检测大肠埃希菌、嗜麦芽单胞菌。方法针对大肠埃希菌的16SrRNA、嗜麦芽单胞菌的促族酶B亚单位(gyrB)基因设计种特异性引物。构建熔解曲线分析法,并进行特异性验证。检测不同拷贝浓度稀释液进行敏感性分析。检测临床分离目标菌各20株,进行稳定性评价。结果特异性验证显示,目标检测菌种均有特异性的熔解曲线,融点温度(Tm)值分别为84.73、82.84℃。可检测到的拷贝浓度稀释液分别为3.56×103、1.21×104 copy/mL。稳定性评价的结果显示,Tm值(x±s)变化范围窄小,差异有统计学意义。结论所构建方法具有较好的特异性、敏感性和稳定性。并具有快速、简便、成本低廉的特点,可用于临床样本的检测。; 陈弟胡大春邵剑春刘德华周玲秦海燕; 关键词：熔解曲线分析

实时荧光定量PCR法研究结直肠癌患者肠道拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属量的变化被引量：23: 2010年; 目的通过研究结、直肠癌患者肠道拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属量的变化,揭示肠道相关菌群改变在大肠癌发病中的作用及意义。方法收集术前结、直肠癌患者粪便标本40例及正常对照标本40例,根据细菌的靶基因序列设计特异性引物。提取待测粪便标本细菌DNA,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR测定不同细菌的数量。结果正常对照组与实验组粪便中细菌数量分别为拟杆菌属(8.76±0.77;9.85±0.88)、梭杆菌属(7.94±1.25;10.0±1.65)、梭菌属(3.54±0.70;6.56±0.68),拟杆菌属中的脆弱拟杆菌为(2.12±0.48;4.07±1.77)、梭杆菌属中的坏死梭杆菌为(2.31±0.26;7.62±2.68)及梭菌属中的肉毒梭菌为(2.76±1.16;5.43±1.21),实验组数量均明显增多(P<0.05)。结论结、直肠癌患者粪便中拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属的数量较正常对照明显增多,提示结、直肠癌的发生发展与肠道菌群有明显关系。; 郭世奎包维民龚昆梅胡大春邵剑春陈弟王昆华; 关键词：结直肠癌拟杆菌属梭杆菌属梭菌属实时荧光定量PCR

多重实时荧光PCR同时检测四种常见革兰氏阳性病原菌方法的建立: 陈弟胡大春邵剑春刘德华吉永赵晓丽周玲秦海燕

PCR在临床常见病原微生物检测中的应用进展被引量：3: 2010年; 陈弟胡大春; 关键词：聚合酶链式反应病原体实时荧光PCR

分子生物学技术检测MRSA的研究进展被引量：2: 2010年; 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)是引起医院与社区获得性感染的主要致病菌之一,近年来呈不断蔓延趋势。由该菌引起的感染不仅使患者的住院时间延长,经济负担加重,而且病死率也升高。因此,快速、准确地对MRSA做出检测鉴定,能预防和控制MRSA的感染,降低患者的医疗费用,降低病死率等均具有重要的意义。近年来,利用分子生物学技术对细菌的耐药基因进行检测,不仅准确率高、且能快速得出结果。本文就分子生物学诊断技术在MRSA中的检测与临床应用评价作一综述。; 陈弟胡大春; 关键词：甲氧西林抗药性聚合酶链反应寡核苷酸序列分析

SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法分析结直肠癌患者肠道菌群变化被引量：15: 2010年; 目的应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法分析结直肠癌患者肠道菌群的变化,探讨肠道相关分子微生态在其发病中的作用及意义。方法根据细菌的16S rRNA基因序列设计双歧杆菌属、乳酸杆菌属和大肠杆菌的特异性引物,根据细菌的ddl基因序列设计粪肠球菌及屎肠球菌的特异性引物。收集结直肠癌患者术前粪便标本30份(结直肠癌组)及正常对照标本30份(正常对照组),提取细菌基因组DNA,应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应测定5种细菌的数量。结果正常对照组与结直肠癌组粪便中细菌数量分别为双歧杆菌属:9.25±0.83比4.52±0.49,乳酸杆菌属:7.45±0.37比5.46±0.12,结直肠癌组的数量明显减少(P<0.05);大肠杆菌:4.68±0.32比5.82±0.47,粪肠球菌:4.95±0.24比10.60±0.30,屎肠球菌:5.03±0.43比5.74±0.16,结直肠癌组的数量明显增多(P<0.05)。结论结直肠癌患者粪便中双歧杆菌及乳酸杆菌数量较正常对照明显减少,而大肠杆菌,粪肠球菌和屎肠球菌的数量较正常对照明显增多,提示结直肠癌的发生、发展与肠道菌群有一定关系。; 郭世奎包维民龚昆梅邵剑春陈弟王昆华; 关键词：结直肠癌肠道菌群实时荧光定量PCR SYBR

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陈弟

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