闫琨
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：兰州大学基础医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- FABP7基因真核表达载体的构建及其对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用
- 2009年
- 王毅君车团结张萍闫琨李琳王勤陈卫
- 关键词：乳腺癌细胞
- 大肠癌中TIP30基因的表达及其与VEGF,survivin,cyclinD1的相关性
- 闫琨车团结王小虎李琳王毅君陈卫
- FABP7基因真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的构建脑脂肪酸结合蛋白(BLBP/B-FABP,FABP7)基因的真核表达载体,并检测其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法采用逆转录方法从星型细胞瘤组织中扩增FABP7基因,双酶切后插入线性化的pcDNA3.1载体真核启动子下游,构建重组真核表达载体,转染人乳腺癌细胞MCF-7后,采用半定量RT-PCR检测FABP7基因mRNA的表达,MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞的周期变化情况,并对细胞进行计数。结果FABP7基因重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,转染MCF-7细胞后48、72和96h,pcDNA3.1-FABP7组的细胞数和细胞的A490值均比pcDNA3.1空质粒组明显降低,G1期细胞百分含量均明显升高。结论已成功构建了FABP7基因的真核表达载体,该载体可抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖。
- 王毅君车团结张萍闫琨李琳王勤陈卫
- 关键词：真核表达乳腺癌MCF-7细胞增殖
- 用SSH方法构建大肠癌脱落细胞
- 闫琨
- 关键词：大肠癌脱落细胞基因差异表达CDNA文库抑制性消减杂交
- YKL-40基因真核表达载体的构建及对人胃癌SGC-7901细胞增殖作用的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:构建针对人类软骨糖蛋白-39(HCGP-39,YKL-40)的真核表达载体,观察其对肿瘤细胞增殖的影响.方法:采用逆转录方法从乳腺癌组织中获得基因YKL-40,双酶切后插入线性化的pcDNA3.1载体真核启动子下游,重组体经限制性内切酶及测序鉴定,将阳性克隆的载体转染胃癌细胞株SGC-7901,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、细胞计数并观察细胞生长情况、半定量RT-PCR检测基因YKL-40 mRNA的表达、流式细胞术检测SGC-7901细胞的周期变化情况.结果:限制性内切酶及测序鉴定表明成功地构建了针对基因YKL-40的真核表达载体;将其转染胃癌细胞SGC-7901后,发现细胞增殖加快,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测基因YKL-40 mRNA的表达增加;流式细胞检测S期细胞增多.结论:成功地构建了针对基因YKL-40的真核表达载体,该载体可使胃癌细胞株SGC-7901增殖加快.
- 庞春艳车团结李宁闫琨李琳王勤陈卫
- 关键词：YKL-40胃肿瘤
- 用SSH方法构建大肠癌脱落细胞差异表达基因的cDNA消减文库
- 目的：利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建大肠癌患者与正常人脱落细胞差异表达基因的消减cDNA文库。
方法：选择确诊的大肠癌患者及正常人新鲜便样各15例，收集大肠的脱落细胞;分别提取总mRNA，用Smart技术...
- 闫琨
- 关键词：大肠癌脱落细胞差异表达基因基因芯片
- 文献传递
- 以尼龙膜为载体的基因芯片探针及样品合理浓度筛选
- 2008年
- 背景:目前多数芯片采用玻璃片基,以Cy3和Cy5标记,价格高,主要用于科研,但不能在临床上大规模推广应用。课题组采用尼龙膜为载体制作基因芯片,以期获得一种具有高灵敏度和准确性、快速简便、可同时检测多种疾病且成本低的芯片。目的:对以尼龙膜为载体基因芯片的可行性进行检测,同时对所用探针及目的基因的量进行优化。设计、时间及地点:基因工程探针设计,于2005-10/2006-09在兰大科技园百源基因公司实验室完成。材料:甘肃省肿瘤医院2005-10/2006-04切除的新鲜大肠癌标本,取距肿瘤边缘5～10cm以上的正常组织作为对照,病理证实无癌细胞浸润。尼龙膜带正电荷,购自Amersco公司。方法:从液氮中取出冻存的新鲜组织200mg,采用Trizol法提取组织总RNA,并用Oligo dT纤维素层析法纯化mRNA。使用TaKaRa的M-MLV Rtase cDNA synthesis Kit(code D6130)反转录合成cDNA的第1,2链,产物分为两部分,一部分作为模板进行地高辛标记PCR,所得产物作为目的基因,另一部分作为制备探针的模板。对获得的GAPDH,Actin,Cyclin D1三种基因片段PCR产物进行纯化。以带正电荷的尼龙膜为载体,将不同浓度的三种基因片段作为探针点于其上,所得芯片分别与不同浓度的地高辛标记目的基因进行杂交。结果:目的基因取2.5μL,1.25μL时,加入杂交液后因目的基因的浓度太小,造成各点探针密度相对较高,而无法反映出正确的显色趋势。目的基因取5μL时,探针密度为10～20μL情况下3种探针显色深度较恰当的反映了由强到弱的趋势,ACTIN>CyclinD1>GAPDH。目的基因取10μL时,探针取15μL,20μL的量能较为合理的反映由强到弱的趋势。目的基因取20μL时,此时杂交液中目的基因的浓度对于ACTIN和CyclinD1过高,不能明显反映二者着色深浅变化。结论:以尼龙膜为载体的基因芯片本底清晰,合理目的基因用量为5μL,与其相匹配的优化探针用量
- 闫琨车团结王毅君陈卫李琳王小虎
- 关键词：基因芯片
