闫歌
- 作品数：13 被引量：70H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- shRNA抑制外源绿色荧光蛋白在肝癌细胞株中的表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建绿色荧光蛋白 (GFP)的短发夹状RNA(shRNA) ,观察其在哺乳动物细胞中抑制外源GFP的表达。方法 :设计、合成含GFP编码基因片段 ,中间被 4个bp间隔的反向重复序列 ,与转录载体 pTZU6 +1连接 ,构建pshRNA—GFP重组质粒 ,与pEGFP -C1共转染肝癌细胞株HepG2和SMMC - 772 1,检测其对GFP表达的影响。结果 :pshRNA—GFP对共转染的 pEGFP -C1中的绿色荧光蛋白有明显的抑制作用 ,抑制率达 70 %～ 85 %。结论 :构建的 pshRNA—GFP重组质粒能有效地抑制GFP在哺乳动物细胞中的表达。
- 闫歌黄爱龙唐霓张秉强向明确蒲丹
- 关键词：RNA干扰绿色荧光蛋白短发夹状RNA
- N-乙酰半胱氨酸抑制人肝细胞凋亡的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的 探讨体外内毒素 (LPS)对LO2 细胞的直接作用以及N 乙酰半胱氨酸 (N acetylcysteine,NAC)的抑制效果。方法 将LO2 细胞培养 2 4h后换用含LPS(2 0 μg/ml)和 /或NAC(5mmol/L)的新鲜培养液 ,提取肝细胞的基因组DNA ,经琼脂糖凝胶电泳观察肝细胞生物化学性质的改变 ;用透射电镜研究其形态学变化 ;TUNEL标记法检测细胞凋亡。结果 LPS直接作用的LO2 细胞在形态学上表现出胞浆浓缩核凝聚成团块、形成凋亡小体、细胞器结构基本正常等凋亡细胞的特征。将NAC与LPS同时加入培养液 ,作用 16h发现NAC可明显减少因LPS所诱导的LO2 细胞的凋亡。结论 LPS在体外可诱导肝细胞凋亡 ,NAC能抑制其作用。
- 吴刚闫歌巫国谊高小林张建军张大志郭树华
- 关键词：内毒素N-乙酰半胱氨酸凋亡肝细胞
- 凋亡抑制因子survivin基因的克隆及在真核细胞中的表达
- 2004年
- 目的 :克隆Survivin编码序列并在真核细胞中表达。方法 :RT -PCR扩增Survivin编码序列 ,建立与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的融合重组质粒 ,转染哺乳动物细胞 ,利用GFP绿色荧光和WesternBlot检测Survivin蛋白的表达。结果 :RT -PCR扩增出 4 2 1bp的Survivin编码序列 ,构建融合重组质粒pEGFP -C1-Survivin ,利用GFP荧光和WesternBlot证实Sur vivin蛋白的表达。结论 :成功克隆Survivin基因并在真核细胞中表达。
- 闫歌蒲丹唐霓张秉强高小玲宋文鑫何通川黄爱龙
- 关键词：SURVIVIN绿色荧光蛋白真核细胞
- 重组冠状病毒核衣壳蛋白血清抗体检测被引量：5
- 2004年
- 目的 SARS冠状病毒的核衣壳 (Nucleocapsid)蛋白 (N蛋白 )是病毒的主要结构抗原 ,重组N蛋白可用作抗原检测患者血清中相应抗体。方法 以纯化的目的蛋白N 1,N 2分别包被 96孔板 ,检测正常人群及患者血清中抗SARS病毒抗体。结果 检测SARS感染患者血清 ,N 1阳性检出率为 5 5 .6 8% ,N 2阳性检出率为 5 6 .82 % ,与华大基因试剂盒相比符合率分别为 90 .12 %和 87.6 5 %。结论 重组核衣壳蛋白可做为检测SARS抗体的抗原蛋白。
- 蒲丹闫歌张秉强宋文鑫高小玲唐霓王丕龙郑建黄爱龙闫惠平檀玉芬
- 关键词：SARS核衣壳蛋白ELISA抗体
- 重组SARS-CoV刺突蛋白基因片段的原核表达及纯化被引量：1
- 2004年
- 目的 :冠状病毒 (SARS -CoV)的刺突蛋白 (spikeglycoprotein ,S蛋白 )是病毒的主要结构蛋白之一 ,也是重要的病毒抗原 ,重组S蛋白的表达可用于检测病毒感染后血清抗体。方法 :根据抗原性预测分析结果 ,将S蛋白中抗原决定簇的编码基因重新拼接成两个新的基因 ,通过全基因合成方式直接合成至原核表达载体pET32a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,以IPTG诱导表达 ,Ni-NTA试剂盒纯化目的蛋白。结果 :SDS -PAGE证实重组S蛋白的表达 ,并被纯化。结论 :重组刺突蛋白的表达及纯化 ,可做为检测SARS -CoV抗体的抗原 ,有助于进一步开展SARS
- 蒲丹宋文鑫闫歌张秉强唐霓王丕龙郑建黄爱龙
- 关键词：SARS-COV刺突蛋白纯化
- 重组腺病毒IκBαM在裸鼠体内对人肝癌细胞HepG_2的凋亡作用被引量：2
- 2004年
- 高小玲贾丽萍浦丹闫歌卢年芳唐霓黄爱龙
- 关键词：核因子KB凋亡作用人肝癌细胞IKBΑ蛋白质分子
- RNA干扰技术对肝癌细胞内源survivin基因表达的影响被引量：21
- 2004年
- 应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对凋亡抑制因子survivin的siRNA抑制肝癌细胞株内源survivin基因的表达.转染重组质粒pshRNA survivin至肝癌细胞株SMMC 772 1,通过免疫荧光、蛋白质印迹和半定量RT PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化.结果表明:构建的三种重组质粒pshRNA survivin1/2/3均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA survivin的实验组survivin荧光强度明显低于转染载体pTZU6 +1和pshRNA GFP对照组;蛋白质印迹结果表明,重组质粒pshRNA survivin明显抑制survivin蛋白的表达,抑制率为 6 2 %～ 78%,通过半定量RT PCR检测到survivin基因mRNA转录明显减少,抑制率为5 7%～ 6 4 %.由上述结果可以得出结论:重组质粒pshRNA survivin可明显抑制SMMC 772 1细胞内源survivin的表达和mRNA的转录。
- 闫歌蒲丹 唐霓高小玲宋文鑫卢年芳吴刚Tong-Chuan He 黄爱龙
- 关键词：RNA干扰肝癌细胞株SURVIVIN基因
- 内毒素体外诱导人肝细胞凋亡的研究被引量：11
- 2004年
- 目的 :探讨内毒素 (LPS)在体外直接作用于LO2细胞 ,引起细胞凋亡所表现出的病理及生物化学特性的变化。方法 :LPS诱导LO2细胞的凋亡。将LO2细胞培养 2 4h后换用含LPS( 2 0 μg/ml)的新鲜培养液 ,设多个时间点 ,提取肝细胞的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳观察肝细胞生物化学性质的改变 ;用透射电镜观察其形态学变化 ;TUNEL标记法观察细胞凋亡。结果 :LPS直接作用的LO2细胞在形态学上表现出胞浆浓缩核凝聚成团块、形成凋亡小体、细胞器机构基本正常等凋亡细胞的特征 ;在生物化学方面表现典型的凋亡梯形。肝细胞凋亡在处理后 2 4小时之内随处理时间的延长而增加。TUNEL检测结果显示染色阳性细胞。结论 :LPS在体外的直接作用可诱导正常肝细胞发生凋亡。
- 吴刚闫歌巫国谊高小林张建军张大志郭树华
- 关键词：内毒素凋亡肝细胞
- RNA干扰介导对乙型肝炎病毒复制的抑制作用被引量：10
- 2004年
- 构建针对乙型肝炎病毒(HBV)核心区或表面抗原编码区的siRNA表达载体pSI-C和pSI-S,在体外HBV复制细胞模型中观察对HBV复制和表达的影响.将pSI-C,pSI-S与1.3倍HBV真核表达质粒pHBV共转染HepG2细胞,分别在转染后24,48和72h,观察pSI-C和pSI-S对细胞上清和胞内病毒抗原表达的影响,并用分子杂交方法从病毒复制、转录和翻译水平检测目的基因的表达情况.实验结果表明,pSI-C及pSI-S能明显抑制细胞内HBsAg和HBcAg的合成,呈序列特异性和剂量依赖性的特点,而对照组siRNA无抑制作用.pSI-C比pSI-S抑制作用更强,转染后第2天对HBsAg和HBeAg抑制率达高峰,分别为92%和85%.Southern和Northern杂交结果表明,HBVsiRNA能降低目的基因转录和病毒复制中间体的表达水平,提示针对乙型肝炎病毒核心区和表面抗原编码区的siRNA能有效抑制HBVRNA分子转录和病毒复制,最终降低病毒抗原表达,这为运用RNAi技术进行HBV基因治疗提供了新的思路.
- 唐霓张秉强闫歌蒲丹高小玲Tong-ChuanHe黄爱龙
- 关键词：抗病毒治疗乙型肝炎病毒RNA干扰病毒复制基因治疗RNA干扰介导
- 融合蛋白胸腺素α1-干扰素α抗乙型肝炎病毒活性的实验研究被引量：5
- 2005年
- 目的观察融合蛋白胸腺素α1-干扰素α(TA1-IFN)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用,并与胸腺素α1、干扰素α两者联合(TA1+IFN)应用的体外抗HBV作用进行比较。方法HepG22.2.15细胞接种后24h,换用含5种不同浓度(8000、4000、2000、1000、500U／ml)药物的培养基,37℃、体积分数5％CO2条件下培养,每3d换用原浓度含药培养液1次,并于第6天收集培养液,用Abbott诊断试剂盒,分别检测不同组药物作用后上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)的含量,并计算其抑制率;同时用四甲基偶氮唑盐比色分析法检测不同组药物对HepG22.2.15细胞的细胞毒性作用。结果TA1-IFN体外对HBsAg、HBeAg的抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系,并且在药物浓度达8000U／ml后趋于稳定,此时TA1-IFN对HBsAg、HBeAg抑制率分别为72.2％±0.8％、60.4％±1.1％,细胞存活率为85.2％±2.0％;而相应浓度的TA1-IFN对HBsAg、HBeAg抑制率为40.0％±0.7％、34.5％±3.2％,细胞存活率为70.0％±1.9％,两者HBsAg、HBeAg抑制率及细胞存活率比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论融合蛋白TA1-IFN体外具有良好的抗HBV作用,其体外抗HBV活性比TA1-IFN联合应用强,且细胞毒性比TA1+IFN联合应用时小,本实验为融合蛋白TA1-IFN的临床研究提供了重要的理论?
- 卢年芳黄爱龙郑瑞强朱亚彬夏仲芳唐霓闫歌高小玲吴莹
- 关键词：融合蛋白胸腺素干扰素Α
