郭巨涛
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鸭乙型肝炎病毒感染雏鸭原代肝细胞培养方法的建立及其应用被引量：2
- 1994年
- 应用胰蛋白酶灌流DHBV感染北京雏鸭肝脏,制备原代培养的鸭肝细咆,斑点、杂交法检测DHBV DNA。观察了体外培养条件下鸭肝细胞中DHBV复制动态和药物对DHBV DNA复制的作用。结果表明,培养1～8天的鸭肝细胞中DHBV处于活跃复制状态,随着培养时间继续延长,细胞逐渐脱落,细胞中DHBV DNA减少,复制减弱。磷羧基甲酸钠、叠氮脱氧胸苷、脱氧无环鸟苷和中药肝可康、肝复灵五种药物对DHBV DNA的复制均有抑副作用。
- 郭巨涛滕立田佩玉陈鸿珊
- 关键词：乙型肝炎病毒细胞培养抗病毒药
- 鸭乙型肝炎病毒复制复合体中内源性DNA聚合酶测定方法的建立及其应用被引量：9
- 1990年
- 应用~3H-TTP作为放射性掺入底物,建立了鸭乙型肝炎病毒复制复合体(DHBVRCs)内源性DNA聚合酶的测定方法,研究了该酶的生化特性,试验了12种药物对该酶的抑制作用。结果该方法测定的内源性DNA聚合酶为DHBV特异的,其活性依赖于4种dNTP和Mg~ ++的存在。最适Mg^++浓度为20mM。NP-40可刺激其活性。放线菌素D仅能抑制其30％的活性,膦羧基甲酸钠(PFA)、膦羧基乙酸钠(PAA)和苏拉明可抑制此酶,它们的半数抑制浓度分别为8.5μM、860μM和9.25μM。而Ara-AMP等几种药物对该酶无抑制作用。应用放射性掺入电泳自显影法证明,PFA对DHBV RCs中依赖DNA和RNA的DNA聚合酶均有显著的抑制作用。
- 郭巨涛陈鸿珊
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶
- 核酶对鸭乙型肝炎病毒感染体内抗病毒作用效果的观察被引量：4
- 1998年
- 目的观察核酶在体内抗病毒作用效果。方法选择鸭乙型肝炎（ＤＨＢＶＬＪ－７６）及其鸭动物模型作为检测系统，将针对ＤＨＢＶＰｒｅ－Ｓ７３６位点的核酶（ＲｚＤＳ）插入ｐＪ１２０质粒构建成ｐＪ－ＲｚＤＳ。与痘苗病毒天坛７６１株（ＶＶ）同源重组后获得含ＲｚＤＳ的重组痘苗病毒（Ｖ－ＲｚＤＳ）。用ＤＨＢＶ感染１日龄北京鸭，分别在感染的同时、感染后２４小时和７２小时注射Ｖ－ＲｚＤＳ和ＶＶ，１０天后检测血清中ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量。结果北京鸭在感染ＤＨＢＶ的同时注射Ｖ－ＲｚＤＳ，其ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量均低于ＶＶ对照组，两组之间有显著性差异。结论提示ＲｚＤＳ对ＤＨＢＶ基因组复制和表达均有抑制作用，其抑制率分别为４５％和６３％。
- 李虹陈文徐纬王平郭巨涛侯云德
- 关键词：核酶鸭乙型肝炎病毒
- 抗HCV药物及其体内外模型研究进展
- 1999年
- 美国Chiron公司的研究人员Choo等于1989年首次成功地克隆了非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒cDNA,正式将该病毒命名为丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV),并建立了测定血清HCV抗体的酶联免疫吸附试验。流行病学研究表明,HCV感染是引起输血后肝炎的最主要病原体,随着HCV诊断技术在献血员筛选中的应用,我国辅血后肝炎的发生率已降低了80％。尽管如此,HCV感染的防治仍将是摆在我们面前的一个十分艰巨的任务。
- 郭巨涛陈鸿珊
- 关键词：丙型肝炎作用靶点
- 抗嗜肝DNA病毒中草药的体外快速筛选被引量：1
- 1995年
- 采用测定鸭乙型肝炎病毒未成熟核心颗粒复制复合体中内源性DNA多聚酶(DHBV RCs DNAp)及HBV DNAp的方法,对叶下珠等中草药提取物进行了对DNAp的抑制试验;同时采用测定抑制HBsAg与抗-HBs结合方法,观察药物提取物对HBsAg的灭活能力。结果显示出:①叶下珠提取物对DHBV RCs DNAp有较强体外抑制作用,在浓度为1mg/ml、0.1mg/ml和0.01mg/ml时其抑制率分别为72.6％、45.6％和5.2％,而其它药物抑制作用较弱或无抑制作用;②叶下珠、旱莲草和虎杖提取物对HBV DNAp有体外抑制作用,在浓度为1mg/ml时,抑制率分别为67.6％、65.5％和79.9％。③虎杖、大黄、夏枯草、金钱草、旱莲草和叶下珠等中草药提取物对HBsAg有较强的体外抑制能力,在浓度为10mg/ml时对HBsAg与抗-HBs结合的抑制率分别为97.6％、93.8％、84.5％、82.1％、83.2％和73.3％,并且抑制率与药物浓度间有剂量应答。
- 米志宝张习坦蒋豫图陈鸿珊李壮郭巨涛
- 关键词：中草药嗜肝DNA病毒药物筛选
- 几种药物抑制马传染性贫血病毒和人免疫缺陷病毒的实验研究被引量：3
- 1992年
- 用马传染性贫血病毒—驴胚肺二倍体细胞(EIAV-DELDC)为实验体系,以细胞中病毒逆转录酶活性及病毒相关抗原的表达为观察指标,检测了叠氮胸苷(AZT)、三氮唑核苷(Ribavirin,病毒唑)、磷羧基甲酸钠(PFA)和苏拉明等4种已知抗人免疫缺陷病毒(HIV-1)药物对马传染性贫血病毒的抑制作用。结果表明,PFA、AZTTP(三磷酸AZT)和苏拉明均能抑制病毒相关抗原的表达,AZT虽无此作用,但能抑制细胞内逆转录酶活性。用~3H-TMP掺入法比较了PFA、AZTTP、苏拉明对体外无细胞系EIAV逆转录酶粗提物和HIV-1基因工程产物逆转录酶活性的抑制作用表明,两种逆转录酶对苏拉明的敏感性相近,而HIV-1逆转录酶对PFA和AZTTP的敏感性较EIAV者高约100倍。又以无细胞系中逆转录酶活性测定法,检测了12种中药提取物的抑制作用,其中小柴胡汤对EIAV和HIV-1逆转录酶活性都有抑制作用,IC_(50)为717μg/ml和700μg/ml(生药浓度)。小柴胡汤对两种病毒感染细胞中抗原的表达和HIV引起细胞病变都有抑制作用,对HIV-1的抑制比EIAV强。这些结果表明,EIAV-DELDC体系可考虑作为抗HIV-1药物筛选模型。
- 张兴权权可久唐小山孙明陈鸿珊陶佩珍田佩玉郭巨涛
- 关键词：抗艾滋病药EIAVHIV
- 酶联免疫吸附试验检测HCV NS3-4A蛋白酶活性被引量：6
- 2000年
- 目的 建立一种检测丙型肝炎病毒 (HCV) NS3- 4A丝氨酸蛋白酶的酶联免疫吸附试验 (EL ISA)方法 ,用于筛选 HCV蛋白酶抑制剂。方法 将质粒 p MAL- c2 / NS3- 4A转化到大肠杆菌 K1 2 TB1 中 ,经 IPTG诱导表达 ,亲和层析柱纯化后得到麦芽糖结合的 NS3/ NS3- 4A融合蛋白 ,用 Western blot分析其免疫学活性 ,并以酶联免疫吸附试验检测其生物学活性。结果 SDS- PAGE电泳分析并用考马斯亮蓝染色 ,显示相对分子质量 112 0 0 0和116 0 0 0处有麦芽糖结合的 NS3及 NS3- 4A融合蛋白带出现 ;Western blot分析表明 ,表达的产物可与抗 NS3蛋白的单克隆抗体发生阳性反应。EL ISA证实 HCV NS3- 4A蛋白酶能使特异底物裂解。正交实验获得 EL ISA的最佳实验条件 ,其 P/ N值为 3.6 3,批内和批间变异系数 (CV)分别为 4.16 %和 7.5 2 %。此方法测定 1,4萘醌对 HCV蛋白酶活性 5 0 %抑制浓度 (IC5 0 )为 8.36 μm ol/ L。结论 建立的 EL ISA方法 ,用于测定 HCV蛋白酶活性 ,具有简便、快速、重复性好等特点 ,为以 HCV NS3- 4A蛋白酶为靶酶的抑制剂筛选及抗 HCV药物的研究奠定了基础。
- 陈湘红郭巨涛陈鸿珊王琳
- 关键词：丙型肝炎病毒ELISA
- 鸭乙型肝炎病毒DNA聚合酶和逆转录酶在抗乙型肝炎病毒药物研究中的应用被引量：2
- 1992年
- 本实验改进了鸭乙型肝炎病毒(DHBV)复制复合体(RCs)的制备方法,研究了14种中药复方和单味药提取物及30种成分药对DHBV DNA、聚合酶(DNAP)和逆转录酶(RT)的抑制作用。发现小柴胡汤提取物对DHBV RT和DNAP有轻度抑制作用,其7味药提取物中,黄芩和半夏对RT的半数抑制浓度(IC50)分别为1.25和18.6mg/ml,黄芩对DNAP的IC50为0.925mg/ml。鸭体内实验证明,口服给予黄芩水煎剂(5g/kg,每日3次,共10天)可显著降低鸭血清中DHBV DNA水平。此外,虎杖提取物对RT的IC50为1.76mg/ml,鱼腥草素等9种成分药对RT有轻度抑制作用。
- 郭巨涛陈鸿珊唐小山康淑卿
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA
- 鸭乙型肝炎病毒复制复合体（DHBV RCs）的提纯及其对外源模板的利用
- 1994年
- 鸭乙型肝炎病毒复制复合体（ＤＨＢＶＲＣｓ）的提纯及其对外源模板的利用邵兴无，陶佩珍，郭巨涛，陈鸿珊（中国医学科学院医药生物技术研究所，北京１０００５０）关键词鸭乙型肝炎病毒复制复合体，ＤＮＡ聚合酶，核心抗原，外源模板１鸭乙型肝炎病毒复制复合体（ＤＨＢ...
- 邵兴无陶佩珍郭巨涛陈鸿珊
- 关键词：乙型肝炎病毒提纯
