郑其升
- 作品数：148 被引量：292H指数：9
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省农业科技自主创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 禽流感病毒M2、NP融合蛋白与多种佐剂的联合运用及对免疫原性影响被引量：1
- 2009年
- 以禽流感病毒保守的基质蛋白2胞外区(M2e)基因与核蛋白的两个T细胞表位(NP1、NP2)基因为基础构建原核表达载体pET-3M2e-NP1-NP2。利用IPTG诱导,目的蛋白以可溶性形式获得高效表达,Western blot分析表明重组蛋白能够与抗AIV M2e蛋白的抗体发生反应。将纯化的融合蛋白分别与弗氏佐剂、白油、壳聚糖3种佐剂进行混合以及适量诱导后的菌体与白油混合制成疫苗,肌肉注射免疫20日龄非免鸡,首免3周后加强免疫一次。免疫后每周定期采血,用ELISA方法检测抗M2e抗体水平;并在MDCK细胞上检测血清与病毒的结合能力;在鸡胚上检测血清的中和能力;利用流式细胞计数技术测定CD4+、CD8+T淋巴细胞数量的变化。结果表明,原核表达的融合蛋白能够刺激机体产生免疫反应,抗血清能够跟H9N2亚型禽流感病毒特异性结合,血清不能中和病毒但在低病毒含量感染时候抑制病毒的复制。流式细胞仪检测显示外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞数量在免疫后明显升高(P<0.05),具有细胞免疫的特征。佐剂对于免疫反应影响明显,其中弗氏佐剂组产生抗体最高,白油佐剂组次之,壳聚糖组抗体水平最低,菌体白油组产生抗体水平与白油佐剂组相当但维持时间较长。构建的融合蛋白可用于禽流感的预防,而选择高效的佐剂增强亚单位苗的免疫效果也是目前急需解决的问题。
- 徐海侯红岩邓碧华郑其升侯继波
- 关键词：禽流感病毒抗原表位佐剂免疫原性
- 经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析
- 2017年
- 利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;纯化目的蛋白质后,进一步评价其体外抗病毒活性。Western blot结果显示以7.5MOI接种量感染的sf9细胞在96h时获得了较高的表达,同时获得的重组猪Ficolinα具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性。猪Ficolinα在sf9昆虫细胞中获得成功表达,且具有良好的抗PRRSV活性。本研究可以为猪Ficolinα的抗病毒活性及作用机制研究提供物质基础。
- 李兰乔绪稳张元鹏陈瑾郑其升侯继波
- 关键词：抗病毒作用
- 胍基化壳聚糖的制备方法及其应用
- 本发明提供一种胍基化壳聚糖的制备方法，通过将壳聚糖(CS)、精氨酸(L‑Arginine)、及4‑(4,6‑二甲氧基三嗪)‑4‑甲基吗啉盐酸盐(DMT‑MM)同时加入甲醇‑水混合溶剂中，室温下搅拌6～8h，真空状态下除去...
- 秦竹郑其升史海健吴晓烽侯继波
- 文献传递
- 编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因及其应用
- 本发明提供编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因及其应用<B>，</B>属于分子生物学领域。编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因，含有SEQ ID NO:1所示的序列。本发明还提供含有上述基因的重组表达载体，含有重组猪...
- 李鹏成郑其升乔绪稳陈瑾侯继波
- 一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法
- 本发明提供一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法，涉及生物技术领域。一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法，包括以下步骤：（1）将氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的接头蛋白加入口蹄疫病毒灭活抗原中，混匀，孵育；（2）加入纯...
- 乔绪稳郑其升于晓明陈瑾李鹏成张元鹏侯立婷侯继波
- 文献传递
- 基于GEM展示技术内含肽介导的犬α干扰素快速纯化系统的建立被引量：1
- 2019年
- 本研究分别构建含有断裂型内含肽(inteins)C端与犬α干扰素融合基因(C*-CaIFN-α)、断裂型内含肽N端与锚钩蛋白(protein anchor,PA)融合基因(NC1A-PA3)的重组表达质粒,利用IPTG诱导表达。通过GEM颗粒(gam-positive baterial enhancermatrixparticles)与PA3之间的特异性结合,将NC1A-PA3蛋白捕获到GEM颗粒上,再利用内含肽的N端与C端的结合,获得GEM-PA3-NC1A-C*-CaIFN-α。在DTT或EDTA存在情况下,内含肽C末端自我剪切,获得纯化的犬α干扰素重组蛋白CaIFN-α。通过微量细胞病变抑制方法测定CaIFN-α蛋白的活性。结果表明,两种重组蛋白均有可溶形式表达,GEM/inteins纯化系统效果良好;纯化的犬α干扰素CaIFN-α对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的抗病毒活性为3.0×106U/mL。本研究建立的基于GEM展示平台的蛋白纯化系统,将非层析标签与断裂内含肽系统相结合,为快速有效地纯化重组蛋白提供了一种方法。
- 仝晴晴杨利乔绪稳陈瑾张元鹏郑其升牛家强侯继波
- 关键词：GEM纯化
- 猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因在酵母中的分泌表达与鉴定被引量：3
- 2004年
- 基于猪瘟病毒主要保护性抗原 E2 囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位--B/C 抗原区和 A/D 抗原区,设计一对特异性的引物扩增猪瘟病毒 E2 蛋白的 A/D 抗原区基因, 并将 PCR 产物克隆入含有强启动子 PAOX1和α-MF 信号肽序列的巴斯德毕赤酵母表达载体 pPICZαC 中,构建成重组质粒 pPICZα-AD,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母 X33菌中,经 ZeocinTM筛选得到 5 株高拷贝转化子,甲醇诱导表达。SDS-PAGE 和 Western blot试验表明酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的 E2 蛋白,蛋白表达量达 175.8μg/mL。N-糖基化分析显示该表达蛋白在分泌过程中发生糖基化。该研究为研制防治猪瘟的亚单位疫苗与诊断试剂盒奠定基础。
- 徐学清张素芳郑其升苏小运任雪枫陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒毕赤酵母
- 一种口蹄疫免疫增强剂、制备及其应用
- 本发明提供一种口蹄疫免疫增强剂，所述口蹄疫免疫增强剂是将黄芪多糖、磷酸三苯酯、透明质酸和胞壁酰二肽依次溶解于溶剂后得到的，所述免疫增强剂中胞壁酰二肽的浓度为80‑220μg/mL，磷酸三苯酯的浓度为20‑60mg/mL，...
- 陈瑾郑其升侯立婷于晓明张元鹏杜露平王义伟乔绪稳侯继波
- 文献传递
- 氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷对TNF-α诱导内皮细胞炎症的抑制作用
- 2013年
- 目的研究氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷(Mv-3-glc-Cl)对细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)所产生炎症的抑制作用。方法实验分为,空白组(DMSO)、10 g/L T NF-α刺激组、浓度为1、10、50、100 mol/L MV-3-gle-Cl+10 g/L TNF-α刺激组,通过ELISA方法检测细胞上清中可溶性单核细胞趋化蛋白(MCP-1)蛋白含量的变化;用实时荧光定量PCR检测细胞中MCP-1 mRNA表达量变化;Western blot检测IκBα蛋白含量的变化;通过免疫荧光方法测定核转录因子κB的核异位变化。结果 Mv-3-glc-Cl呈浓度依赖性的抑制细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MCP-1蛋白表达,其抑制作用可能与NF-κB信号通路有关。结论 Mv-3-glc-Cl对TNF-α诱导HUVEC的炎症反应起到抑制作用。
- 王健李春阳黄午阳郑其升刘娅梅
- 关键词：单核细胞趋化蛋白核转录因子KB
- 猪初乳中PEDV IgA抗体捕获ELISA检测方法的建立及其初步应用被引量：3
- 2023年
- 为建立评价猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗免疫效力的方法,本研究利用纯化的PEDV免疫BALB/c小鼠,按照常规方法制备PEDV全病毒单克隆抗体(MAb)作为捕获抗体,PEDV细胞培养上清为夹心抗原,HRP标记的羊抗猪IgA为二抗,采用棋盘滴定法对各反应条件优化后建立了用于猪初乳中PEDV IgA检测的捕获ELISA方法,并确定其临界值为0.25。采用该捕获ELISA对PEDV、PCV2b、PRRSV、PRV、JEV、PPV、FMDV与CSFV IgA抗体阳性猪初乳进行检测,结果显示,除PEDV IgA抗体阳性猪初乳检测结果为阳性外,其他病毒抗体阳性猪初乳检测结果均为阴性,表明该方法特异性强。采用该方法和BIONOTE PEDV IgA试剂盒对从1∶10开始2倍倍比稀释的16个稀释度的阳性猪初乳样品检测,结果显示该方法对阳性样品检测的最大稀释度为1∶40960,是BIONOTE PEDV IgA试剂盒敏感性的16倍(1∶2560),表明本研究建立方法的敏感性高。分别采用同一批次和不同批次制备的MAb包被的ELISA板分别检测5份PEDV IgA抗体阳性和1份PEDV IgA抗体阴性猪初乳,评估该方法的重复性。结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数分别为0.34%~4.49%和1.90%~8.71%,均小于10%,重复性好。利用该捕获ELSIA和IDEXX PEDV IgA抗体试剂盒分别对50份猪初乳检测,结果显示两种方法对样品检测的OD450nm值趋势高度一致,表明该方法检测结果与IDEXX试剂盒相关性强。利用该捕获ELISA和BIONOTE PEDV IgA试剂盒对100份临床采集的猪初乳样品检测,结果显示二者总体符合率为97.0%。利用该方法对90份免疫背景不同的猪初乳检测,结果显示,未感染PEDV且未免疫PED疫苗的母猪初乳检测结果均为阴性结果,感染了PEDV或接种过PED疫苗的母猪初乳均为阳性结果,检测结果与样品的免疫背景相符。本研究建立的捕获ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,与同类进口产品检测结果符合率高,对临床样品的检测结果与其�
- 杨利张浩明张浩明侯立婷于晓明
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
