邵洁 作品数:26 被引量:26 H指数:3 供职机构: 南京大学医学院附属鼓楼医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 南京市医学科技发展项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 自动化与计算机技术 更多>>
人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的构建及抗肿瘤作用 目的 通过CRISPR-Cas9 基因编辑技术及质粒电转染技术构建TIM3 基因敲除的人外周血T 淋巴细胞,探讨敲除TIM3 基因后能否增强T 细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法 通过电转染法将 hTIM3 sgRNA/C... 王康馨 赵阳 苏舒 邵洁 魏嘉 刘宝瑞关键词:细胞治疗 抗肿瘤作用 人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的制备及其抗肿瘤作用 被引量:4 2019年 目的:通过CRISPR-Cas9基因编辑技术及质粒电转染技术制备T细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)基因敲除的人外周血T淋巴细胞,探讨敲除TIM3基因后能否增强T细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法:通过电转染法将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒共转染EBV阳性胃癌患者外周血T淋巴细胞,电转24 h后流式细胞术检测转染效率并利用荧光显微镜观察;体外培养过程中观察基因敲除后T细胞增殖活性,流式细胞术验证TIM3基因敲除效率以及细胞表型的变化。用肿瘤抗原肽活化T细胞检测TIM3基因敲除后T细胞分泌细胞因子水平及体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力。结果:电转染法能够有效地将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒敲除体系转入人外周血T淋巴细胞,其转染效率平均达(41.5±3.6)%,基因敲除效率波动在40.0%~50.0%(均P<0.01);经抗原活化后的基因敲除组T细胞的增殖活性和免疫表型未见明显变化,表面活化分子中仅见HLA-DR较对照组明显提高(P<0.05);TIM3基因敲除T细胞分泌TNF-α、IFN-γ的水平显著增高(P<0.01或P<0.05),体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力也明显增强(均P<0.05)。结论:用CRISPR-Cas9基因编辑及质粒电转染技术制备人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的方法简易可行,在体外的扩增活化中保持TIM3基因水平下调并具有更高的免疫应答水平以及更强的抗肿瘤作用。这一新技术的研发为基因工程化细胞免疫治疗提供了新的思路。 王康馨 赵阳 苏舒 邵洁 魏嘉 刘宝瑞关键词:T淋巴细胞 细胞治疗 抗肿瘤作用 细胞因子IL-7与IL-15联合优化胃癌EBV特异性CTL细胞培养体系 被引量:3 2018年 目的:探讨细胞因子白细胞介素-7(IL-7)和IL-15在胃癌EB病毒(EBV)抗原特异性细胞毒性T细胞(CTLs)培养中较IL-2的优势。方法:提取胃癌患者外周血单个核细胞贴壁培养2 h,贴壁细胞加IL-4和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导树突状细胞(DC),成熟的DC负载EBV抗原肽与T细胞混合培养,诱导EBV-CTLs,比较在细胞因子IL-2或IL-7/15培养条件下诱导的EBV-CTLs的扩增能力、表型、免疫应答及体外杀伤能力的差别。结果:与细胞因子IL-2相比较,IL-7联合IL-15培养的EBV-CTLs细胞中含有较高比例的CD3^+T细胞[(91. 2±1. 5)%vs (80. 8±1. 6)%,P=0. 008 4]以及较高比例的CD3^+CD8^+T细胞[(66. 8±2. 3)%vs (30. 17±6. 9)%,P=0. 007 6];在维持中央记忆性T细胞扩增方面,IL-7联合IL-15扩增的EBV-CTLs细胞中含有较高比例的CD8^+CD62L^+T细胞[(26. 4±2. 3)%vs(9. 6±1. 4)%,P=0. 003 6]及CD8^+CD27^+T细胞[(38. 5±3. 7)%vs (16. 7±2. 9)%,P=0. 01];在免疫应答能力方面,接触DC负载抗原肽24 h后,IL-7联合IL-15培养的EBV-CTLs能分泌更多的γ干扰素(IFN-γ),且CD137上调明显高于IL-2组;在体外杀伤实验中,IL-7联合IL-15诱导的EBV-CTLs对表达EBV抗原的靶细胞表现出更强的杀伤作用。结论:IL-7联合IL-15在扩增胃癌抗原特异性EBV-CTLs方面具有优势,扩增的细胞中含有较高比例的CD3^+CD8^+T细胞,且能维持中央记忆性T细胞的扩增,表现出有更强的免疫应答和体外抗肿瘤效果,为其进一步临床个体化治疗EBV阳性胃癌提供客观实验依据。 邵洁 苏舒 徐秋萍 邹征云 魏嘉 杜娟 孟凡岩 钱晓萍 刘宝瑞关键词:过继性免疫治疗 细胞毒性T淋巴细胞 EBV感染 IL-7 IL-15 螺旋断层放疗系统三种自动配准技术在头颈部肿瘤治疗摆位中的差异 王文保 刘娟 邵洁 周霞 闫婧螺旋断层放疗系统三种自动配准技术在头颈部肿瘤治疗摆位中的优劣比较 王文保 刘娟 邵洁 周霞 闫婧一种肿瘤新抗原预测方法、系统、电子设备及存储介质 本发明公开了一种肿瘤新抗原预测方法、系统、电子设备及存储介质,其方法包括以下步骤:获取肿瘤新抗原训练数据;将肿瘤新抗原训练数据经预处理后,获取全部肿瘤新抗原预测关键特征,得到可信数据,构成可信数据集;采用可信数据集,根据... 辛恺 刘芹 邵洁 刘宝瑞小剂量放疗对CTL细胞的体内趋化作用研究 目的:研究小剂量放疗对不同输注途径(静脉、腹腔注射)CTL细胞在活体内的分布及体内趋化作用的影响。方法:裸鼠皮下注射胃癌细胞建立肿瘤活体模型,对移植瘤行小剂量放疗;以近红外荧光染料DiR标记CTL细胞,而后经尾静脉途径和... 杜娟 苏舒 孟凡岩 李红燕 邵洁 邹征云 钱晓萍 刘宝瑞关键词:胃癌 放疗 免疫治疗 趋化 小剂量放疗对CTL细胞的体内趋化作用研究 目的:研究小剂量放疗对不同输注途径(静脉、腹腔注射)CTL细胞在活体内的分布及体内趋化作用的影响。方法:裸鼠皮下注射胃癌细胞建立肿瘤活体模型,对移植瘤行小剂量放疗;以近红外荧光染料DiR标记CTL细胞,而后经尾静脉途径和... 杜娟 苏舒 孟凡岩 李红燕 邵洁 邹征云 钱晓萍 刘宝瑞关键词:胃癌 放疗 免疫治疗 趋化 记忆性干细胞样T细胞在肿瘤治疗应用中的研究进展 2017年 记忆性干细胞样T细胞(stem memory T cells,TSCM)是最近几年发现的一个细胞亚群,约占外周血中总的CD4+T细胞和CD8+T细胞的2%~4%,是记忆性T细胞的早期分化阶段,具有记忆性细胞和干细胞的特点,基因谱介于初始T细胞和中央记忆T细胞之间。记忆性干细胞样T细胞具有自我更新和长期存活能力,这些特点使它们成为肿瘤领域关注的热点。本文将简述记忆性干细胞样T细胞的一些特点,以及它们在肿瘤治疗中的应用。 邵洁 刘宝瑞关键词:初始T细胞 记忆性T细胞 干细胞 应用EPID分析颈、胸上段食管癌适形调强放疗的摆位误差 被引量:5 2013年 目的:用电子射野影像验证系统(EPID)测量分析颈、胸上段食管癌适形调强放疗的摆位误差,以制定合适的适形调强放疗计划。方法25例行适形调强放射治疗的颈、胸上段食管癌患者,制作头颈肩热塑膜,通过应用EPID比较计划射野参考图像(DRR)和实际射野验证图像(EPI)相关骨性标记的位置偏移,计算出三维方向的摆位误差,并由公式MPTV=2.5Σ+0.7σ分别计算出不考虑与考虑靶区内扩边的具体MPTV值。结果25例患者在X、Y、Z轴上的摆位系统误差标准差(Σ)分别为0.85mm、1.37mm、0.94mm,摆位随机误差标准差(σ)分别为0.95mm、0.74mm、0.89mm。不考虑靶区内扩边的MPTV值分别为3.84mm、3.94mm、2.97mm,考虑靶区内扩边的MPTV值的为7.1mm、7.67mm、7.19mm。结论通过回顾性分析25例颈、胸上段食管癌患者适形调强放疗的摆位误差,实测MPTV的大小,从而使制定适形调强放疗计划更具科学性。 邵洁 周霞 刘娟 钱晓萍 刘宝瑞 闫婧关键词:摆位误差 食管癌