邵洁
- 作品数：17 被引量：14H指数：2
- 供职机构：天津医科大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GST-G3BP Domain 1～5原核表达质粒的构建及其表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒,并在大肠杆菌中稳定表达。方法:PCR扩增G3BP Domain1～5片段,利用限制性内切酶EcoRI和NotI将其连接至载体pGEX-4T-1,将连接产物转化大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序。将转化正确的大肠杆菌过夜培养,IPTG诱导融合蛋白表达,immobilized Glutathione beads钓取目的蛋白。结果:G3BP Domain1～5片段均成功连接至载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的融合蛋白。结论:GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒构建成功。
- 葛林何津岩邵洁东莉洁方建飞李晓东杨洁
- 关键词：G3BP质粒构建DOWN
- 重组pEGFP-C2-p100质粒构建及表达被引量：2
- 2008年
- 目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoRI和BamHI双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接入pEGFP-C2质粒。将构建成功的pEGFP-C2-p100质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见p100片段。(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)p100 cDNA全长成功载入pEGFP-C2质粒。(2)p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。
- 何津岩东莉洁葛林赵钢邵洁陆燕欣李晓冬姚智杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
- 白细胞介素-8基因多态性与老年人非体外循环下冠状动脉旁路移植术预后的相关性
- 2010年
- 目的 研究白细胞介素-8（IL-8）在围手术期的变化及其与基因多态性关系,探讨心脏手术后炎性反应与预后的相关性.方法 术前分析IL-8（-251A〉T）基因多态性.并于术前、术后4 h、24 h、72 h获取血液标本检测细胞因子.同时记录手术情况及对应时间点患者肌钙蛋白T（TnT）、肌酸激酶同工酶（CKMB）和血肌酐等生化指标.结果 145名患者首次接受择期非体外循环下冠状动脉旁路移植术,术后患者血浆IL-8水平上升,术后4 h水平最高（18.0[8.4,37.1]ng/L,P=0.000）,术后3 d已下降至接近术前水平.其中-251AA基因型患者术后4 h IL-8水平产量升高（33.1[16.6,49.5]ng/L）（P=0.035）.IL-8-251AA基因型患者,TnT和CKMB水平于术后4 h高于AT和TT基因型患者（TnT：0.53[0.43,4.92]ng/ml,P=0.037;CKMB：41.5[28.8,65.5]U/L,P=0.025）;AA基因型患者血肌酐水平于术后24 h升高（93.1[76.4,121.5]μmol/L,P＝0.021）.手术后呼吸机使用〉1 d或术后住院时间〉14 d患者,术后4 h IL-8水平升高（P=0.036,0.038）.应用Logistic回归方法对术后出现呼吸机使用〉1 d,术后住院〉14 d等危险因素进行回归分析发现,IL-8-251AA患者呼吸机使用〉1 d（OR＝11.80,95% CI：1.87～74.48）,术后住院〉14 d（OR=38.00,95% CI：4.15～347.87）风险增加.结论 非体外循环下冠状动脉旁路移植术会引起机体炎性反应.IL-8-251AA基因型患者术后炎性反应程度及预后风险增加,手术后炎性反应程度和预后与遗传背景有关.
- 王赞鑫邵洁周清华刘建实朱彧杨洁魏民新
- 关键词：白细胞介素基因多态性冠状动脉旁路移植术
- JAK-STAT6高通量药物筛选工程细胞株的构建及筛选抑制剂条件的初步研究
- 目的: 建立稳定表达依赖STAT6活性的虫荧光素酶报告基因细胞株,检测STAT6活性,作为STAT6激活剂或抑制剂筛选模型.
方法: 利用基因重组和转染技术,将STAT6特异性识别启动子IgE基因序列和虫荧光素酶...
- 杨洁笪宇蓉姚智步天栩东莉洁邵洁
- 关键词：高通量筛选工程细胞株抑制剂虫荧光素酶
- 文献传递
- 人类p100蛋白对HeLa细胞周期的影响及其分子机制研究
- 细胞周期是指连续分裂的细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个序贯过程,其正常运转需要一系列蛋白精确表达、共同调控。细胞周期的调节机制主要
- 何津岩姚智葛林邵洁东莉洁杨洁
- 文献传递
- Tudor-SN蛋白TSN结构域亚结构片段重组质粒的构建与表达
- 2011年
- 目的：研究人类Tudor-SN蛋白TSN结构域4个亚片段的功能，构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ一Ⅳ）。方法：以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增出目的基因，将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pEGFP-C2载体连接，从而构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（I-IV）。将构建成功的重组质粒用脂质体法转染HeLa细胞，并在荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况，Western印迹检测融合蛋白的表达。结果：对重组质粒进行双酶切鉴定可见Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）的cDNA片段；脂质体转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）。结论：真核pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）重组质粒构建及表达成功。
- 钱宝鑫高星杰朱梦瑜杨震霞宋娟段中潮邵洁杨洁
- 关键词：DNA结合蛋白质类质粒重组融合蛋白质类
- 葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1在应激刺激下与T细胞胞内抗原1共同参与应激颗粒聚集
- 2017年
- 目的探讨葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1(SND1)在应激刺激下如何与T细胞胞内抗原1(TIA-1)共同参与应激颗粒(SG)的聚集以及如何调节应激反应。方法利用免疫荧光实验和激光共聚焦显微镜观察HeLa细胞中的SND1蛋白与TIA-1蛋白在应激刺激下是否形成共定位颗粒,并利用绿色荧光蛋白载体过表达质粒转染HeLa细胞进行外源蛋白表达,从而确定在应激刺激下SND1蛋白与TIA-1结合的结构域。利用RNA干扰技术敲除HeLa细胞中SND1蛋白表达并利用Western Blotting检测蛋白表达水平,从而观察SND1低表达是否对TIA-1聚集形成SG产生影响。利用不同热休克刺激时间观察SND1与TIA-1的聚集过程是否存在动态变化。结果 SND1蛋白在应激刺激下与TIA-1蛋白结合共同参与SG聚集,其主要作用结构域为葡萄球菌核酸酶结构域(SN domain)。SND1低表达不会抑制TIA-1聚集到SG,但会减少SG的数量。在不同热休克刺激时间下,SND1聚集到SG的运输过程滞后于TIA-1。结论 SND1蛋白在应激刺激下与TIA-1蛋白共同参与SG的聚集,从而调节细胞应激反应。
- 邵洁张兵兵赵猛周云丽任丽
- 关键词：应激
- 人类U5·116 ku蛋白基因片段的克隆
- 2007年
- 目的:构建人类U5·116 ku基因全长真核表达质粒。方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,一步法合成单链cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人类U5·116 ku基因两段连续的序列,首先分别克隆至pTZ57R/T载体,两段序列连接成全长后再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒。结果:RT-PCR法获得U5·116 ku基因两段连续的序列,长度分别为1672bp和1246bp,分别与pTZ57R/T载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(-)真核表达载体进行连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒构建成功。结论:成功克隆了人类U5·116 ku的编码基因,并构建了其真核表达质粒pcDNA3.1(-)-U5·116 ku。
- 洪敬欣邵洁史雪彬姚智杨洁
- 关键词：HELA细胞质粒逆转录聚合酶链反应
- 乳腺癌中神经激肽受体的表达及受体拮抗剂的作用研究被引量：1
- 2015年
- 目的:研究乳腺癌中全长型、截短型神经激肽1受体(neurokinin 1 receptor,NK1R)和神经激肽2受体(neurokinin 2 receptor,NK2R)的表达,及受体拮抗剂对乳腺癌细胞生长的影响。方法:采用免疫组织化学法检测天津医科大学肿瘤医院51例乳腺癌及其癌旁正常组织、30例乳腺良性病变组织总NK1R(包括NK1R-FL和NK1R-Tr)和NK2R表达,采用实时定量PCR和免疫印迹技术检测乳腺细胞系中NK1R-FL、NK1R-Tr和NK2R表达,建立NK1R-FL和NK1R-Tr过表达的乳腺细胞系,在NK1R和NK2R拮抗剂作用下测定细胞增殖和软琼脂集落形成能力。结果:乳腺癌及癌旁正常组织、乳腺良性病变组织中均总NK1R过表达,乳腺癌组织中NK1R-FL、NK2R表达相比癌旁正常组织显著降低,并与乳腺癌分型、组织学分级、淋巴结转移及Ki-67、HER-2、ER和PR表达相关。HBL-100细胞中NK1R-FL和NK2R过表达、NK1R-Tr低表达,MDA-MB-231、T-47D和MCF-7细胞中只表达NK1R-Tr。乳腺癌细胞中NK1R-Tr低表达、NK1R-FL表达增加其对NK1R和NK2R受体拮抗剂的敏感度。结论:乳腺组织中NK1R-FL、NK2R共表达,乳腺癌细胞中NK1R-Tr过表达并负反馈调节NK1R-FL和NK2R的表达,NK1R和NK2R受体可能成为乳腺癌治疗的新靶标。
- 周云丽王萌仝颖娜刘晓彬董冬邵洁
- 关键词：乳腺癌拮抗剂
- 重组pEGFP—C2-p100-TSN点突变质粒构建及表达被引量：2
- 2010年
- 目的将6个不同的p100-TSN．Mutants基因片段分别定向连入PEGFP—C2质粒中，使P100-TSN突变蛋白能够与绿色荧光蛋白在COS7细胞中融合表达，从而为进一步研究p100蛋白TSN结构域的功能奠定实验基础。方法利用EcoR I和Xho I双酶切方法从6个pcDNA3．1（＋）-p100-TSN．Mutants重组质粒中分别获得p100-TSN．Mutants的cDNA片段，将其连人pEGFP—C2质粒载体中，再将成功构建的6个pEGFP—C2-p100-TSN．Mutants质粒分别转染COS7细胞中，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果①将重组质粒进行双酶切鉴定可见p100-TSN．Mutants的cDNA片段；②转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论①6个pEGFP—C2-p100-TSN．Mutants重组质粒构建成功；②p100-TSN突变蛋白可与绿色荧光蛋白在COS7细胞中融合表达。
- 高星杰邵洁苏超杨洁
- 关键词：MUTANTS重组质粒
