邱文英
- 作品数：16 被引量：49H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家公益性行业科研专项“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 小反刍兽疫病毒F基因生物信息学分析
- 利用生物信息学软件对小反刍兽疫病毒的F基因进行分析。F基因在麻疹病毒属中是高度保守,可以根据F基因序列的遗传性将PPRV分为4个系。
- 邱文英李刚
- 关键词：小反刍兽疫病毒生物信息学
- 文献传递
- 纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫病毒核酸的研究
- 试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针，一条探针5`端修饰生物素，另一条探针3`端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳...
- 陶春爱邱文英李刚田康乐
- 关键词：小反刍兽疫病毒核酸探针银染
- 文献传递
- 减蛋综合征病毒NE4株全基因组序列测定与分析
- 2010年
- 根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列与GenBank中已登录的相应序列进行同源性分析,并用六邻体蛋白构建进化树.结果表明:NE4株基因组序列全长33214bp,GC含量为43%,与国际标准株AV-127相比,核苷酸序列同源性为99.6%.碱基的插入或缺失主要在非编码区,在100K蛋白编码区距羧基端1/10处插入了1个碱基C,其ORF编码696个氨基酸,而AV-127株100K蛋白编码709个氨基酸,预计其发挥功能的基团在N端.蛋白同源性分析表明,EDSVNE4株主要蛋白与羊腺病毒OAV(Ovine adenovirusD)、牛腺病毒BAV(Bovine adenovi-rusD)和蛇腺病毒SAV(Snake adenovirus)有较高的同源性,而与禽腺病毒Ⅰ群(CELO)的同源性较低,说明NE4株与禽腺病毒Ⅰ群亲缘关系较远,进化树分析也证实了此特性.
- 董春娜李刚邱文英张坤哈小琴
- 关键词：减蛋综合征病毒基因组同源性
- 小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：10
- 2012年
- 为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中抗小反刍兽疫病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释倍数、血清孵育时间等反应条件进行了优化。Western-blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的反应原性。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的小反刍兽疫病毒抗体和牛瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达98.4%。证实,本研究建立的检测血清中抗PPRV抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。
- 邱文英李刚田康乐黄华欣
- 关键词：小反刍兽疫N蛋白间接酶联免疫吸附试验
- 小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA方法的建立
- 目的：为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体。方法：对具有PPRV特异性的N蛋白第1V区域进行扩增，并克隆至原核表达载体pET-32a(+)载体中，用于PPRV N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组...
- 邱文英李刚田康乐黄华欣
- 关键词：小反刍兽疫病毒原核表达重组蛋白疫苗免疫
- 小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：5
- 2012年
- 目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体。方法根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并初步应用于PPRV的检测。结果重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPRV-F经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组F蛋白相对分子质量约59 000,诱导6 h表达量最高,且主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%以上;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,抗体效价高于1∶64 000;间接免疫荧光试验显示,制备的多抗能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。结论原核表达了PPRVF蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为其进一步研究及小反刍兽疫临床快速检测方法的建立奠定了基础。
- 田康乐李刚邱文英程朝飞
- 关键词：小反刍兽疫病毒F蛋白原核细胞基因表达多克隆抗体
- 小反刍兽疫病毒H基因的原核表达与鉴定被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1株的H基因序列,设计上下游引物并添加BamHⅠ酶切位点,以含有小反刍兽疫病毒H基因的Topo-PPRVH质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆于pEASY-T载体中,用BamHⅠ单酶切后将目的片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,核酸序列分析证明,成功构建了PPRVH原核表达质粒pET-32a-H。将pET-32a-H重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳,可见H蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为87ku,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量达到菌体总蛋白的38%,占包涵体蛋白的80%以上。Western blot鉴定表明,所表达的重组蛋白能被抗组氨酸单抗、抗PPRV标准阳性羊血清及抗PPRV疫苗的羊血清所识别,具有良好的免疫原性。
- 李伟李刚邱文英贾凤芹曾妮吴素丽
- 关键词：小反刍兽疫病毒H基因原核表达
- 小反刍兽疫病毒抗体、抗原免疫学检测方法和纳米金核酸检测方法的建立
- 小反刍兽疫是能感染家养及野生小反刍动物的一种传染性疾病。目前,小反刍兽疫呈现蔓延的趋势。2007年我国西藏地区发生小反刍兽疫疫情,这是我国首次有该疾病发生的报道,因此建立灵敏、特异、快速的检测方法对于早期发现小反刍兽疫非...
- 邱文英
- 关键词：小反刍兽疫病毒亚克隆胶体金免疫层析
- 狂犬病病毒N蛋白主要抗原区的表达及SPA-ELISA抗体检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 为有效监测免疫狂犬病疫苗后的抗体水平,以狂犬病病毒N蛋白的主要抗原表位所在区域N1蛋白为包被抗原,建立了SPA-ELISA抗体检测方法。用RT-PCR方法分别扩增出狂犬病病毒Flury LEP株N基因及其N1区域（1 000~1 353 bp）,将二者分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,并将重组的表达载体分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经1 mmol/L IPTG诱导后进行免疫印迹分析。结果表明,重组的RV N和RV N1均以包涵体形式表达。与表达全长RV N相比,RV N1的表达量显著高于前者,且该重组蛋白同样具有良好的反应原性。用纯化的重组RV N1作为诊断抗原建立了检测犬RV抗体的间接ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量是2 mg/L,血清的最佳稀释度为1∶100,Protein A-HRP的稀释度为1∶4 000。用建立的ELISA方法对102份临床血清样品进行检测,与商品化试剂盒相比,二者的符合率为94.1%。试验结果表明基于主要抗原表位所在区域N1蛋白的SPA-ELISA方法可有效用于犬RV抗体水平的检测,为检测RV免疫抗体的ELISA试剂盒的研制奠定了基础。
- 曾妮宫苗苗郭李平邱文英李刚
- 关键词：狂犬病病毒主要抗原区抗体检测
- 猪病毒性免疫抑制病的危害及防控
- 近年来随着中国养猪业的发展,猪病已成为规模化养猪生产中所面临的一大难题,其重要原因在于猪群普遍存在免疫抑制性疾病。免疫抑制是指由于免疫功能系统受到损害而导致动物机体暂时性或永久性免疫应答功能不全以及对疾病的高度易感。猪病...
- 李刚史利军贾凤芹吴翠娟邱文英曾妮李伟
- 关键词：PRRSV抗原提呈细胞病毒性免疫抑制病PCV免疫抑制性疾病猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 文献传递
