田康乐
- 作品数：11 被引量：31H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家公益性行业科研专项“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫病毒核酸的研究
- 试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针，一条探针5`端修饰生物素，另一条探针3`端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳...
- 陶春爱邱文英李刚田康乐
- 关键词：小反刍兽疫病毒核酸探针银染
- 文献传递
- 小反刍兽疫F蛋白的表达及间接ELISA方法的建立
- 本实验将PPRV疫苗株Nigeria75/1的F基因的抗原表位集中区约1077bp进行了克隆和表达，对重组蛋白进行了检测与分析，并建立了间接ELISA方法，为小反刍兽疫基因免疫和本实验室研制基因工程疫苗的筛选提供了有力的...
- 田康乐李刚
- 关键词：小反刍兽疫病毒抗原表位重组蛋白间接ELISA法
- 基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法的建立及其初步应用
- 目的：原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M)，并以此作为包被抗原建立问接ELIsA检测方法，与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELIsA方法进行比较。方法：根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP—Flury...
- 程朝飞宫苗苗王勇田康乐赵占中李刚
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达
- 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆表达及单克隆抗体的制备
- 小反刍兽疫（Peste des Petits Ruminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（Peste des Petits RuminantsVirus，PPRV）引起的一种外来动物疫病，其主要感染山羊、绵羊等小反刍...
- 田康乐
- 关键词：小反刍兽疫病毒F基因杆状病毒单克隆抗体
- 文献传递
- 纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫病毒核酸的研究被引量：9
- 2012年
- 试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳米金颗粒上。靶核酸两端分别与两条探针结合,形成"生物素化探针-靶核酸-纳米金探针"复合物,该复合物通过生物素-亲和素系统,固定在固相载体上,最后银染放大信号。通过肉眼观察法、光镜观察法、分光光度法分析银染灰度,从而间接测定靶核酸的量。初步检测PPRV核酸最低浓度达10fmol/L,所需时间约为1.5h。该方法灵敏度高、操作简单,为临床检测小反刍兽疫病毒核酸提供实验数据和技术支持。
- 陶春爱邱文英李刚田康乐
- 关键词：PPRV核酸探针银染
- 小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：5
- 2012年
- 目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体。方法根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并初步应用于PPRV的检测。结果重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPRV-F经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组F蛋白相对分子质量约59 000,诱导6 h表达量最高,且主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%以上;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,抗体效价高于1∶64 000;间接免疫荧光试验显示,制备的多抗能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。结论原核表达了PPRVF蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为其进一步研究及小反刍兽疫临床快速检测方法的建立奠定了基础。
- 田康乐李刚邱文英程朝飞
- 关键词：小反刍兽疫病毒F蛋白原核细胞基因表达多克隆抗体
- 小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2012年
- 为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中抗小反刍兽疫病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释倍数、血清孵育时间等反应条件进行了优化。Western-blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的反应原性。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的小反刍兽疫病毒抗体和牛瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达98.4%。证实,本研究建立的检测血清中抗PPRV抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。
- 邱文英李刚田康乐黄华欣
- 关键词：小反刍兽疫N蛋白间接酶联免疫吸附试验
- 小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA方法的建立
- 目的：为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体。方法：对具有PPRV特异性的N蛋白第1V区域进行扩增，并克隆至原核表达载体pET-32a(+)载体中，用于PPRV N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组...
- 邱文英李刚田康乐黄华欣
- 关键词：小反刍兽疫病毒原核表达重组蛋白疫苗免疫
- 基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究
- 2012年
- 原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点,经RT-PCR扩增得到目的基因,连接pCR 2.1载体,构建重组质粒pCR-RV-M,重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶切,酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-RV-M。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大,且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot表明融合蛋白具有良好的反应原性,使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清,同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P(RV-His-P)建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清。结果表明:与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比,使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率,能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。
- 程朝飞宫苗苗田康乐王勇赵占中史利军李刚
- 关键词：狂犬病病毒间接ELISA
- 小反刍兽疫F蛋白的表达及间接ELISA方法的建立
- 引言/目的小反刍兽疫是小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病,是FAO/OIE法定上报动物传染病。在病毒感染过程中,新合成的融合蛋白分子使细胞间发生融合。F蛋白是一种保护性抗原,可诱导产生中和抗体。...
- 田康乐李刚
