- 钝齿棒杆菌ArgR的凝胶阻滞实验及单增李斯特菌actA、inlB、p60表达载体的构建
- L-精氨酸是一种半必需氨基酸,是人体多种重要机体组织代谢物的中间体,在医药和食品工业中具有十分广泛的用途。钝齿棒杆菌/(Corynebacterium crenatum/)AS1.542是我国研究者从土壤中分离到的一株革...
- 袁永
- 关键词:L-精氨酸钝齿棒杆菌
- 文献传递
- 钝齿棒杆菌ArgR蛋白的表达、纯化及其多聚体的形成
- 2011年
- 通过PCR技术从钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.542基因组中扩增得到长度为516bp的argR基因,将其连接到原核表达载体pET22b(+),并转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌株BL21(DE3)/pET22b-argR,以异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)在33℃诱导8h实现高效可溶性表达,获得了一个分子质量为20kD的融合蛋白ArgR。用纯化后的目的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价高达1:160000。Western blot分析结果表明,L-精氨酸介导重组蛋白形成的多聚体,可与自制的鼠抗ArgR多克隆抗体进行特异性反应,与预期结果一致,表明ArgR通过与精氨酸共孵育形成了多聚体,该结果有助于采用凝胶阻滞方法对ArgR蛋白与钝齿棒杆菌精氨酸生物合成途径中各操作子的结合情况进行进一步研究。
- 袁永焦海涛徐峰彭福中熊勇华陈雪岚
- 关键词:钝齿棒杆菌多聚体
- 钝齿棒杆菌argR基因克隆、表达及其重组菌发酵产精氨酸研究被引量:3
- 2011年
- 钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS.M7是筛选获得的一株高产精氨酸生产菌株。ArgR是精氨酸合成过程中的一种调控蛋白。为进一步验证其在钝齿棒杆菌中对精氨酸合成量的影响,利用特异性引物,分别扩增标准菌C.creantum AS 1.542和诱变菌C.creantum AS.M7的argR全长基因,测序后比较二者的差异;结果表明标准菌argR基因ORF全长516 bp,编码一个含172个氨基酸残基的蛋白;而诱变菌argR基因的109位碱基由C替换为T,导致ArgR蛋白在钝齿诱变菌中表达被提前终止。同时,将来源于标准菌的argR基因连接到穿梭表达载体pXMJ19中,电击转化至诱变菌C.crenatum AS.M7得到重组菌株,用摇瓶发酵的方法观测重组菌产精氨酸量的变化。SDS-PAGE和Western blot分析证明标准菌的argR基因在诱变菌中得到了表达。对重组诱变菌产精氨酸量进行了测定,结果显示:产精氨酸能力由原来7.8 mg/ml下降至2.5mg/ml,下降了约67.9%。
- 焦海涛袁永徐锋杨伟熊勇华陈雪岚
- 关键词:L-精氨酸钝齿棒杆菌