焦海涛
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：江西师范大学生命科学学院功能有机小分子教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 钝齿棒杆菌argR基因缺失株构建及其缺失对精氨酸生物合成途径相关基因转录水平的影响被引量：5
- 2013年
- 【目的】钝齿棒杆菌AS 1.542中argR基因编码的蛋白ArgR在精氨酸生物合成途径中扮演负调控的角色,但其对相关基因在转录水平的影响还未见报道。因此,本课题组构建了钝齿棒杆菌argR基因缺失株,并在转录水平上比较野生株与缺失株精氨酸生物合成途径相关基因的变化。【方法】采用无痕敲除的方法构建了钝齿棒杆菌argR基因缺失株,并采用荧光定量PCR方法分析缺失株和野生株精氨酸生物合成途径相关基因在转录水平的变化。【结果】利用pK18mobsacB质粒中蔗糖致死基因sacB反向筛选标记及PCR方法成功筛选到钝齿棒杆菌argR基因缺失株;荧光定量PCR结果表明,argR基因缺失株精氨酸生物合成途径中相关基因在转录水平获得大量提高,平均约上调162.13倍。【结论】钝齿棒杆菌精氨酸生物合成途径的相关基因受负调控蛋白ArgR的显著调控,但其基因的敲除并没有引起精氨酸产量发生明显的变化。
- 陈雪岚汤立焦海涛徐峰熊勇华
- 关键词：钝齿棒杆菌精氨酸荧光定量PCR
- 钝齿棒杆菌FarR对精氨酸生物合成基因簇转录水平的影响及其与ArgR的关系被引量：2
- 2014年
- 【目的】FarR蛋白可参与棒杆菌精氨酸生物合成途径中相关基因的调控,但具体机制不清楚。本研究通过比较钝齿棒杆菌farR、argR单敲除株和farR与argR双敲除株Arg生物合成途径中相关基因转录水平的变化来揭示FarR蛋白功能及其与ArgR的内在关联性。【方法】采用无痕敲除方法构建了钝齿棒杆菌farR单敲除株和farR与argR双敲除株;采用荧光定量PCR方法分析了farR、argR敲除及其组合敲除后精氨酸生物合成途径相关基因在转录水平的变化。【结果】在ArgR蛋白缺失的情况下,FarR可能发挥正调控功能;在ArgR存在时,敲除farR,目标基因的转录水平改变存在不一致性,表现出上调、下调或无影响。【结论】钝齿棒杆菌中FarR和ArgR在精氨酸生物合成途径的调控中存在关联性。
- 邵辉峰张斌王吕焦海涛汤立陈雪岚
- 关键词：钝齿棒杆菌精氨酸荧光定量PCR
- 钝齿棒杆菌ArgR蛋白的表达、纯化及其多聚体的形成
- 2011年
- 通过PCR技术从钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.542基因组中扩增得到长度为516bp的argR基因,将其连接到原核表达载体pET22b(+),并转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌株BL21(DE3)/pET22b-argR,以异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)在33℃诱导8h实现高效可溶性表达,获得了一个分子质量为20kD的融合蛋白ArgR。用纯化后的目的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价高达1:160000。Western blot分析结果表明,L-精氨酸介导重组蛋白形成的多聚体,可与自制的鼠抗ArgR多克隆抗体进行特异性反应,与预期结果一致,表明ArgR通过与精氨酸共孵育形成了多聚体,该结果有助于采用凝胶阻滞方法对ArgR蛋白与钝齿棒杆菌精氨酸生物合成途径中各操作子的结合情况进行进一步研究。
- 袁永焦海涛徐峰彭福中熊勇华陈雪岚
- 关键词：钝齿棒杆菌多聚体
- 钝齿棒杆菌argR基因克隆、表达及其重组菌发酵产精氨酸研究被引量：3
- 2011年
- 钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS.M7是筛选获得的一株高产精氨酸生产菌株。ArgR是精氨酸合成过程中的一种调控蛋白。为进一步验证其在钝齿棒杆菌中对精氨酸合成量的影响,利用特异性引物,分别扩增标准菌C.creantum AS 1.542和诱变菌C.creantum AS.M7的argR全长基因,测序后比较二者的差异;结果表明标准菌argR基因ORF全长516 bp,编码一个含172个氨基酸残基的蛋白;而诱变菌argR基因的109位碱基由C替换为T,导致ArgR蛋白在钝齿诱变菌中表达被提前终止。同时,将来源于标准菌的argR基因连接到穿梭表达载体pXMJ19中,电击转化至诱变菌C.crenatum AS.M7得到重组菌株,用摇瓶发酵的方法观测重组菌产精氨酸量的变化。SDS-PAGE和Western blot分析证明标准菌的argR基因在诱变菌中得到了表达。对重组诱变菌产精氨酸量进行了测定,结果显示:产精氨酸能力由原来7.8 mg/ml下降至2.5mg/ml,下降了约67.9%。
- 焦海涛袁永徐锋杨伟熊勇华陈雪岚
- 关键词：L-精氨酸钝齿棒杆菌
- 氯胺酮噬菌体模拟表位酶联免疫吸附法的建立
- 目的建立噬菌体模拟表位间接竞争ELISA检测氯胺酮的无毒体系。方法以抗氯胺酮单克隆抗体为配体,在噬菌体七肽库中淘选氯胺酮的模拟表位。经四轮淘选后,选择了一株阳性克隆。通过测序,获知DNA序列后合成了相应的P2七肽链;通过...
- 焦海涛陈雪岚
