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荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗方法的建立: 猪瘟是危害养猪业的重要传染病,猪瘟主要依靠猪瘟兔化弱毒疫苗预防,目前各厂家不同批次弱毒苗的质量效果,主要通过注射疫苗后,检测免疫抗体来验证,耗时费事.本研究设计合成了两对引物(一对质粒标准品引物和一对荧光定量PCR引物)...; 范斌马志亮刘岳杨洁柴俊刘旭川张以芳; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果荧光定量检测; 文献传递

荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法，属疫苗质量检测技术领域。该方法包括猪蓝耳病病弱毒疫苗病毒特异性引物设计、RNA提取、cDNA制备、实时荧光定量RT-PCR扩增、标准质粒构建及检测标准...; 张以芳范斌马志亮刘旭川邹丰才柴俊刘岳柳桐; 文献传递

荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗方法的建立: 猪瘟是危害养猪业的重要传染病,猪瘟主要依靠猪瘟兔化弱毒疫苗预防,目前各厂家不同批次弱毒苗的质量效果,主要通过注射疫苗后,检测免疫抗体来验证,耗时费事。本研究设计合成了两对引物(一对质粒标准品引物和一对荧光定量PCR引物)...; 范斌马志亮刘岳杨洁柴俊刘旭川张以芳; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR; 文献传递

荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗方法的建立: 猪瘟是危害养猪业的重要传染病,猪瘟主要依靠猪瘟兔化弱毒疫苗预防,目前各厂家不同批次弱毒苗的质量效果,主要通过注射疫苗后,检测免疫抗体来验证,耗时费事.; 范斌马志亮刘岳杨洁柴俊刘旭川张以芳

荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法，属疫苗质量检测技术领域。该方法包括猪蓝耳病病弱毒疫苗病毒特异性引物设计、RNA提取、cDNA制备、实时荧光定量RT-PCR扩增、标准质粒构建及检测标准...; 张以芳范斌马志亮刘旭川邹丰才柴俊刘岳柳桐; 文献传递

一种荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的方法: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的方法, 属疫苗质量监测技术领域。本发明方法包括特异性引物及Taqman荧光探针的设计、RNA提取、cDNA制备、标准质粒构建、Taqman荧光定量PCR检测...; 张以芳马志亮范斌柴俊孙亭亭邹丰才刘岳柳桐杨洁; 文献传递

猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5: 2014年; 为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测的敏感度达1.20×105拷贝/mL;对猪繁殖与呼吸综合征、猪乙型脑炎、仔猪副伤寒和猪伪狂犬病4种活疫苗基因组扩增结果均为阴性;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.29%~0.39%,批间变异系数为0.32%~0.61%。应用此方法对6个不同厂家生产的7种猪瘟兔化弱毒活疫苗中病毒含量进行了检测,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量存在较大差异。结果表明,建立的猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR方法能特异地检测疫苗病毒含量,可用于初步评价猪瘟兔化弱毒疫苗抗原含量。; 范斌许文花韩建强马志亮胡骑信爱国张以芳; 关键词：猪瘟兔化弱毒实时荧光定量RT-PCR 病毒含量

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗中病毒含量荧光定量PCR测定方法的建立及初步应用被引量：4: 2014年; 为建立快速、敏感、特异的评价猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）活疫苗中病毒含量的方法，根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因序列设计合成了标准品引物和定量引物，RT—PCR扩增PRRSV基因片段并连接到pMD19-T载体上，构建标准品质粒pMD19-TPRRSV。采用SYBRGreenI染料法进行荧光定量PCR检测，分析标准曲线并进行特异性、稳定性、重复性试验。结果显示，该方法检测病毒含量为7．43×10^0～7．43×10^8拷贝／μL，标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数高（R2=0．9989），引物特异性强。应用该方法对6个厂家PRRS活疫苗中的病毒含量进行测定，发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量差异较大，最高差异可达47．9倍。本试验建立的检测PRRS活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法可用于疫苗生产过程中及免疫动物前疫苗质量的评价。; 马志亮孙亭亭杨洁范斌刘旭川张以芳; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征活疫苗荧光定量PCR

荧光定量PCR评价猪繁殖与呼吸障碍综合征活疫苗中病毒含量方法的建立及初步应用: 为了建立快速、敏感、特异的评价猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)活疫苗中病毒含量的方法,根据GeneBank中PRRSV基因序列设计合成了标准品引物和定量引物,RT-PCR扩增PRRSV基因片段并连接到pMD18-T载体...; 马志亮孙亭亭杨洁范斌刘旭川张以芳; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征活疫苗病毒含量荧光定量PCR

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范斌