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童海燕: 作品数：17 被引量：14H指数：3; 供职机构：哈尔滨医科大学附属第一医院更多>>; 发文基金：江苏省社会发展科技计划南通市应用研究计划项目黑龙江省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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马来丝虫肌球蛋白基因序列及编码产物预测被引量：1: 2009年; 目的克隆周期型马来丝虫肌球蛋白（BmMyosin）基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测。方法依据公布的BmMyosin基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR（RT-PCR）扩增目的编码基因。扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌（E.coli）DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmMyosin,经测序验证,并进行同源性比较。应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测。结果RT-PCR扩增出一条约1 292 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为98.45%。经表位预测分析,BmMyosin的B细胞表位可能在287-300位、339-350位和416-422位氨基酸区域。结论成功构建了周期型马来丝虫肌球蛋白重组质粒pGEM-T克隆载体,对其编码产物进行B细胞表位预测。为蛋白质特性分析及免疫学研究提供基础依据。; 谢东方方政童海燕徐邦生黄为群沈勤; 关键词：周期型马来丝虫肌球蛋白基因克隆 B细胞表位

周期型马来丝虫CPI基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究: 目的：构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)基因真核表达载体poDNA3．1-BmCPI，并观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法：以周期型马来丝虫总RNA为模板，RT-PCR方法扩增出目的基因片段。与p...; 方政张赛楠陆施娟童海燕方浩徐邦生; 关键词：周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂真核表达载体细胞免疫应答

周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究被引量：2: 2009年; 目的构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶（BmGAPDH）真核表达载体pcDNA3．1-BmGAPDH，并观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法以周期型马来丝虫总RNA为模板，RT—PCR方法扩增目的基因片段。与pGEM—TEasy克隆载体连接，筛选出阳性克隆，经PCR和双酶切鉴定后，亚克隆至真核表达质粒pcDNA3．1，构建pcDNA3．1-BmGAPDH表达载体，将纯化的pcDNA3．1-BmGAPDH和CpG经后腿胫前肌免疫BALB／c小鼠，并设PBS对照组及空质粒对照组，共免疫3次，每次免疫间隔2周。用RTPCR方法检测肌肉组织内目的基因；用噻唑蓝（MTT）法、ELISA方法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4水平。应用SPSS统计学软件进行样本均数的t检验。结果成功构建了pcDNA3．1-BmGAPDH真核表达载体，基因片段全长为1020bp，DNA序列分析与基因库已知基因序列同源性为99％。该真核表达载体免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因重组质粒组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数显著高于PBS对照组及空质粒对照组，淋巴细胞刺激增殖指数分别为1．398、1．006和1．017（P〈0．05）。重组质粒组IFN-γ、IL-4细胞因子水平均高于PBS对照组及空质粒对照组，分别为163．905、58．589、51．317ng／L和107．906、27．111、34．627ng／L（P〈0．05）。免疫佐剂CpG与疫苗同时注射可增强机体的免疫应答，表现为IFN-γ水平和免疫4周后淋巴细胞刺激增殖指数显著上升。结论pcDNA3．1Bm GAPDH真核表达载体能在小鼠体内表达并可诱导相关的细胞免疫应答。; 童海燕方政谢东方黄为群方浩徐邦生; 关键词：甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因表达 DNA

马来丝虫肌球蛋白部分编码基因Bm-M55的克隆与真核表达被引量：2: 2008年; 根据马来丝虫肌球蛋白部分编码基因(Bm-M55)序列设计引物,以其微丝蚴总RNA为模板,反转录PCR扩增目的基因。用TA克隆方法将目的基因克隆至载体pGEM-TEasy中,经PCR和双酶切鉴定并测序后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bm-M55,转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)对获得重组蛋白Bm-M55进行分析和鉴定。RT-PCR鉴定结果显示,转染的COS-7细胞表达了Bm-M55基因,根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank(登录号为AAA27858)中的一致,重组蛋白Bm-M55相对分子质量(Mr)约为55000。; 谢东方方政黄为群沈勤童海燕徐邦生; 关键词：马来丝虫肌球蛋白真核表达载体 COS-7细胞

周期型马来丝虫复合多价蛋白疫苗的制备方法: 本发明公开了一种周期型马来丝虫复合多价蛋白疫苗的制备方法，包括周期型马来丝虫pcDNA3.1（+）-BmCPI/BmGAPDH重组质粒的抽提、基因转染、阳性克隆的筛选、阳性克隆的提取和扩大培养、阳性克隆的冻存、检测阳性克...; 方政王慧方浩陆施娟徐倩胡迎青童海燕徐邦生; 文献传递

马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测被引量：3: 2009年; 根据GenBank中马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(BmG3PD基因)序列设计引物,以马来丝虫mRNA为模板,RT-PCR扩增BmG3PD基因,将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆。经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及PCR鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmG3PD,经序列分析及同源性比较,以及对其编码产物进行B细胞表位预测,结果表明PCR扩增的特异性条带为1020bp,与预期相符,与GenBank已知基因序列同源性为99%。编码产物B细胞表位预测,氨基酸区域可能在22～36、242～255、303～318和326～336位。; 谢东方方政童海燕徐邦生黄为群方浩沈勤; 关键词：马来丝虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶基因克隆 B细胞表位

周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因的克隆与真核表达被引量：4: 2008年; 目的克隆和表达周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶（BmGAPDH）的编码基因。方法依据公布的BmGAPDH基因序列设计引物，以周期型马来丝虫总RNA为模板，反转录PCR（RT-PCR）扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后，克隆至载体pGEM-TEasy中，经PCR和双酶切鉴定后，亚克隆至真核表达质粒pcDNA3．1（＋），构建真核表达载体pcDNA3．1（＋）／BmGAPDH，转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）对获得重组蛋白（rBmGAPDH）进行分析和鉴定。结果转染的COS-7细胞高水平表达BmGAPDH的mRNA，根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的结果一致。SDS-PAGE分析显示重组蛋白rBmGAPDH相对分子质量（Mr）约为43000。结论成功进行了BmGAPDH编码基因的克隆和真核表达。; 谢东方方政黄为群沈勤童海燕徐邦生; 关键词：周期型马来丝虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶真核表达载体 COS-7细胞

单纯疱疹病毒1型US11免疫逃避机制的研究进展被引量：2: 2016年; 单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一种全世界流行的疱疹性疾病病原体,HSV-1感染宿主后潜伏期长,且极难根除。普通病毒感染宿主时机体会产生一系列的抗病毒防御反应,HSV-1具有一种天然RNA外壳蛋白——单纯疱疹病毒US11蛋白,可对抗机体先天的免疫反应,抑制抗病毒反应,达到抑制病毒感染细胞的凋亡利于病毒复制的目的,本文将对目前HSV-1的病毒特性及其皮层蛋白US11逃避机体免疫机制的最新进展做一综述。; 童海燕李国毅汤颖; 关键词：单纯疱疹病毒干扰素

周期型马来丝虫CPI基因克隆和序列分析及编码产物B细胞表位预测被引量：3: 2010年; 目的克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（BmCPI）基因,并通过序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测,为进一步研究该基因的功能奠定基础.方法从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增BmCPI基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌（E.coli）DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-TBmCPI,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RTPCR扩增出一条约621 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%.其编码产物经表位预测分析,B细胞表位可能在23～32、50～79、117～126位氨基酸区域.结论成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组质粒pGEM-T克隆载体,并进行了序列测定及编码产物的B细胞表位预测,达到预期目标,为进一步研究该基因的功能提供条件.; 童海燕方政张赛楠徐邦生方浩黄为群谢东方石佑琴; 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂丝虫病 B细胞表位

Us11的表达及其多克隆抗体的制备被引量：2: 2016年; 已有研究发现单纯疱疹病毒1(HSV-1)感染后,病毒的Us11蛋白在拮抗宿主先天性免疫反应中发挥重要作用。通过合成HSV-1的Us11基因,克隆表达制备针对Us11的多克隆抗体,为研究Us11的功能以及与宿主蛋白的相互作用提供的实验基础。通过人工合成Us11基因并以其为模板扩增,回收Us11基因片段,克隆至原核和真核表达载体;诱导表达Us11蛋白并纯化,制备Us11兔源多克隆抗体;转染质粒至293T细胞,对细胞表达的蛋白进行间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(WB)检测。成功构建p Cold-Us11和p FLAG-Us11质粒,实现可溶性Us11蛋白表达,纯化的Us11蛋白免疫动物获得针对Us11的多克隆抗体。IFA和Western blot结果显示,制备的抗血清能特异性检测到p FLAG-Us11转染293T细胞表达的Us11蛋白。; 童海燕李国毅汤颖; 关键词：原核表达真核表达多克隆抗体

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