黄为群
- 作品数：24 被引量：25H指数：3
- 供职机构：南通大学医学院更多>>
- 发文基金：江苏省教育厅自然科学基金江苏省社会发展科技计划江苏省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 宿主对周期型马来丝虫微丝蚴细胞毒作用的体内研究被引量：2
- 2000年
- 目的以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，研究宿主体内清除虫体、减轻虫体负荷、控制丝虫感染的免疫效应机制。方法提取纯净的周期型马来丝虫微丝蚴（ｍｆ）装入微孔实验盒，然后植入 ＳＤ大鼠体内，在不同时间观察机体免疫系统对ｍｆ的杀伤作用。结果含ｍｆ的３．０μｍ微孔盒内，迁入的细胞量随植入时间延长而逐渐增多。迁入的细胞种类及百分率，各实验组之间无明显差异。免疫血清组ｍｆ被效应细胞粘附、杀伤率均明显高于正常血清组。免疫血清用抗ＩｇＧ免疫球蛋白处理后，粘附细胞虫体及虫体死亡率都大大下降。 ３．０μｍ微孔盒内大量效应细胞粘附于虫体表面。扫描电镜下，观察到效应细胞粘附的虫体表面出现坏死、剥脱。结论ｍｆ对宿主效应细胞有一定的趋化作用。宿主体内存在着抗体介导的细胞毒作用，参与细胞毒作用的抗体主要是ＩｇＧ。其主要的效应细胞是中性粒细胞、巨噬细胞和嗜酸粒细胞。
- 方政保和珍黄为群李荣林琳宣建明张天一
- 关键词：周期型马来丝虫微丝蚴细胞毒宿主
- 马来丝虫肌球蛋白部分编码基因Bm-M55的克隆与真核表达被引量：2
- 2008年
- 根据马来丝虫肌球蛋白部分编码基因(Bm-M55)序列设计引物,以其微丝蚴总RNA为模板,反转录PCR扩增目的基因。用TA克隆方法将目的基因克隆至载体pGEM-TEasy中,经PCR和双酶切鉴定并测序后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bm-M55,转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)对获得重组蛋白Bm-M55进行分析和鉴定。RT-PCR鉴定结果显示,转染的COS-7细胞表达了Bm-M55基因,根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank(登录号为AAA27858)中的一致,重组蛋白Bm-M55相对分子质量(Mr)约为55000。
- 谢东方方政黄为群沈勤童海燕徐邦生
- 关键词：马来丝虫肌球蛋白真核表达载体COS-7细胞
- 周期型马来丝虫副肌球蛋白基因克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测被引量：3
- 2007年
- 目的克隆周期型马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测。方法从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,RT-PCR法体外扩增BmPmy基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化E.coli DH5a,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-T-BmPmy,经测序验证,并进行同源性比较。应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测。结果RT-PCR扩增出一条约2640bp的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与基因库已知的基因序列同源性为99%。经表位预测分析,BmPmy的B细胞表位可能在54～66位、144～152位、770～780位和834～845位氨基酸区域。结论成功构建了BmPmy重组质粒pGEM-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。
- 陈阳方政姜声扬黄为群谢东方吴建军石佑琴
- 关键词：原肌球蛋白
- 周期型马来丝虫CPI基因克隆和序列分析及编码产物B细胞表位预测被引量：3
- 2010年
- 目的 克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（BmCPI）基因,并通过序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测,为进一步研究该基因的功能奠定基础.方法 从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增BmCPI基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌（E.coli）DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-TBmCPI,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RTPCR扩增出一条约621 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%.其编码产物经表位预测分析,B细胞表位可能在23～32、50～79、117～126位氨基酸区域.结论 成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组质粒pGEM-T克隆载体,并进行了序列测定及编码产物的B细胞表位预测,达到预期目标,为进一步研究该基因的功能提供条件.
- 童海燕方政张赛楠徐邦生方浩黄为群谢东方石佑琴
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂丝虫病B细胞表位
- 马来丝虫肌球蛋白基因序列及编码产物预测被引量：1
- 2009年
- 目的克隆周期型马来丝虫肌球蛋白（BmMyosin）基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测。方法依据公布的BmMyosin基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR（RT-PCR）扩增目的编码基因。扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌（E.coli）DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmMyosin,经测序验证,并进行同源性比较。应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测。结果RT-PCR扩增出一条约1 292 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为98.45%。经表位预测分析,BmMyosin的B细胞表位可能在287-300位、339-350位和416-422位氨基酸区域。结论成功构建了周期型马来丝虫肌球蛋白重组质粒pGEM-T克隆载体,对其编码产物进行B细胞表位预测。为蛋白质特性分析及免疫学研究提供基础依据。
- 谢东方方政童海燕徐邦生黄为群沈勤
- 关键词：周期型马来丝虫肌球蛋白基因克隆B细胞表位
- 常见吸虫微量金属元素测定被引量：1
- 1995年
- 本研究用原子吸收光谱法对常见吸虫日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫和布氏姜片吸虫四种成虫及日本血吸虫卵进行微量金属元素测定，测出成虫和虫卵含有镁、钙、铜、铁、锌、锰、铅等元素，血吸虫卵还含有镉元素，四种吸虫成虫未检出镉、铬、镍、银元素。
- 黄为群江晓蕾
- 关键词：吸虫微量元素金属元素
- 周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究被引量：2
- 2009年
- 目的构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶（BmGAPDH）真核表达载体pcDNA3．1-BmGAPDH，并观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法以周期型马来丝虫总RNA为模板，RT—PCR方法扩增目的基因片段。与pGEM—TEasy克隆载体连接，筛选出阳性克隆，经PCR和双酶切鉴定后，亚克隆至真核表达质粒pcDNA3．1，构建pcDNA3．1-BmGAPDH表达载体，将纯化的pcDNA3．1-BmGAPDH和CpG经后腿胫前肌免疫BALB／c小鼠，并设PBS对照组及空质粒对照组，共免疫3次，每次免疫间隔2周。用RTPCR方法检测肌肉组织内目的基因；用噻唑蓝（MTT）法、ELISA方法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4水平。应用SPSS统计学软件进行样本均数的t检验。结果成功构建了pcDNA3．1-BmGAPDH真核表达载体，基因片段全长为1020bp，DNA序列分析与基因库已知基因序列同源性为99％。该真核表达载体免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因重组质粒组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数显著高于PBS对照组及空质粒对照组，淋巴细胞刺激增殖指数分别为1．398、1．006和1．017（P〈0．05）。重组质粒组IFN-γ、IL-4细胞因子水平均高于PBS对照组及空质粒对照组，分别为163．905、58．589、51．317ng／L和107．906、27．111、34．627ng／L（P〈0．05）。免疫佐剂CpG与疫苗同时注射可增强机体的免疫应答，表现为IFN-γ水平和免疫4周后淋巴细胞刺激增殖指数显著上升。结论pcDNA3．1Bm GAPDH真核表达载体能在小鼠体内表达并可诱导相关的细胞免疫应答。
- 童海燕方政谢东方黄为群方浩徐邦生
- 关键词：甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因表达DNA
- 细胞毒作用对周期型马来丝虫微丝蚴化学元素含量的影响
- 本文通过应用原子吸收光谱分析对感染前后周期型马来丝虫微丝虫幼化学元素含量进行检测分析,研究了细胞毒作用对丝虫虫体化学元素含量的影响.
- 方政史玉坤黄为群季莘李荣
- 关键词：丝虫病细胞毒作用马来丝虫微丝蚴
- 文献传递
- 周期型马来丝虫HSP70基因原核表达载体的构建及表达产物的分析被引量：2
- 2006年
- 目的 在大肠埃希菌宿主系统中表达周期型马来丝虫热休克蛋白70（HSP70）基因，并对表达产物进行SDS—PAGE分析。方法以重组质粒pGEM—T—HSP70为模板，根据报道的HSP70基因序列设计合成一对引物，用PCR法扩增HSP70基因（包括完整开放读码框架片段及其上下游序列共长2198bp），PCR产物定向插入原核表达载体pGEX-4T-3中，构建的重组质粒pGEX-4T-3-HSP70经双酶切鉴定。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），用IPTG诱导GST．Tag融合蛋白的表达。经SDS—PAGE分析并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平。结果重组表达质粒pGEx-4lT-3-HSP70全长约7200bp，经双酶切后应得到长度为4968bp的载体和2198bp的目的基因2个片段，1％琼脂糖凝胶电泳显示结果同预期完全相符。HSP70相对分子质量（Mr）为70×10^3，质粒pGEX-4T-3的融合部分（GST．Tag）表达产物的胁约为26×103，将重组质粒转化BL-21（DE3）菌。经IPTG诱导表达，菌体蛋白的SDS—PAGE图谱显示，诱导组出现特异性蛋白表达条带，其Mr约100×10^3，与预计大小相同。目的蛋白占菌体总蛋白的12％左右。结论 成功地构建了重组原核表达载体pGEX一4T一3-HSP70：周期型马来丝虫HSP70基因可在大肠埃希菌中稳定表达，为制备和纯化表达蛋白以及丝虫病疫苗的进一步研究打下基础。
- 方政吴建军陈阳黄为群姜声扬石佑琴
- 关键词：周期型马来丝虫热休克蛋白质70基因重组基因表达
- 恶性疟原虫FCC1/HN株CSP抗原细胞免疫应答IL-2和IFN-γ的体外诱生分析被引量：1
- 2000年
- 本实验利用恶性疟原虫FCC1／HN株CSP抗原基因在真核细胞（HeLa）中高效表达，将纯化的表达蛋白作为候选疫苗免疫小鼠，并通过体外诱生检测小鼠脾细胞白介素2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）水平。结果显示经疫苗免疫后的BALB／C小鼠脾细胞体外经特异性刺激后产生的IL-2和IFN-γ水平有显著提高。与我们前期研究结果比较，表明对该疫苗特异性的IL-2、IFN-γ的产生与淋巴细胞增殖以及NK细胞活性增高有明显的相关性；该疫苗对T细胞有一定的刺激能力，可诱导小鼠产生较强的细胞免疫反应。
- 方政刘彦文黄为群季莘史玉坤余新炳
- 关键词：IL-2IFN-Γ
