目的心房颤动（房颤）是最为常见的快速性心律失常之一。钾通道相关蛋白2（K^＋ channel interacting protein 2，KChIP2）是心肌细胞瞬时外向钾通道的重要辅助亚单位，在Ito发挥正常功能中起着重要的作用。报告采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术通过对房颤时KChIP2和Kv4．3基因mRNA水平进行定量研究，探讨KChIP2在房颤中的作用和对于瞬时外向钾通道的可能调控机制。方法（1）30例风湿性心脏病患者分为两组：窦性心律组（窦律组）13例，持续性房颤组（房颤组）17例，取其常规切除的右心耳组织作为研究对象；（2）提取心房肌组织总RNA，通过RT-PCR和TA克隆技术构建含有目的基因片段的质粒标准品；（3）以GAPDH为内参照基因，采用SYBR Green Ⅰ法实时荧光定量PCR技术检测持续性房颤和窦律患者KChIP2和Kv4．3基因mRNA水平。结果（1）标准曲线和熔解曲线：标准曲线线性关系良好，相关系数R^2〉0．99。熔解曲线呈明显单峰状，退火温度与预测值基本一致；（2）窦律组和房颤组KChIP2／GAPDH比值分别为0．2200±0．0388、0．1468±0．0452，房颤组KChIP2基因mRNA水平低于窦律组，P〈0．01；窦律组和房颤组Kv4．3／GAPDH比值分别为0．5257±0．1427、0．3946±0．1826，房颤组Kv4．3基因mRNA水平低于窦律组，P〈0．05。结论与窦律患者相比，房颤患者KChIP2基因和Kv4．3基因明显下调，KChIP2和Kv4．3基因下调是房颤时Ito电流下调的分子基础。
目的检测人心房肌KChIP2和SK2基因表达,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础。方法提取人心房肌组织总RNA,采用RT-PCR方法获取KChIP2、SK2、GAPDH、β-actin目的片段,与pMD-18Tvector连接成重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α中,通过PCR和测序鉴定。提取含目的基因的质粒作为标准品。采用Taqman探针法与SYBR Green I法分别检测人心房肌SK2与KChIP2基因表达和构建标准曲线。结果人心房肌存在KChIP2和SK2基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与Pubmed数据库完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2>0.99。结论成功检测人心房肌KChIP2和SK2基因表达,构建的质粒标准品能用于后续实验。
