王雷
- 作品数：11 被引量：33H指数：3
- 供职机构：解放军军需大学军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：军队医学科研项目军队医药卫生科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 犬腺病毒、犬细小病毒联合PCR方法的建立与应用被引量：13
- 2003年
- 根据GenBank报道的犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)序列,设计两对联合PCR引物,其中一对为CAV-1和CAV-2通用引物,另一对为CPV引物。在建立单项PCR基础上,通过优化Mg2+离子浓度和循环参数等反应条件建立联合PCR,确定联合PCR条件为:96℃180s,96℃30s,56℃30s,72℃80s,30个循环。联合PCR结果显示:CAV-1扩增片段大小为497bp,CAV-2为1019bp,CPV为719bp;细胞和其它相关病毒对照均无扩增带。上述PCR产物经用限制性内切酶酶切和克隆测序,结果均与相应病毒的应有条带和序列相同。敏感性比较试验结果表明,联合PCR比用细胞培养分离病毒敏感。将联合PCR应用于15份CAV和CPV细胞培养物,5份CAV-1、1份CAV-2和3份CPV人工感染犬病料以及30份临床病料检测,并与电镜负染、HA/HI及病毒分离等方法的结果进行比较,结果显示,联合PCR的检出率和病毒分离结果一致,高于电镜负染和HA/HI试验。以上结果说明:CAV-1/CAV-2和CPV联合PCR不仅具有很好的特异性和敏感性,而且可以在短时间内(2 5h～3h)同时鉴定出上述三种病毒,因此具有良好的实验室诊断和临床应用价值。
- 王雷夏咸柱卫广森扈荣良刘维全邹啸环黄耕
- 关键词：犬腺病毒犬细小病毒
- 用PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究被引量：7
- 2002年
- 根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒 (ICHV)标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同 ,按照引物设计的原则 ,设计合成了一对通用引物。该对引物可由ICHV强毒株扩增出 569bp的片段 ,而弱毒株可扩增出 2 4 4bp的片段。对PCR产物分别进行电泳、酶切和测序 ,证明PCR产物片段大小、酶切位点和核苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒 (CAV 2 )强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增 ,说明具有良好的特异性。其检测到的病毒量分别为 1 5TCID50 、 31TCID50 、说明该技术具有很高的敏感性。可用于ICHV强。
- 王雷夏咸柱卫广森邹啸环刘维全扈荣良黄耕
- 关键词：PCR毒力鉴定传染性肝炎病毒毒株
- 犬瘟热病毒小熊猫株的驯化致弱及其免疫研究被引量：3
- 2001年
- 犬瘟热病毒 (CDV)小熊猫低代强毒 (LPV9)经MDCK、CRFK和Vero细胞分别传至 2 1、2 0、2 0代 ,并采用蚀斑技术对传代毒进行克隆。病毒每传 2 0代进行 1次致弱程度鉴定 ,结果表明LPV9随所传代数增加 ,对幼犬的致病性逐渐减弱 ,至第 70代 (LPV70 )时 ,对接种犬失去了致病性。 2个组犬按每只 1× 10 4 TCID50 ,分别接种LPV70 和疫苗弱毒复壮株R 2 0 /8,14d后前者刺激接种幼犬产生的中和抗体效价均大于 1∶10 0的完全保护价 ,而后者则有低于 1∶10 0的 (攻毒保护率分别为 5 /5和 4/5 ) ,故驯化致弱的LPV70 免疫原性要好于疫苗弱毒复壮株R 2 0 /8。将LPV70 分别在细胞上连续 2 0代、在幼犬连续传代 5代后 ,其细胞培养物及从动物体内回收的病毒免疫原性及安全性能够稳定遗传。
- 何洪彬夏咸柱黄耕范泉水邱薇余春乔军徐黎王雷
- 关键词：犬瘟热病毒驯化弱毒疫苗
- 犬2型腺病毒E3区表达载体的构建被引量：1
- 2003年
- 利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达,结果显示,pBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后,于36h即可观察到荧光,72～96h无明显差别,传3代后仍可见表达荧光的细胞,pBE3LCRgp质粒转染DK细胞后,于48～96h用间接免疫荧光染色可检测到糖蛋白的表达,而pBE3LGFP和pBE3Rgp质粒转染DK细胞后经检测均无表达,表明构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的基因的表达,但利用外源性启动子可使外源基因获得良好表达。
- 邱薇夏咸柱范泉水扈荣良王雷高玉伟张守峰孙阳尹惠琼
- 关键词：犬2型腺病毒
- 犬2型腺病毒E1转化细胞系的特性研究被引量：1
- 2003年
- 对筛选到的一株CAV-2 E1转化细胞(DK/E1)进行了初步的特性研究。以DK细胞为对照,观察到转化细胞的形态与DK细胞有明显区别,细胞变长,易聚集生长。通过测定DK及DK/E1细胞分别在2％、5％和10％牛血清培养基中的生长曲线,结果发现DK/E1细胞的生长速度比DK细胞快。用蚀斑和TCID50测定了病毒在DK和DK/E1细胞上的病毒滴度,结果表明DK/E1细胞产生的病毒蚀斑比DK细胞的大,TCID50测得的病毒滴度比DK细胞产生的病毒滴度高。CAV-2全基因组DNA对DK/E1细胞和DK细胞的转染试验结果表明,5μg和10μg的CAV-2DNA转染的DK/E1细胞,分别在转染后第14天和第11天均出现了典型的腺病毒细胞病变,而相同量CAV-2 DNA转染的DK细胞未出现病变,说明DK/E1细胞有助于CAV-2 DNA的复制和病毒粒子的包装。在DK/E1细胞内的重组试验表明,DK/E1细胞也有利于重组病毒的产生。以上转化特性在DK/E1细胞传至80代时仍保持不变,说明本试验获得了一株CAV-2 E1基因的转化细胞系。
- 邱薇夏咸柱范泉水扈荣良王雷高玉伟孙阳尹惠琼李刚山
- 关键词：犬2型腺病毒病毒载体转染
- 犬瘟热病毒的蚀斑克隆试验被引量：1
- 2000年
- 对血清、胰酶以及染色时间等可能影响犬瘟热病毒蚀斑形成的条件进行了摸索。结果发现 ,对必须同步接毒的CDV小熊猫 (LP)株来讲 ,其形成蚀斑的最佳条件是 :同步接毒 10h后 ,加入血清含量为 2 %的无酚红的DMEM营养琼脂 ,第 5d时 ,加入 1/ 5体积的胰酶含量为 1/ 80 0 0的含中性红的DMEM营养琼脂染色 ,于第 6d时 ,便可形成蚀斑。挑选不同大小的蚀斑 ,克隆 3次后 ,获得了蚀斑直径为 0 .4～ 0 .6 ,0 .6～ 0 .8及 0 .7～ 0 .
- 何洪彬夏咸柱黄耕范泉水邱薇余春乔军徐黎王雷
- 关键词：犬瘟热病毒克隆
- 犬2型腺病毒E1转化细胞的建立被引量：1
- 2003年
- 为建立能表达犬 2型腺病毒 (CAV 2 )E1基因的辅助细胞 ,本研究用含CAV 2E1基因的重组质粒pc E1t对DK细胞进行转染 ,经G41 8的筛选 ,得到 2 6个细胞克隆。用CAV 2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RT PCR检测 ,PCR结果表明转染后的细胞克隆都能扩增出 5 3 6bp的特异性片段 ,但仅有 6株为RT PCR强阳性 ,能扩增出 6 5 2bp的特异带。再对RT PCR强阳性的细胞克隆进行Westernblot分析 ,最终挑选到一个既能转录E1A基因 ,又能表达E1B 1 9kD蛋白的克隆细胞株 (DK E1 )。
- 邱薇夏咸柱范泉水扈荣良王雷高玉伟张守峰孙阳杨美峰
- 关键词：犬2型腺病毒E1基因细胞克隆
- 猪瘟免疫失败原因概述被引量：8
- 2001年
- 针对近年我国时常发生的猪瘟免疫失败现象 ,从疫苗、对疫苗的使用方法、猪瘟病毒本身变异以及免疫程序免疫方法等几方面对发生免疫失败的原因进行分析 ,并对免疫失败的防制措施提出一些看法。
- 王雷卫广森胡钧夏咸柱
- 关键词：猪瘟疫苗免疫失败病毒变异免疫程序
- 犬2型腺病毒E3区的克隆及其缺失改造
- 2002年
- 为构建可用于插入外源基因的犬 2型腺病毒 (CAV - 2 )E3区表达载体 ,用KpnI对CAV - 2DNA进行酶切 ,回收含E3区的KpnIB片段并将其克隆到质粒pBluescriptIIKS(+)中 ,获得了正向和反向插入的重组质粒 ,并对E3区进行了序列测定。根据E3区两末端的序列合成了两对突变引物 ,每对引物分别在E3区的 2 4 986bp及 2 6 36 0bp处各引入一个BglⅡ酶切位点。以E3区正向插入的重组质粒pBE3- 2为模板 ,分别用两对突变引物经PCR法连续进行两次点突变 ,通过BglII酶切 ,最终筛选到在E3区的首尾两端各引入一个BglII酶切位点的突变重组质粒pBEM。利用BglII酶切将E3区切除约 1 4kb的片段 ,然后在缺失部位插入了人工接头 ,接头设计了 5个单一酶切位点 ,得到的pBE3L质粒可用于外源基因的插入。
- 邱薇夏咸柱范泉水扈荣良何洪彬余春王雷高玉伟张守峰
- 关键词：犬2型腺病毒克隆
- 应用致敏SPA菌体提高CAV/CPV PCR检出率的研究
- 为消除粪便等病料中的PCR干扰物质，提高犬腺病毒与细小病毒(CAV-CPV)联合PCR检出率，根据免疫吸附的原理，应用CAV-CPV高免血清致敏含A蛋白的金黄色葡萄球菌，制成致敏SPA菌体免疫吸附剂，以此免疫吸附提取粪便...
- 王雷夏咸柱卫广森户荣良邹啸环黄耕高玉伟贺文琦
- 关键词：动物医学PCR方法
- 文献传递
