王砚范
- 作品数：16 被引量：90H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家牛传染性胸膜肺炎参考实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ基因的序列分析被引量：2
- 2003年
- 根据基因库发表的丝状霉形体丝状亚种SC型 (MmmSC)脂蛋白LppQ基因序列设计引物 ,采用PCR对国内MmmSC分离株HVRI X株的脂蛋白LppQ基因进行扩增 ,将扩增产物与pMD18 T载体连接并测序。核苷酸序列比较结果显示 ,HVRI X株的LppQ基因序列与基因库发表的核苷酸序列同源性为 99.8% ;由其推导的氨基酸序列同源性为 99.3%。
- 高玉龙李媛王砚范辛九庆
- 关键词：PCR传染性胸膜肺炎
- 减蛋综合征病毒的分离与初步鉴定
- 1998年
- 减蛋综合征病毒的分离与初步鉴定王砚范宋晓华李维义（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）从一产蛋突然下降的蛋用鸡群中分离到１株与减蛋综合征（ＥＤＳ）相似的腺病毒。该病毒能凝集鸡的红细胞，并且可在鸭胚尿囊腔中复制出高效价的病毒。１材料和方法１．１...
- 王砚范宋晓华李维义
- 关键词：减蛋综合症病毒
- 绵羊肺炎支原体PCR诊断方法的建立被引量：5
- 2005年
- 李媛辛九庆高玉龙王砚范
- 关键词：绵羊支原体生化试验血清学鉴定
- 丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白QN末端基因的表达、纯化与抗原性分析
- 2005年
- 为了表达丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)中国分离株HVRIⅩ脂蛋白Q(LppQ)N末端基因,将该基因经PCR扩增后克隆至原核表达载体pET32a中,经酶切、PCR、测序证实获得了重组表达质粒,转化Escherichia coliBL21(DE3)菌,经IPTG诱导后获得可溶性融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的53.7%,用Ni-NTAHis.Bind纯化试剂盒纯化后,蛋白纯度达95%以上。表达蛋白经Western blot检测其抗原活性,结果表明纯化蛋白可与CBPP标准阳性血清发生强烈的反应,而与阴性血清不发生反应。
- 高玉龙辛九庆李媛王砚范
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎
- 应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法被引量：7
- 2006年
- 目的丝状支原体丝状亚种SC(MycoplasmamycoidessubspmycoidesSC,MmmSC)是引起牛传染性胸膜肺炎(contagiousbovinepleuropneumonia,CBPP)的病原体。成熟的脂蛋白LppQN端是亲水性的,在自然感染和人工感染时,特异性免疫反应产生早,持续时间长,抗体滴度高,因此有理由相信脂蛋白LppQN端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原。方法由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸(Trp),而在细菌中则为终止密码子,故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRIⅩ的lppQ基因进行原核表达,利用重组抗原建立间接ELISA方法。结果序列分析表明,将lppQ基因第198位的A成功突变为G,并将突变后的脂蛋白LppQN端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,构建了原核表达载体。重组菌经诱导后,表达出了分子量约为42kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白,纯化后蛋白质纯度高达95%,Westernblot结果显示,重组蛋白具有很好的免疫活性。将纯化的蛋白质稀释至0.35μg·ml-1,包被酶标反应板,优化反应条件,P/N为4.8(0.934/0.193)。应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0.376,敏感性为95.8%(46/48),特异性为98.9%(161/163)。应用间接ELISA和补体结合试验(CFT)对来自3个省自治区3817头份牛血清进行了检测。结论Kappa值为0.63,两种方法存在中、高度一致性。
- 辛九庆高玉龙李媛王砚范钱爱东
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎突变ELISA
- 丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建
- 2006年
- 根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppQ基因序列设计引物,从MmmSC HVRI X株中扩增出了LppQ N末端基因,并将其分别克隆到pUC18和pUC19上,利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG,经克隆与序列测定证实突变成功后,将已突变的LppQ N末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,成功地构建了LppQ N末端基因原核表达载体pET32a-LppQ,为其下一步体外表达奠定了基础。
- 高玉龙辛九庆李媛王砚范
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎脂蛋白定点突变
- 丝状支原体丝状亚种SC生物型PCR检测方法的建议被引量：5
- 2002年
- 建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型 (MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型(MmmSC)相关核苷酸序列 ,设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物 ,用于鉴别丝状支原体族 6个成员 ,对MmmSC、MmmLC扩增出与预期结果相符的 4 6 2bp片段 ;而SC1、SC2是针对MmmSC的一对特异性引物 ,只能对MmmSC扩增出 2 77bp的片段 ,经过VspI、Bsp14 3I和Dral三种限制性内切酶鉴定与预期结果相符 ,而不能扩增出MmmLC型Y_goat代表株 ,说明具有非常好的特异性。对MmmSC进行的敏感性试验显示SC1、SC2引物能够检测到 10 0个CFU ,具有非常高的敏感性。
- 辛九庆高玉龙杨婉容王砚范
- 关键词：PCR检测方法传染性胸膜肺炎病原
- 我国部分省区牛传染性胸膜肺炎流行病学调查被引量：8
- 2005年
- 辛九庆李媛高玉龙王砚范
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎流行病学调查世界动物卫生组织丝状支原体纤维素性生物型
- 丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株LppB基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2005年
- 李媛辛九庆觹高玉龙王砚范
- 关键词：丝状支原体中国分离株B基因LPP牛传染性胸膜肺炎
- 丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQN末端基因克隆与序列分析被引量：2
- 2004年
- 脂蛋白 L pp Q是丝状霉形体丝状亚种 SC型 (Mm m SC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。 L pp Q N末端域具有良好的免疫原性 ,在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的 L pp Q基因序列设计引物 ,用 Pyrobest TM高保真 DNA聚合酶从 Mmm SC HVRI X株中扩增出了 L pp Q N末端基因序列 ,并进行了克隆与序列测定。核苷酸序列比较结果显示 ,HVRI X株的 L pp Q N末端基因序列与国外发表的序列同源性为 99.7% ,由其推导的氨基酸序列同源性为 99.1% ,为脂蛋白 L pp Q
- 辛九庆高玉龙李媛王砚范
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎N末端基因克隆
