王琳琳
- 作品数：8 被引量：37H指数：5
- 供职机构：郑州大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CRISPR/Cas系统间隔序列同源质粒耐药信息与志贺菌耐药的关系被引量：9
- 2016年
- 目的比较志贺菌耐药信息与其spacer同源质粒或噬菌体耐药信息的关系。方法应用CRISPR Target和BLAST寻找spacer同源质粒和噬菌体,根据登记号在NCBI或GenBank中寻找目标质粒或噬菌体上的耐药信息;应用Bioedit软件寻找GenBank中志贺菌的的耐药信息。结果数据库及临床分离株志贺菌共52条spacer中有7个spacer与4个携带耐药基因的质粒同源;间隔序列CRISPR2-mel-3同源质粒pUMNF18_IncFV及携带该间隔序列的志贺菌mel-ss1998011/zz、mel-ss1998024/zz、mel-sf2005082/sx、mel-sf2013004/bj均含有相同耐药基因blaTEM、aadA2和dfrA12,间隔序列CRISPR-Q1-S1、CRISPR-Q4-S1同源的质粒pM5A24P及该间隔序列所在志贺菌sd1012均携带耐药基因ampC和tetB;间隔序列CRISPR3-mel-33同源质粒plasmid:5与该间隔序列所在志贺菌mel-sf2000102/zz均携带相同耐药基因ampH、mrdA,且二者均携带毒力相关基因yafO、yafN、virK、ldrB、ychO。该质粒上还存在I-F型CRISPR/Cas系统。结论志贺菌spacer同源质粒与该菌耐药信息分布存在相似性;CRISPR可能对志贺菌的耐药和毒力实现共调控。因此推测在最初前间隔序列整合到CRISPR基因座形成一个新的间隔序列的过程中,志贺菌可能将携带前间隔序列外源遗传物质的其他基因片段如耐药基因和毒力基因也整合到志贺菌基因组中,影响其生存及性状。
- 张冰王鹏飞段广才梁文娟洪丽娟王琳琳郭向娇杨海燕郗园林
- 关键词：志贺菌耐药
- 志贺菌成簇的规律间隔的短回文重复序列系统结构特征的生物信息学分析被引量：5
- 2015年
- 利用生物信息学方法探索志贺菌成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)系统结构的特征。本文通过BLAST、序列比对、RNA二级结构预测等方法对志贺菌CRISPR进行研究。结果显示:志贺菌的4个群中均发现有CRISPR结构,其侧翼上、下游序列可分为相同组群,在leader序列中存在具有回文性质、相对保守的motif;侧翼序列与重复序列具有相同的分组,重复序列有一定的保守性,可以形成以"茎"为主和以"环"为主两类不同的RNA二级结构;间隔序列与质粒或噬菌体有一定的同源性。本研究表明重复序列与侧翼序列间存在相关性,重复序列可能作为一种识别机制来介导外源元素与Cas蛋白间的相互作用。
- 王鹏飞王颖芳段广才薛泽润王琳琳郭向娇杨海燕郗园林
- 关键词：志贺菌侧翼序列
- 志贺菌CRISPR的检测及其与耐药的关系被引量：15
- 2015年
- 【目的】检测志贺菌成簇规律间隔的短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR),并分析其与志贺菌耐药的关系。【方法】根据CRISPR DB数据库公布的志贺菌确定的CRISPR结构序列CRISPR-S2、CRISPR-S4和可能的CRISPR结构序列CRISPR-S1、CRISPR-S3设计四对引物,对60株志贺菌进行PCR扩增。采用CRISPR Finder分析CRISPR,采用改良K-B药敏纸片法检测志贺菌耐药情况,并分析CRISPR-S4与耐药的关系。【结果】确定的CRISPR结构的总阳性率为95%,四个CRISPR位点组成12种CRISPR谱型(A-L),除K型外均含确定的CRISPR结构,新发现1种重复序列和12种间隔序列。60株志贺菌的多重耐药率为53.33%。CRISPR-S4阳性菌株与阴性菌株之间,耐药的分布差异无统计学意义,但多重耐药菌株和耐TE菌株CRISPR-S4的重复序列多为R4.1,其3'末端缺失碱基AC;多重耐药菌株CRISPR-S4的间隔序列多为Sp5.1、Sp6.1和Sp7。【结论】CRISPR在志贺菌中广泛分布。CRISPR重复序列的变异和间隔序列的多样性可能与志贺菌耐药有关。
- 王琳琳王颖芳段广才薛泽润郭向娇王鹏飞郗园林杨海燕
- 关键词：志贺菌多重耐药CRISPR
- 志贺菌成簇规律间隔短回文重复序列相关蛋白基因cas1和cas2研究被引量：8
- 2014年
- 目的：研究成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）相关蛋白基因cas1和cas2在志贺菌中的分布，并分析cas1和cas2基因突变与细菌耐药的关系。方法采用PCR扩增196株志贺菌cas1和cas2基因。对3株志贺菌（Z23、2003135、2008113）的cas2、cas1（a）和cas1（b）基因进行测序，分析其突变与耐药之间的关系。结果196株志贺菌均检出CRISPR相关蛋白基因cas1和cas2。测序结果显示，cas2的一致性为96.44%，cas1（a）的一致性为97.61%，cas1（b）的一致性为96.97%。菌株2003135的cas1（b）基因有2个突变位点：3177129位点（C→G）及3177126位点（G→C），Z23、2008113对应位置没有突变。药敏结果显示菌株2003135的耐抗生素种类和耐抗生素数目均大于菌株Z23、2008113。结论志贺菌中CRISPR基因广泛存在。cas1（b）基因突变菌株与未突变株比较，耐药性增强。cas1（b）基因突变可能是引起耐药程度不同的原因之一。
- 薛泽润王颖芳段广才王鹏飞王琳琳郭向娇郗园林
- 关键词：志贺菌耐药
- 志贺菌成簇的规律间隔短回文重复序列的检测及同源性分析被引量：4
- 2015年
- 目的:检测志贺菌成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR),并与GenBank全基因组中志贺菌重复序列和间隔序列对比,分析其结构特征及同源性。方法:利用PCR法扩增获得志贺菌CRISPR,采用生物信息学方法对重复序列及间隔序列进行同源性分析;运用多序列比对分析间隔序列特点及其与侧翼序列间的联系;BLAST分析间隔序列与质粒和噬菌体的同源性;weblogo分析重复序列碱基频率及RNAfold预测其RNA二级结构;重复序列的同源聚类分析并用BLAST分析重复序列与其他细菌的同源性。结果:被测3株临床志贺菌及9株全基因组志贺菌中均含有不同数量CRISPR;同一个CRISPR中,间隔序列有的相似、有的完全不同,某些CRISPR间隔序列的部分序列与CRISPR侧翼序列存在同源性,某些间隔序列可能是信息基因和操纵基因的拼接重组;重复序列保守性不一致,可能与细菌进化存在一定的联系,重复序列碱基的差异影响茎的长度,从而影响二级结构的稳定性及CRISPR的功能。重复序列与个别远缘菌种具有较高的同源性。结论:志贺菌存在多样的CRISPR结构,不同CRISPR的重复序列保守性不同。某些间隔序列部分与CRISPR侧翼序列同源,某些间隔序列是多基因拼接而成。
- 王鹏飞王颖芳段广才王琳琳郭向娇薛泽润郗园林杨海燕
- 关键词：志贺菌同源性
- 临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布及其与毒力基因的关系被引量：8
- 2015年
- 【目的】了解临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布特征并分析其与毒力基因的关系。【方法】以聚合酶链式反应(PCR)方法,采用10对引物分别对57株临床分离志贺菌中CRISPR1、cas2-cas1、cas6e-cas5、cas7、cse2、cse1-cas3基因和毒力基因ipaH、ial、ipaBCD、virA进行检测。对CRISPR1的PCR结果进行测序,并用CRISPRfinder在线软件对CRISPR1基因座进行分析。通过卡方检验初步分析CRISPR/Cas系统与毒力基因的关系。【结果】测序结果显示,CRISPR1基因座中间隔序列数目较少且在不同菌株间一致性较高;57株志贺菌中,84.2%(48/57)的志贺菌中可检测到CRISPR/Cas系统,其中68.8%(33/48)的志贺菌中cas6e-cas5基因或(和)cse2基因中发现插入序列;毒力基因ipaH、ial、virA、ipaBCD的检出率依次为100%、100%、98.2%和87.7%;毒力基因ipaBCD的阳性率与活性CRISPR/Cas系统的分布无关(P>0.05)。【结论】CRISPR/Cas系统广泛存在于临床分离志贺菌中;部分cas基因中有插入序列;并未发现志贺菌中活性CRISPR/Cas系统与毒力基因的分布有关。
- 郭向娇王颖芳段广才王琳琳王鹏飞杨海燕郗园林
- 关键词：志贺菌聚合酶链式反应毒力基因
- 志贺菌中成簇规律间隔短回文重复序列的分子分布特征被引量：1
- 2015年
- 目的探索志贺菌中成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）的分布。方法共选择志贺菌分离株52株，其中河南41株，江西6株，北京5株。利用PCR扩增志贺菌的4个CRISPR位点（S1、S2、S3、s4），产物送测序，分析CRISPR的重复序列和间隔序列。结果志贺菌的4个CRISPR位点阳性率分别为33．69％（S1）、50．00％（S2）、82．69％（S3）和73．08％（S4）；S1和S3包括2种亚型，S2有3种亚型，S4包括4种亚型。2004年前分离的河南分离株中检出s1位点，2004年后分离的菌株中均未检出该位点；S2、S3和S4在两组的分布没有差异。结论志贺菌各CRISPR位点含有不同亚型，河南分离株S1的分布与细菌分离时间有关，而S2、S3及S4和分离时间无关。
- 薛泽润王颖芳段广才杨海燕郗园林王鹏飞王琳琳郭向娇
- 关键词：志贺菌分子流行病学
